Полиоксидоний детям 3 лет отзывы: Полиоксидоний — инструкция по применению, схемы приема, состав и формы выпуска на официальном сайте

Содержание

Препарат Полиоксидоний раствор для иньекций. Отзыв. Эффективность

Давненько я не пополняла раздел «Здоровье». Думала, что бы эдакое рассказать. Решила про модный нынче препарат Полиоксидоний.

Сейчас ведь в тренде разговоры про аллергии, про повышение иммунитета. И не только разговоры.

Случилось так, что я оказалась непосредственным объектом борьбы за иммунитет. 

Ну, давайте по порядку.

Иммуностимулирующий препарат Полиоксидоний. История назначения

К аллергологу иммунологу я обращаюсь регулярно. «Почему?» — спросите вы. «Чихаю», — отвечу я. И еще насморк. И еще герпес выскакивал раз в пару месяцев. Моя история борьбы с ним здесь. Замучилась, в общем. Пила от герпеса «Валвир» курсом, сделала курс «Виферона». Пришла пора сдать анализы.

Это небесплатно, но и недорого. Часть анализов удалось сдать за счет страховой компании по полису ДМС.

Что выяснилось: некоторые показатели выглядят устрашающе. Говорят о том, что иммунитет я где-то потеряла.

Как следствие, было назначено лечение.

Причем доктор обратила мое внимание на то, что препарат Полиоксидоний покупать надо исключительно в виде раствора для иньекций. Тот, который в таблетках настойчиво, если не сказать назойливо, впаривают нам в телевизионной рекламе, имеет нулевую эффективность. Заметьте, это сказал доктор!

Препарат Полиоксидоний — иммуномодулятор или иммуностимулятор?

Немного теории. Для того, чтобы понимать отличие одного от другого, надо обратить внимание на второй корень этих составных слов. 

Иммуномодулятор производит модуляции, вмешивается, возможно, грубо, в иммунную систему. Он борется с вирусами и бактериями, «наперегонки» с это самой иммунной системой. Он уравновешивает составляющие иммунной системы путем уменьшения активности одних и усиления активности других.

Иммуностимулятор стимулирует, заставляет работать ее, как надо, активизирует функции того или иного звена иммунитета. Так что с этой точки зрения вроде бы Полиоксидоний — супер, эдакие костыли для измученного герпесом организма.

Мне понравилась на одном из сайтов история, позволяющая понять разницу между ними:

Едет цыган на уставшей лошади и, чтобы она не сбавляла темп езды, подгоняет ее хлыстом. Вопрос: «Долго ли его лошадь провезет?» Конечно, нет, она полностью истощится. Другое дело — дать ей еды, воды и отдых. Тогда лошадка еще очень долго прослужит вам. Так и с препаратами. Иммуностимулятор заставляет выдавать последние резервы вашего организма, что опасно и вредно. В нашем примере иммуностимулятором является цыган.

Исходя из этого, надо думать, что препарат Полиоксидоний — зло?

С другой стороны, по сведениям другого сайта, 

По заявлению производителя, обладает иммуностимулирующим и дезинтоксикационным действием. Входит в российский реестр российский перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, а также в Расстрельный список препаратов. Используется в составе противогриппозной вакцины Гриппол. Эффективность и безопасность препарата не подтверждены клиническими исследованиями, соответствующими современным стандартам.

Опять — зло.

С третьей стороны, по информации третьего сайта,

это препарат отечественного производства, который отвечает всем современным требованиям: он обладает достаточно выраженным терапевтическим эффектом при почти полном отсутствии побочных эффектов. Применять его можно как взрослым, так и детям. Одним из главных биологических свойств препарата является его способность стимулировать антиинфекционную резистентность организма.

Круто! Полиоксидоний нам поможет!

Как всегда бывает, истина где-то рядом. Поэтому прислушалась с рекомендациям доктора и решила провести курс лечения. Хуже-то не будет!

Компоненты лечения

Собственно препарат Полиоксидоний. Произведен в Подольском районе.

Мне было назначено 4 укола через день и 6 — дважды в неделю. 10 флаконов.

Из перспектив применения препарата:

  • Завершены клинические испытания вакцины против гепатита A на основе Полиоксидония.
  • Рассматривается возможность создания вакцины против СПИДа на основе Полиоксидония.

Как говорится, «есть многое, друг мой, Гораций…»

Насчет «отпускается по рецепту» — по-моему, погорячились. Сейчас фармацевты готовить продать абсолютно все, что пожелаете, если это только не препарат из списка А.

Храним в холодильнике.

Полиоксидоний внутри флакона выглядит как маленькая подушечка. Это сухое вещество. Чтобы сделать укол, придется развести.

Разводить лучше физраствором. Вообще-то Полиоксидоний болючий-щипучий, но при разведении хлоридом натрия получается терпимым.

Я покупала раньше только физраствор для ингаляций в большом флаконе.

Какое счастье, что сейчас выпускают специальные ампулы для инъекций. Даже не ампулы, а пластиковые флаконы. Открываются рукой — головка просто сворачивается. Стерильно. Готово к применению. Красота!

Что еще: спиртовые салфетки для обработки поверхности, шприц с иголкой. Поехали!

Препарат Полиоксидоний. Курс инъекций

Во-первых, меня напугали, что будет больно. Во-вторых, курс инъекция входит в мою программу страхования. Поэтому часть уколов я сделала в медцентре, часть — сама.

Берем Полиоксидоний, физраствор, спирт, салфетки и шприц.

Как уже говорила, флакон физраствора открывается легким движением руки. 

Раствор набирается в шприц.

Выливаем во флакон с Полиоксидонием. Закрываем флакон резиновой крышечкой. Перемешиваем.

Набираем обратно в шприц, стравливаем воздух.

Колем в мышцу. Если есть, кому уколоть, можно в ягодицу. Я себе и в бедро колю нормально. 

Иногда попадаю в сосуд, не без этого. Ничего страшного. Стороны чередуем.

Заклеиваем место укола пластырем и спокойно живем три дня до следующего укола.

Обещания производителя о полезности и эффективности

Препарат Полиоксидоний успешно борется с:

  • хроническими рецидивирующими инфекционно-воспалительными заболеваниями, не поддающимися стандартной терапии;
  • туберкулезом;
  • острыми и хроническими аллергическими заболеваниями;
  • аутоимунными заболеваниями;
  • постоянными очагами хронической инфекции, к которой, к слову сказать, относится мой герпес; 
  • ревматоидным артритом, длительно леченным иммунодепрессантами;
  • интоксикационной, теоретически выводит из организма токсины, соли тяжелых металлов;
  • со снижением иммуносупрессивного действия лекарственных препаратов после химио- и лучевой терапии при онкологических заболеваниях.

Полиоксидоний хорош для:

  • активации процессов регенерации при переломах, ожогах, трофических язвах;
  • профилактики гриппа и ОРЗ.

Вот инструкция, если есть желание ознакомиться.

И для физраствора инструкция, если надо.

Ожидания и реальность

Какой результат я ожидала от Полиоксидония? Я хотела:

  • перестать безудержно чихать,
  • перестать заливаться соплями (извините, это признаки аллергического ринита),
  • избавиться от мучительного герпеса, который в течение 2015 года меня мучил не менее 5 раз, примерно с периодичностью раз в два месяца,
  • повысить иммунитет (хм, это нечто эфимерное… то, о чем говорят, но не могут потрогать).

Перед курсом Полиоксидония я прошла курс Виферона. Улучшений не почувствовала.

Во время лечения Полиоксидонием я тоже ничего не чувствовала, кроме того, что на руке в двух местах появилась какая-то пигментация. После окончания курса прошла. Врач сказал, так организм может реагировать на препарат.

Что имеем в сухом остатке.

  1. За 2016 год герпес меня беспокоил 2 раза. Не мучительно. Проходил, как и положено, за неделю. Причем я решила поставить эксперимент. Первый раз я душила его (герпес) Валвиром, второй раз не принимала ничего. Время, за которое он прошел, одинаковое. Так что заявление, что препарат Полиоксидоний «уменьшает число и длительность обострений герпеса» субъективно могу считать верным.
  2. Полиоксидоний применяют как профилактическое средство для предупреждения сезонных вирусных инфекций. Обычно я ими не болею. По прошествии года после курса лечения, уже в феврале 2017, умудрилась подцепить «вирусный трахеобронхит». Думаю, это не связано, у меня нет склонности к сезонным заболеваниям. Но поскольку в течение года не болела, это утверждение тоже можно считать верным.
  3. Препарат Полиоксидоний применяют при аллергических и аутоиммунных заболеваниях. А вот здесь — пусто. Чихать я ни на день не переставала.
  4. Ускоряет процессы регенерации. Может быть… Как раз в то время мне удалили половину ногтя, так он за 4 месяца стал, как новый.

 Получается 50 на 50. Мне уж очень хотелось проверить, улучшились ли мои интерфероновые показатели, я попросила доктора выписать направление на анализ. Но… получила отказ. Она сказала, что «так» это не работает, и препарат должен какое-то время действовать в организме. Не вижу причин не верить. Но все это очень странно…

Если будут какие-то новые данные, если пройду обследования, обязательно допишу статью, чтобы поделиться знаниями с вами, дорогие читатели.

Tags: Иммунитет

Терапия » Опыт профилактики новой коронавирусной инфекции (COVID-19) у медицинских работников

Опыт профилактики новой коронавирусной инфекции (COVID-19) у медицинских работников

DOI: https://dx.doi.org/10.18565/therapy.2020.6.93-102

В.П. Вавилова, А.М. Вавилов, Н.К. Перевощикова, С.А. Царькова, О.И. Пивовар, И.И. Климова

1) ФГБОУ ВПО «Кемеровский государственный медицинский университет» Минздрава России;
2) ФГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России;
3) Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей – филиал ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России

Цель исследования – оценка профилактической эффективности препарата Полиоксидоний у медицинских сотрудников, работающих с пациентами, больными COVID-19.

Материал и методы. Основная группа (n=100) включала медицинских работников, которые принимали препарат Полиоксидоний 12 мг (таблетки под язык) 1 раз/сут в течение 30 дней. Контрольную группу (n=50) составили медицинские работники, которые не принимали лекарственные профилактические препараты. Для обеих групп проводили оценку количества заболеваний ОРВИ и COVID- 19 за период приема препарата. Определялась активность лизоцима и содержание секреторного иммуноглобулина А (sIgA). Для оценки психологического состояния использовались различные шкалы тревожности и депрессии, сравнение проводилось с группой внешнего контроля медицинских работников амбулаторного звена (n=47), не контактирующих с пациентами с COVID-19.

Результаты. В основной группе медицинских работников в период сублингвального применения Полиоксидония не отмечалось ни одного случая заболевания ОРВИ и COVID-19, при этом в контрольной группе процент заболевших ОРВИ составил 8%, а число заболевших COVID-19 – 4%. Кроме того, в группе приема Полиоксидония было показано значительное увеличение показателей местного иммунитета слизистой оболочки верхних дыхательных путей – лизоцима и sIgA, а также улучшение психологического состояния медицинских работников.

Заключение. Медперсонал, работающий с пациентами с СOVID-19, имеет сниженные показатели мукозального иммунитета, обладает высоким уровнем тревожности и депрессии, что при работе в высокоинфицированной среде повышает риск заболеваемости ОРВИ и COVID-19. Применение Полиоксидония у медработников привело к повышению местной иммунной защиты слизистой оболочки носоглотки и повлияло на снижение заболеваемости ОРВИ и COVID-19, а также позволило значительно снизить уровень тревоги и депрессии, что позволяет рекомендовать его в качестве средства профилактики в период COVID-19.

Литература


  1. Nguyen L.H., Drew D.A., Graham M.S. et al. Risk of COVID-19 among front-line health-care workers and the general community: a prospective cohort study
  2. Вавилова В. П., Вавилов А.М., Черкаева А.Х. Возможности современной терапии острых респираторных вирусных инфекций у детей. Consilium Medicum. Педиатрия. 2015; 3: 62–67.
  3. Костинов М.П. Иммунопатогенные свойства SARS-CoV-2 как основа для выбора патогенетической терапии. Иммунология. 2020; 1: 83–91.
  4. Yang Y., Koh D., Ng V. et al. Self perceived work related stress and the relation with salivary IgA and lysozyme among emergency department nurses. Occup Environ Med. 2002; 59: 836–41. doi: 10.1136/oem.59.12.836.
  5. Лусс Л.В. Роль и место иммуномодулирующей терапии в лечении инфекционно-воспалительных заболеваний, протекающих на фоне вторичной иммунной недостаточности. Медицинский совет. 2013; 11: 78–80.
  6. Временные клинические рекомендации Минздрава России «Лекарственная терапия острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) в амбулаторной практике в период эпидемии COVID-19» от 16.04.2020. URL: https://static-0.rosminzdrav.ru/system/attachments/attaches/000/050/033/original/RESP_REC_V2. pdf?fbclid=IwAR1tuUeeSjMnRdhjtGmEmACHwIaC3TpbEGv4baOKAxjYGXoj8K54wzxNSOw (дата обращения – 09.09.2020).
  7. Efficacy and safety of Polyoxidonium® in hospitalized patients with coronavirus disease covid-19. URL: https://clinicaltrials.gov/ct2/results?cond=&term=AZOXIMER+BROMIDE&cntry=&state=&city=&dist= (date of access – 07.09.2020).
  8. Харит С.М., Галустян А.Н. Азоксимера бромид – безопасный и эффективный препарат при лечении острых респираторных инфекций верхних дыхательных путей у детей: обзор результатов двойных слепых плацебо-контролируемых рандомизированных клинических исследований II и III фазы. Consilium Medicum. Педиатрия. 2017; 2: 55–61.
  9. Михайленко А.А., Макаренко О.С., Самошин О.А., Сизякова Р.И. Профилактика гриппа и ОРЗ с помощью сублингвального применения полиоксидония®. Иммунология. 2005; 4: 215–17.
  10. Скачков М.В. Безопасность и эффективность Полиоксидония для профилактики ОРЗ у длительно и часто болеющих пациентов. Русский медицинский журнал. 2008; 22: 1492–1493.
  11. Костинов М.П., Свитич О.А., Маркелова Е.В. Потенциальная иммунопрофилактика COVID-19 у групп высокого риска инфицирования. Временное пособие для врачей. М., 2020; с. 83.
  12. Матвеева Л.А. Местная защита респираторного тракта у детей. Томск. 1993; 276 c.
  13. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. М.: Медиа Сфера, 2006; 305 с. ISBN 5-89084-013-4.
  14. Keremi B., Beck A., Fabian T.K. et al. Stress and salivary glands. Curr Pharm Des. 2017; 23(27): 4057–65. doi: 10.2174/1381612823666170215110648.
  15. Gholami N., Sabzvari B.H., Razzaghi A., Salah S. Effect of stress, anxiety and depression on unstimulated salivary flow rate and xerostomia. J Dent Res Dent Clin Dent Prospects. Fall 2017; 11(4): 247–52. doi: 10.15171/joddd.2017.043.
  16. Farshidfar N., Hamedani S. Hyposalivation as a potential risk for SARS-CoV-2 infection: Inhibitory role of saliva. Oral Dis. 2020; 10.1111/odi.13375. doi: 10.1111/odi.13375.
  17. Markart P., Korfhagen T.R., Weaver T.E., Akinbi H.T. Mouse lysozyme M is important in pulmonary host defense against Klebsiella pneumoniae infection. Am J Respir Crit Care Med. 2004; 169(4): 454–58. doi:10.1164/rccm.200305-669OC.
  18. Shimada J., Moon S.K., Lee H.Y. et al. Lysozyme M deficiency leads to an increased susceptibility to Streptococcus pneumoniae-induced otitis media. BMC Infect Dis. 2008; 8: 134. doi: 10.1186/1471-2334-8-134.
  19. Караулов А.В., Горелов А.В. Применение азоксимера бромида в терапии инфекционно-воспалительных заболеваний органов дыхания у детей: метаанализ контролируемых клинических исследований. Журнал инфектологии. 2019; 4: 31–41.

Об авторах / Для корреспонденции


Вера Петровна Вавилова, д.м.н., профессор кафедры поликлинической педиатрии, пропедевтики детских болезней и последипломной подготовки ФГБОУ ВПО «Кемеровский государственный медицинский университет» Минздрава России. Адрес: 650059, г. Кемерово, ул. Ворошилова, д. 22А. Тел.: 8 (3842) 73-48-56. E-mail: vavilovavр@mail.ru. ORCID: 0000-0001-8056-7274

Александр Михайлович Вавилов, д.м.н., профессор кафедры пропедевтики внутренних болезней ФГБОУ ВПО «Кемеровский государственный медицинский университет» Минздрава России. Адрес: 650059, г. Кемерово,

ул. Ворошилова, д. 22А. Тел.: 8 (3842) 73-48-56. E-mail: [email protected] ORCID: 0000-0003-2969-0669

Нина Константиновна Перевощикова, д.м.н., профессор, зав. кафедры поликлинической педиатрии, пропедевтики детских болезней и последипломной подготовки ФГБОУ ВПО «Кемеровский государственный медицинский университет» Минздрава России. Адрес: 650059, г. Кемерово, ул. Ворошилова, д. 22А. Тел.: 8 (3842) 73-48-56. E-mail: [email protected] ORCID: 0000-0003-4844-2898

Софья Анатольевна Царькова, д.м.н., профессор, зав. кафедрой поликлинической педиатрии и педиатрии факультета повышение квалификации и профессиональной переподготовки ФГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России. Адрес: 620028, г. Екатеринбург, ул. Репина, д. 3

Тел.: 8 (343) 382-74-54. E-mail: [email protected] ORCID: 0000-0003-4588-5909

Ольга Ивановна Пивовар, к.м.н., доцент, зав кафедрой инфекционных болезней ФГБОУ ВПО «Кемеровский государственный медицинский университет» Минздрава России. Адрес: 650059, г. Кемерово, ул. Ворошилова, д. 22А. Тел.: 8 (3842) 73-48-56. E-mail: [email protected] ORCID: 0000-0002-8552-6102

Ирина Ивановна Климова, д.м.н., профессор кафедры оториноларингологии им. профессора А.Н. Зимина Новокузнецкого государственного института усовершенствования врачей – филиала ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России. Aдрес: 654005,

г. Новокузнецк, проспект Строителей, д. 5. Тел.: 8 (3843) 45-48-73. e-mail: [email protected] ORCID: 0000-0003-2363-2660

Похожие статьи

болезни и лекарства, больницы и поликлиники, консультации врачей

А знаете ли вы, что…

До 6-7 месяцев младенцы способны дышать и глотать одновременно. Затем они утрачивают эту способность и постепенно учатся чередованию навыков. Это происходит из-за опускания изначально поднятой гортани.

Наша печень способна восстановить свой обычный размер, имея лишь четверть нормальной ткани. При этом регенерация идет довольно медленно, и заполнение привычного объема происходит путем увеличения размера клеток.

Мозг стирает наши сны как бесполезную информацию. Деятельность нейронов, регулирующих покой и аппетит, блокирует запись сновидений в гиппокамп. Эти клетки особенно активны в фазе быстрого сна.

В среднем сердце человека за всю жизнь делает 3,3 миллиарда ударов. Каждый из них состоит из нескольких сокращений, называемых «систолами», которые проталкивают кровь от желудочков в аорту и легочный ствол.

Мы используем мозг полностью, а не только на 10%. Все его части и клетки постоянно работают. При этом интеллект можно развивать при помощи упражнений. Это повысит предельные показатели, но откроет каких-либо спящих зон мозга.

Американец Чарльз Осборн занесен в книгу рекордов Гиннесса: он непрерывно икал в течение 68 лет. Приступ начался в 1922 году, когда Чарльз резал свинью, а закончился за год до его смерти. Осборн был дважды женат и имел 8 детей.

Артист Мишель Лотито ел тележки из супермаркетов, телевизоры, кровати и лыжи, а однажды в течение двух лет поглощал самолет «Сессна-150». Его желудок содержал большой объем соляной кислоты и имел толстые стенки.

Запивая еду, мы сокращаем количество кислоты в ротовой полости на 61%.

В среднем человек проводит за едой 5 лет жизни.

Согласно подсчетам, за 78 лет (то есть за одну среднюю жизнь) человек 25 лет спит, 9 лет проводит за телевизором, 4 года находится в машине, 92 дня — в туалете и 48 дней занимается сексом.

Когда человек врёт, он обычно смотрит вверх и налево.

В теле взрослого человека 20–30 кг мышц. Самая длинная — большая ягодичная — достигает 20 см, а самая короткая — стременная — находится в ухе. В ней всего 1,27 мм.

Нервные клетки восстанавливаются. Существование нейрогенеза еще в 1962 году показал Жозеф Олтман, разрушив отдел мозга крысы. Позже там появились новые клетки. Этот процесс аналогичен для всех млекопитающих и человека.

Фредерик Бегбедер говорил: «Все влюбленные заболевают туберкулезом. Любовь первым делом сдавливает легкие. Глупо говорить: «У меня разбито сердце», нужно выражаться точнее: «Мне сдавило легкие».

Сигнал по нерву идет со скоростью 90 метров в секунду.

ВИЧ и СПИД — не одно и то же. После инфицирования вирусом иммунодефицита человека больной проходит несколько стадий, на последней из которых ему ставят диагноз «синдром приобретенного иммунодефицита».

Ученые уверены, что не имеет значения, с какого расстояния вы смотрите телевизор. Главное — не забывать моргать, чтобы увлажнять глаза. Но все равно не стоит подолгу у него засиживаться — это вызывает переутомление.

Большинство из нас в каждый момент дышит только одной ноздрей. Вторая в это время «отдыхает». «Пересменка» происходит раз в 4 часа. Такой принцип позволяет избегать хронического ринита, возникающего от чрезмерной нагрузки.

Желудочный сок содержит соляную кислоту относительно небольшой концентрации. Однако, в случае проблем с защитной слизью, она может растворить сам желудок и кишечник. Попав на кожу, кислота также прожжет ее.

Ренди Гартнер провел 11 суток без сна — рекорд, который не стоит повторять. Уже на 2-3 сутки происходят необратимые повреждения мозга. Депривация вызывает припадки, галлюцинации, ухудшение памяти и внимания; повышаются давление и сахар в крови.

У взрослого человека 206 костей. При рождении их более 270, но в зрелом возрасте это число снижается: срастаются в основном кости черепа, таза и позвоночника.

У коал уникальные отпечатки пальцев, очень похожие на наши: криминалист не определит, какое существо их оставило. Ученые полагают, что папиллярный узор нужен животным для цепкости, ведь им нужно хватать и отрывать листья.

При чихании воздух вылетает изо рта со скоростью 160 км/ч.

По венам и артериям взрослого мужчины течет в среднем 5,2 литра крови. У женщины этот показатель равен 3,9 литра, у новорожденных 200-300 миллилитрам. Для взрослых это 6-8% массы тела.

В день человек вдыхает и выдыхает около 23 тысяч раз.

За год сердце сокращается около 37 миллионов раз.

«Острое респираторное вирусное заболевание» — общий диагноз, который ставят при простуде. Бактерии и вирусы — разные организмы непохожего строения, поэтому лечиться в этой ситуации антибиотиками бесполезно. Всегда.

Количество волос на голове у человека колеблется от нуля до 140 тысяч.

Самая юная роженица в истории — перуанка Лина Медина. Она стала мамой в 5 лет и 7 месяцев. Это оказалось возможным из-за редкого генетического заболевания, вызывающего раннее половое созревание. В результате кесарева сечения у нее родился здоровый сын.

Средний вес взрослого человека — 62 килограмма. Организм примерно на 60% состоит из воды. То есть во взрослого «налито» чуть больше 37 литров воды. При этом с возрастом ее становится пропорционально меньше.

Каждый день у человека выпадает от 60 до 100 волос.

Каждый палец человека за время жизни сгибается примерно 25 миллионов раз.

Чихнуть с открытыми глазами невозможно.

Площадь поверхности лёгких — более 100 квадратных метров.

По подсчетам ученых, за всю жизнь каждый из нас съедает примерно 55 тонн продуктов. Столько же весит синий кит — самое большое животное на Земле. Также это эквивалент почти 10 саванных слонов.

Около шести сегодняшних москвичей по статистике доживут до 116 лет.

У большинства людей на голове от 80 до 120 тысяч волос. У блондинов их больше, чем у рыжих и брюнетов. При этом по усредненным оценкам около 90% населения брюнеты или шатены.

Волос на теле живет от 3 месяцев до 7 лет, а на голове — до 10 лет.

Мочить пробу Манту можно, так как она вводится под кожу. Это официально подтверждено Минздравом. Расхожее противоположное мнение связано с более ранней пробой Пирке, которая наносилась в царапину на руке и могла быть смыта.

Цветовосприятие нарушено примерно у 7-8% мужчин. Им может быть трудно различить зеленый, красный, реже синий или желтый цвета. А вот среди женщин дальтоников почти нет, хотя передается заболевание именно по женской линии.

Голландцы и шведы почти не страдают непереносимостью лактозы, так как в Европе раньше освоили молочное животноводство и получили нужный ген, ставший конкурентным преимуществом. А вот в Юго-Восточной Азии и среди коренных народов США она есть почти у всех.

В теле взрослого человека около 75 километров нервов.

Звуки силой выше 85 децибел чреваты повреждениями слуха. Это соответствует человеческому крику или реву мотоцикла. Известно, что от трети до половины диджеев имеют проблемы со слухом. Так что не стоит регулярно громко слушать музыку.

Наша печень способна восстановить свой обычный размер, имея лишь четверть нормальной ткани. При этом регенерация идет довольно медленно, и заполнение привычного объема происходит путем увеличения размера клеток.

При улыбке работают 17 мышц 🙂

Ударяясь головой об стену, можно терять 150 калорий в час.

Жанна Кальман прожила 122 года и 164 дня. Это рекорд среди подобных подтвержденных случаев. Женщина родилась и умерла в Арле (Франция). Сама Кальман считала, что ее секрет в регулярном употреблении фруктов и оливкового масла.

Занимаясь бегом, учтите, что стопе, позвоночнику и суставам будет проще перенести нагрузку, если под ногами будет относительно мягкая поверхность, например, земля или современная дорожка на стадионе.

Клинические эффекты при раке груди

Front Immunol. 2019; 10: 2693.

, 1, , 1, , 1, , 1, , 1 , 2 , 1 , 1 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 3 , 5, 6 и 1, 2, 7 *

Катрин Алексия

1 IRMB, Университет Монпелье, INSERM, Монпелье, Франция

Mailys Cren

1 IRMB, Университет Монпелье, INSERM, Монпелье, Франция

Pascale Louis-Plence

IRMB, Университет Монпелье, INSERM, Монпелье, Франция

Dang-Nghiem Vo

1 IRMB, Университет Монпелье, INSERM, Монпелье, Франция

Ясамин Эль Ахмади

1 IRMB, INSERM, Монпелье, Франция

Emilie Dufourcq-Lopez

2 CHU Montpellier, Montpellier, France

Zhao-Yang Lu

1 IRMB, University of Montpellier, INSERM, Montpellier, France

0 IRMB

IRMB IRMB IRMB IRMB Монпелье, INSERM, Монпелье, Франция

Фархад Шамилов

3 Федеральный государственный бюджетный институт им.Национальный онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина Минздрава России, Москва, Россия

Ольга Чернышева

3 ФГБИ им. Н.Н. Блохина »Минздрава России, Москва, Россия

М. Васильева

4 Воронежский онкологический диспансер, Вронеж, Россия

И. Воротников

3 Федеральный государственный бюджетный институт« Н.Национальный онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина Минздрава России, Москва, Россия

Яна Вишневская

3 ФГБИ им. Н.Н. Блохина »Минздрава России, Москва, Россия

Николай Тупицын

3 Федеральный государственный бюджетный институт им. Н.Н. Национальный онкологический научный центр им. Блохина »Минздрава России, Москва, Россия

Жан-Франсуа Росси

5 Institut Sainte Catherine, Авиньон, Франция

6 Université de Montpellier I, UFR Mélliercine, UFR Mélliercine, UFR Mélliercine , Франция

Мартин Вильяльба

1 IRMB, Университет Монпелье, INSERM, Монпелье, Франция

2 CHU Montpellier, Монпелье, Франция

7 IRMB, Университет Монпелье, INSERM, INSERM, , Монпелье, Франция

1 IRMB, Университет Монпелье, INSERM, Монпелье, Франция

2 CHU Montpellier, Монпелье, Франция

3 Федеральный государственный бюджетный институт «N.Национальный онкологический научный центр им. Н. Блохина Минздрава России, Москва, Россия

4 Воронежский онкологический диспансер, Вронеж, Россия

5 Institut Sainte Catherine, Авиньон, Франция

6 Université de Montpellier I, UFR Médecine, Монпелье, Франция

7 IRMB, Университет Монпелье, INSERM, CNRS, CHU Montpellier, Монпелье, Франция

Отредактировал: Jose A. Garcia-Sanz, Испанский национальный исследовательский совет (CSIC) , Испания

Рецензент: Даниэль Скотт-Альгара, Институт Пастера, Франция; Алан Л.Эпштейн, Медицинская школа Кека, Университет Южной Калифорнии, США

Эта статья была отправлена ​​в раздел «Раковый иммунитет и иммунотерапия» журнала «Границы в иммунологии»

† Эти авторы внесли равный вклад в эту работу

Поступило в июле 2019 г. 9; Принято 1 ноября 2019 г.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY). Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии указания автора (авторов) и правообладателя (ов) и ссылки на оригинальную публикацию в этом журнале в соответствии с принятой академической практикой. Запрещается использование, распространение или воспроизведение без соблюдения этих условий.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Иммунотерапия, которая считается основным средством лечения рака, в некоторых случаях требует присутствия нескольких агентов для максимизации ее эффекта. Адъюванты могут усиливать действие других агентов. Однако, несмотря на их длительное использование, сегодня лицензированы лишь несколько адъювантов, и их редко используют для лечения рака. Азоксимер бромид, продаваемый под торговым названием Polyoxidonium® (PO), представляет собой сополимер N-окисленного 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиэтил) -1,4-этиленпиперазиния бромида.Он был описан как иммунный адъювант и иммуномодулятор, который клинически используется с отличной переносимостью. ПО используется для лечения и профилактики заболеваний, связанных с повреждением иммунной системы, и есть интерес к его тестированию в противоопухолевой терапии. Мы показываем здесь, что лечение PO в течение 1 недели вызывало положительные патологические изменения у 6 из 20 пациентов с раком груди, включая полный ответ у тройной отрицательной пациентки. Это коррелировало с увеличением инфильтрации Т-лимфоцитов CD4 + опухоли.Иммунные эффекты ПО связаны с активацией миелоидных клеток, и мало что известно о действии ПО на линии лимфоцитов, такие как естественные киллеры (NK) и Т-клетки. Мы обнаружили, что ПО увеличивает пролиферацию Т-клеток in vitro без отрицательного воздействия на какой-либо маркер активации. ПО не влияет на жизнеспособность дендритных клеток (DC) и увеличивает экспансию незрелых DC (iDC) и зрелых DC (mDC) при 100 мкг / мл, а также стимулирует экспрессию нескольких костимулирующих молекул DC, вызывая пролиферацию аллогенных T клетки.Напротив, PO снижает жизнеспособность DC при добавлении на 5-й день после расширения. ПО не токсичен для NK-клеток в дозах до 100 мкМ и не влияет на их активацию, созревание и цитотоксичность, но имеет тенденцию к усилению дегрануляции. Это может быть полезно против клеток-мишеней, которые проявляют низкую чувствительность к NK-клеткам, например, солидным опухолевым клеткам. Наконец, мы обнаружили большую вариабельность реакции на ПО между донорами. Таким образом, наши результаты in vitro показывают, что ПО увеличивает количество костимулирующих молекул на ДК, которые запускают Т-клетки, способствуя продукции эффекторных Т-клеток.Это может поддержать будущую клиническую разработку ПО для лечения рака.

Ключевые слова: полиоксидинид, дендритные клетки, цитотоксические лимфоциты, рак груди, алифатические полиамины, естественные киллерные клетки, Т-клетки

Введение

Иммунотерапия теперь рассматривается как новый рубеж в лечении рака, с несколькими впечатляющими успехами (1) . В некоторых случаях иммунотерапия рака требует, чтобы иммунные ответы были нацелены на определенные антигены, и обычно отсутствует эффективная стимуляция иммунной системы.В этом смысле адъюванты, агенты, которые модифицируют действие других агентов, усиливают иммунный ответ и широко используются при вакцинации (2), тем самым сводя к минимуму необходимую дозу антигена. Несмотря на их длительное использование, сегодня лицензированы лишь несколько адъювантов для создания адаптивного иммунного ответа на вакцины, а их использование в лечении рака редко (3).

Полиоксидоний (ПО) представляет собой физиологически активное соединение из нового класса гетероциклических алифатических полиаминов, которые вызывают клинический интерес (4).По химическому составу ПО представляет собой сополимер N-окисленного 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиэтил) -1,4-этиленпиперазиния бромида, который растворим в воде, биоразлагаем и имеет молекулярную массу 60–100 кДа (5). . ПО одобрено в России как вакцинный адъювант, стимулирующий выработку антител (http://petrovax.com/medication/catalog/polyoxydonium/). Цепи сополимера расщепляются и легко высвобождаются из организма (5), что объясняет его низкую почечную токсичность и хороший профиль безопасности, что продемонстрировано в обширном постмаркетинговом исследовании, проведенном в Словакии (6).Соответственно, ПО в комплексе с антигенами в коммерческой противогриппозной вакцине также продемонстрировало высокую безопасность согласно анализу около 50 миллионов реципиентов (5).

PO связывается с моноцитами и нейтрофилами периферической крови человека и, в меньшей степени, с лимфоцитами (7). Он используется в качестве иммунного адъюванта, особенно для вакцин, и в качестве иммуномодулятора для лечения острых и хронических бактериальных, вирусных или грибковых инфекционных заболеваний (4). ПО обладает несколькими иммуногенными свойствами.Во-первых, он стимулирует выработку ИЛ-6 (7). Во-вторых, увеличивает бактерицидную активность лейкоцитов (8). В-третьих, ПО индуцирует продукцию H 2 O 2 и увеличивает способность нейтрофилов и макрофагов улавливать и обрабатывать различные инфекционные агенты, включая бактерии, например стафилококки, примерно на 40–60% (7, 8). Это может объяснить способность ПО повышать сопротивляемость инфекциям.

Влияние PO на лимфоцитарный компартмент менее известно, хотя его иммуномодулирующие функции могут частично включать улучшенную презентацию антигена, приводящую к эффективному производству антител (4).Сначала ПО была ковалентно конъюгирована с антигенными компонентами противогриппозной вакцины: гемагглютинином и нейраминидазой (5). Данные около 50 миллионов реципиентов показали, что вакцина безопасна и эффективна (5). Во-вторых, PO оценивали с помощью трехвалентной живой ослабленной вакцины против кори, эпидемического паротита и краснухи (9). Здоровым детям не требовалось ПО для выработки высоких уровней специфических антител. Напротив, детям с аномальным количеством Т-лимфоцитов может быть полезно использование ПО (9).

Благодаря отличному профилю клинической безопасности перорального перорального введения, мы решили испытать его у пациентов с раком груди до операции.Мы наблюдали положительный клинический результат у 30% пациентов, который коррелировал с повышенной инфильтрацией опухоли CD4 + Т-клетками. Результаты побудили нас исследовать эффекты PO in vitro для идентификации клеток-мишеней на трех различных иммунных линиях, играющих важную роль в иммунном надзоре за опухолью, а именно на дендритных клетках (DC), T-клетках и NK-клетках (10). Однако мы обнаружили, что некоторые иммуномодулирующие свойства ПО различались у разных доноров. Следовательно, существует реальная потребность в лучшем понимании иммунных эффектов ПО для поддержки новых клинических разработок.

Пациенты, материалы и методы

Соединения

ПО предоставлено НПО «Петровакс» (Москва, Россия). Рекомбинантный человеческий (rh) IL-15, полученный от Miltenyi, и rhIL-2 от PeproTech. Рекомбинантные человеческие GM-CSF и rhIL-4 были получены от R&D systems и LPS от Sigma. Все остальные продукты описаны ниже.

Пациенты с раком молочной железы

ПО разрешено в России и других странах в качестве иммунного адъюванта. Больные лечились в хирургическом отделении больницы Н.Национальный онкологический научный центр им. Н. Блохина в Москве в соответствии с международно признанными руководящими принципами и положениями, используемыми местным этическим комитетом. Патологи морфологически подтвердили наличие рака путем окрашивания гематоксилин-эозином перед лечением ПО. Двадцать пациентов с гистологически подтвержденной аденокарциномой молочной железы без метастазов получали неоадъювантную пероральную дозу 12 мг внутримышечно на 1, 2, 3, 5 и 7 дни. Стадия определялась с использованием классификации TNM (11).описывает стадии пациентов; согласно этой классификации, T описывает размер исходной (первичной) опухоли и поражает ли она близлежащие ткани, N описывает пораженные соседние (региональные) лимфатические узлы, а M описывает отдаленные метастазы. Мы также проанализировали Her2 / neu, рецепторы эстрогена и прогестерона, а также Ki-67 в качестве индекса пролиферации. Пациенты перенесли последующую операцию на 8-й день. Образцы патологий до и после операции сравнивали в соответствии с системой оценки патоморфоза, которая определяет патологические изменения, наблюдаемые между образцами, выполненными до и после конкретной терапии, как описано ранее (12, 13).Вкратце, степень 1 патоморфоза соответствует легкой модификации, степени 2 и 3 соответствуют уменьшению инфильтрата опухолевых клеток от низкого до умеренного, а степень 4 указывает на полное исчезновение инфильтрата опухолевых клеток. Мы также изучили подмножества лейкоцитов, инфильтрирующих опухоль, и, кроме того, мы проанализировали изменения лимфоцитов в крови и аспиратах костного мозга в день 0 и день 8 у девяти пациентов. Суспензии клеток анализировали на CD4 / CD3 / CD25 / CD45 и CD8 / CD3 / CD56 / CD45 с использованием проточной цитометрии и программы FCS3 (Becton Dickinson, Bioline BD Biosciences, St.Петербург Россия).

Таблица 1

Клинические характеристики 20 пациентов с раком груди, получавших перорально.

9025

9025 9025 902 902 9025 9025 902 902 9025 902 9025

Количество пациентов 20
Средний возраст (диапазон) 53,5 года (32–78)
TNM
T1 19
N0 6
N1 7
N2 7
N3 0
Инфильтративная протоковая карцинома 14
Инфильтративная дольчатая 4
Тубулярная 1
Медуллярная 1
Медуллярная 1 Медуллярный индивидуальные доноры «Etablissement Français du Sang» ( EFS ).Мы подготовили по три биологических образца из каждой лейкоцитной пленки для каждого из следующих экспериментов: концентрация PO и тип клеток. В этой работе были использованы отделения пуповинной крови (UCB) и опыт профессора Джона Де Вос, ответственного за коллекцию Центра биологических ресурсов университетской больницы Монпелье — http://www.chu-montpellier.fr/en/ платформы (идентификатор BIOBANQUES – BB-0033-00031).

In vitro Размножение / дифференциация / созревание дендритных клеток (DC)

После очистки фиколла PBMC помещали в среду RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 100 Ед / мл пенициллина, 0.1 мг / мл стрептомицина и 1% глутамина (RP10), а через 2 часа не прилипшие клетки удаляли. Прилипшие клетки использовали в качестве исходной популяции и культивировали в среде RP10 с добавлением rhGM-CSF (100 нг / мл) и rhIL-4 (25 нг / мл) в течение 7 дней.

PO растворяли в воде и добавляли к клеткам, растущим в среде RP10, в нескольких конечных концентрациях (1, 10 или 100 мкг / мл). ПО добавляли с 0 по 7 день (незрелые DC, iDC D0). Мы добавили 1 мл свежей среды RP10 с добавлением GM-CSF и IL-4 на 2 день.На 5 день некоторые нДК (нДК D5) обрабатывали различными концентрациями ПО (1, 10 и 100 мкг / мл), чтобы изучить его влияние на созревание нДК. В качестве положительного контроля мы использовали LPS (50 нг / мл) для индукции созревания DC (mDC), а также исследовали влияние PO на LPS-индуцированное созревание. Эксперименты были выполнены в трех экземплярах, и результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Экспрессию молекул клеточной поверхности анализировали через 7 дней культивирования. Окрашивание клеток проводили с использованием флуоресцентно-конъюгированных моноклональных антител.Антитела PE-Cy ™ 5-конъюгированные против CD1a (клон HI149), BV421-конъюгированные против CD83 (клон HB15e), BV605-конъюгированные против CD80 (клон L307.4), BV650-конъюгированные анти-CD14 (клон M5E2), BV711- конъюгированный анти-CD40 (клон 5C3), конъюгированный с PE-Cy ™ 7 анти-CD86 (клон 2331), конъюгированный с Alexa Fluor®647 анти-CCR1 (клон 53504) и Fc-Block были получены от BD Biosciences. Конъюгированные с APC-Alexa Fluor®750 антитела против HLA-DR (клон Immu-357) были приобретены у Beckman Coulter. Человеческое антитело, конъюгированное с флуоресцеином CCR7 (клон 150503), было приобретено у R&D Systems, а антитело к CD1c, конъюгированное с фикоэритрином (РЕ) (клон AD5-8E7), было приобретено у Miltenyi Biotech.Образцы собирали на BD-LSR Fortessa (Becton Dickinson), и все данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Ashland, OR, США). iDC идентифицировали по экспрессии CD1a и CD1c и потере экспрессии CD14, а созревание DC контролировали по экспрессии CD40, CD80, CD83 и CD86 в клетках HLA-DR +.

In vitro Экспансия / активация Т-клеток

Клетки обрабатывали ПО на протяжении всего протокола размножения / активации. Использовали несколько концентраций: PO 1, 10, 100 и 500 мкг / мл.После фиколла мы использовали набор для позитивной селекции EasySep ™ CD3 (StemCell Technologies) в соответствии с протоколом производителя. Очищенные клетки CD3 + ресуспендировали в RPMI-Glutamax, 10% FBS. Клетки активировали человеческим Т-активатором CD3 / CD28 Dynabeads (Life Technologies) согласно протоколу производителя. На 5 день мы проанализировали пролиферацию Т-клеток и различные маркеры Т-клеток. Некоторые образцы обрабатывали PMA (50 нг / мл) / иономицином (1 мкг / мл). Внутриклеточное окрашивание выполняли путем добавления BD GolgiPlug, ингибитора транспорта белков, содержащего брефельдин A (BD Biosciences).

Экспрессию молекул клеточной поверхности анализировали через 7 дней культивирования. Окрашивание клеток проводили с использованием флуоресцентных конъюгированных мышиных моноклональных антител. V500-конъюгированные анти-CD4 (клон L200), PerCP-Cy5.5-конъюгированные анти-CD25 (клон MA251), V450-конъюгированные анти-Foxp3 (клон 259D / C7), PE-конъюгированные анти-CD127 (клон HIL7RM21), PE-Cy7- конъюгированные антитела против IFN-g (клон B27) и конъюгированные с PerCP-Cy5.5 антитела против IL-17a были получены от BD Biosciences. PB-конъюгированные анти-CD4 (клон 13B8.2) и АРС-конъюгированные антитела к CD8 (клон B9.11) были приобретены у Beckman Coulter. Окрашенные образцы анализировали на проточном цитометре Gallios (Beckman Coulter) с использованием программного обеспечения Kaluza. Эксперимент проводили в трех экземплярах, и результаты выражали как среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Расширение и активация человеческих NK-клеток

Это было выполнено, как описано ранее (14). Вкратце, единицы крови были истощены по Т-клеткам с использованием набора для позитивной селекции EasySep TM CD3 (STEMCELL Technologies).Клетки культивировали в течение 20 дней с γ-облученными клетками PLH при соотношении NK-клетки: дополнительные клетки 1: 1 в присутствии IL-2 (100 Ед / мл) и IL-15 (5 нг / мл). Клетки PLH добавляли каждые 4 дня, а свежие цитокины — через день. Мы не добавляли ЛЖВ в течение последних 4 дней, и в конце процесса чистота NK-клеток (CD56 + / CD3 ) всегда была выше 90% без оставшихся живых клеток ЛЖ.

Для фенотипического анализа клетки окрашивали 7AAD (Beckman Coulter) для идентификации жизнеспособных клеток и антител против поверхностных маркеров.FITC-конъюгированные анти-CD25 (клон B1.49.9), анти-CD45RO (клон UCHL1), PE-конъюгированные анти-CD69 (клон TP1.55.3), анти-CD62L (клон DREG56), анти-CD19 (клон J3-119), анти-CD3 ( клон UCHT1), ECD-конъюгированный анти-CD19 (клон J3-119), конъюгированный с PacificBlue анти-CD16 (клон 3G8), анти-CD57 (клон NC1), APC-AlexaFluor750-конъюгированный анти-CD45 (клон J33), анти-CD45RA (клон 2h5LDh21LDB9 ), Анти-CD45, конъюгированный с KromeOrange (клон J33), и анти-CD16 (клон3G8) были получены от Beckman Coulter. FITC-конъюгированные анти-CD158b (клон CH-L), PE-конъюгированные анти-CD158a (клон HP-3E4) и V450-конъюгированные анти-CD107a (клон h5A3) были предоставлены BD Biosciences.APC-конъюгированные анти-CD56 (клон REA196), анти-CD3 (клон AC146) и Vioblue-конъюгированные анти-CD158e (клон DX9) были приобретены у Miltenyi. Конъюгированные с PECy7 анти-CD56 (клон HCD56) были получены от BioLegend. 1 × 10 5 -3 × 10 5 клеток инкубировали в течение 20–30 мин при 4 ° C с различными антителами в PBS, содержащем 2,5% FBS. Затем клетки промывали и суспендировали в 200–250 мкл той же среды. Окрашенные образцы анализировали на проточном цитометре Gallios (Beckman Coulter) с использованием программного обеспечения Kaluza.Жизнеспособные лимфоциты регистрировали с использованием окрашивания FSC / SSC и 7AAD. В-клетки (CD19 + ), Т-клетки (CD3 + CD56 ) и NK-клетки (CD56 + CD3 ) были выделены с использованием антител к CD19, CD3 и CD56 соответственно.

Цитотоксичность, опосредованная NK-клетками

Это выполняли, как описано ранее (14, 15). NK-клетки метили 3 мкМ красителя CellTracker ™ Violet BMQC (Life Technologies) и инкубировали в течение ночи с клетками-мишенями при различных соотношениях E: T.Впоследствии транслокация фосфатидилсерина (PS) и повреждение мембраны были проанализированы в популяции клеток-мишеней с отрицательной флуоресценцией с помощью проточной цитометрии с использованием аннексина V-FITC (Immunostep) и 7AAD (BD Biosciences) или йодида пропидия (PI), как описано ранее (16, 17). Мы считаем все клетки, положительные по аннексину-V и / или PI (или 7-ADD), мертвыми (или умирающими).

NK Degranulation Assay

Это было сделано, как описано ранее (15). Вкратце, 50 × 10 3 клеток-мишеней на лунку помещали в RPMI, 10% FBS, IL-2 100 Ед / мл с монензином (BD Biosciences) в 96-луночный планшет с V-образным дном.NK и клетки-мишени инкубировали в течение ночи при 37 ° C в 5% CO 2 и подсчитывали живые клетки, используя цитометр Muse (Millipore) с набором для подсчета и жизнеспособности (Millipore). В качестве контроля NK-клетки инкубировали без клеток-мишеней. NK-клетки CD107a + анализировали на проточном цитометре Gallios (Beckman Coulter) с использованием 7AAD, CD45RO-FITC, CD19-PE, CD56-PECy7, CD3-APC, CD45RA-APCAlexaFluor750, CD16-KromeOrange и CD107a-HV500 (B Биологические науки). Результаты были проанализированы с помощью программы Kaluza.

Статистический анализ

Экспериментальные значения обрабатывали и статистический анализ выполняли с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (v6.0). Все статистические данные представлены как * p <0,05; ** p <0,01; *** p <0,001 и **** p <0,0001. Средние значения выражаются как среднее плюс или минус стандартная ошибка среднего (SEM).

Результаты были получены от трех индивидуальных доноров «Etablissement français du sang» ( EFS ).Мы подготовили по три биологических образца из каждой лейкоцитной пленки для каждого из следующих экспериментов: концентрация PO и тип клеток.

Результаты

Эффекты перорального введения у пациентов с раком молочной железы

Мы выбрали когорту из 20 пациенток со средним возрастом 53,5 года (диапазон 32–78). Первая биопсия в день O показала, что у них были разные оценки TNM и что у большинства была инфильтративная протоковая карцинома (). Мы лечили пациентов внутримышечно перорально в течение 1 недели и получили вторую биопсию на 8-й день.Среди пациентов шесть продемонстрировали патологические изменения после операции по сравнению с результатами до операции (). Пациенты, ответившие на лечение, имели различные показатели TNM, рецепторы эстрогена и прогестерона, окрашивание Her2 / neu и индексы пролиферации (). Один пациент имел особенно агрессивный тройной отрицательный фенотип, т.е. отрицательный по рецепторам эстрогена, прогестерона и фактора роста эпидермиса 2 человека (HER2), и имел высокий индекс пролиферации, измеренный с помощью высокого коэффициента пролиферации на основе Ki-67 окрашивание ().Получила пероральную терапию в течение 1 недели, перенесла радикальную мастэктомию левой груди с сохранением грудных мышц. В послеоперационном материале наблюдали патоморфоз 4 степени (). Это соответствует полному исчезновению инфильтрата опухолевых клеток, что означает полный патологический ответ. Мы также наблюдали воспалительный инфильтрат в ложу опухоли (), который состоял из клеток как клеточного, так и гуморального иммунитета с почти эквивалентным соотношением Т- и В-клеток (). Макрофаги состояли из отдельных гистиоцитов, сгруппированных в гранулемы, и демонстрировали появление гигантской клеточной реакции ().Наконец, около 15–20% инфильтрирующих клеток были гранулоцитами, в основном нейтрофилами (данные не показаны). Таким образом, изменения, выявленные после лечения ПО у этого пациента, соответствовали активному хроническому воспалению с образованием гранулемы.

Таблица 2

Клиническая характеристика пациентов с патоморфозом после лечения ПО (вверх), а также рецепторный статус и индекс пролиферации их опухолей (вниз).

9025 2

9025 2

9025 2 9025 2

9025 2

902 51 1

0253

0253

Pt номер Стадия pT N Pathomorphosis 9025 1 9025 2 9025 2 9025 2 9025 2 9025 II
2 IIIa 2 2 1
3 IIIa 2 1 1
5 I 1 0 1
6 IIIa 2 2 2
9025 Рецепторы прогестерона Her2 / neu Ki-67
0 0 0 75
2 7 5 1 28
3 3 3
4 7 0 3 31
5 7 6 0 26
6

Гистологические паттерны при постановке диагноза 32-летнего пациента с тройным отрицательным ответом, достигшего полного патологического ответа после лечения ПО. (A) Морфологические признаки при окрашивании гематоксилин-эозином (H-e) (x50) показали инфильтрат протоковой опухоли. (B) Иммуногистохимическое окрашивание показало тройную отрицательность в отношении рецептора прогестерона (PR), рецептора эстрогена (ER) и рецептора роста эстрогена 2 человека (HER2) с высоким индексом Ki-67.

Гистологические картины после введения полиоксидония (ПО) 32-летнему пациенту с тройным отрицательным результатом, достигшим полного патологического ответа после лечения. (A) Морфологические аспекты, с наличием гранулемы, воспалительного инфильтрата и фиброза ткани, без инфильтрата опухолевых клеток (H-e; x20). (B) Иммуногистохимическое исследование с использованием антител к панцитокератину (AE1 / AE3) с последующим окрашиванием гематоксилином по Майеру. Положительный результат был ограничен только протоками молочной железы без инфильтрата опухолевых клеток, что соответствовало полному патологическому ответу. (C) Иммунный инфильтрат наблюдался в срезах биопсии с иммуногистохимическим окрашиванием послеоперационного материала.Наблюдались Т-лимфоциты (CD3, CD4, CD8-положительные клетки), B-лимфоциты (CD20-положительные клетки) и макрофаги (CD68-положительные клетки).

Кроме того, незначительные изменения (степень 1) наблюдались у трех пациентов, а уменьшение инфильтрата опухоли (степень 2) было обнаружено у двух пациентов. Мы также получили клеточные суспензии и изучили субпопуляции лейкоцитов, инфильтрирующих опухоль. Мы обнаружили значительную разницу в популяции CD4 + на инфильтрате опухолевых клеток между шестью пациентами с патологическими изменениями и пациентами без патологических изменений, соответственно 50.91 ± 2,05% против 40,89 ± 2,26% ( P = 0,006). Кроме того, соотношение CD8 / CD4 составляло 0,79 ± 0,09 против 1,17 ± 0,13 ( P = 0,03). Мы также проанализировали субпопуляции CD4 и CD8 в крови и аспиратах костного мозга девяти наших пациентов на день 0 и на 8 день после лечения перорально и не обнаружили каких-либо значимых различий (данные не показаны).

Эффекты ПО в Т-клетках

Предыдущие результаты, касающиеся рекрутирования Т-клеток, побудили нас исследовать прямое влияние ПО на Т-клетки.Мы стимулировали очищенные Т-клетки от трех здоровых доноров (HD) антителами к CD3 / CD28. Этот протокол индуцировал эффективную активацию, что измерялось по подавлению CD127 и положительной регуляции CD25 (дополнительная фигура 1A) и подавлению CD45RA (данные не показаны). Чтобы частично имитировать относительно длительное лечение PO у пациентов с раком груди, мы стимулировали Т-клетки и лечили их различными концентрациями PO. Количество Т-клеток статистически увеличивалось к 5-му дню при 100 и 500 мкг / мл (). Напротив, PO не изменяет ни процент клеток CD4 + , экспрессирующих CD127, CD25 и CD45, ни уровень их экспрессии (дополнительный рисунок 2).Точно так же ПО не влияло на активацию CD8 + , за исключением того, что снижение уровней CD25 было вызвано более высокими дозами ПО (дополнительная фигура 3). Рестимуляция Т-клеток на 5-й день с помощью PMA / иономицина индуцировала продукцию IFNγ в обоих компартментах Т-клеток. На этот ответ не повлиял РО (дополнительный рисунок 3). Таким образом, хроническое лечение in vitro PO не оказывало токсического действия и, фактически, увеличивало пролиферацию Т-клеток без отрицательного воздействия на любой из протестированных маркеров активации.

PO увеличивает пролиферацию Т-клеток. Очищенные Т-клетки от трех отдельных здоровых доноров активировали костимуляцией против CD3 / CD28 в трех повторностях. Указанные концентрации ПО добавляли в день 0. Количество клеток определяли количественно. Среднее количество контрольных необработанных клеток было стандартизовано до 1, чтобы уменьшить вариабельность между донорами. Графики представляют собой средние значения ± SEM; ** p <0,01, *** p <0,001; Тест ANOVA использовали для сравнения с необработанными клетками.

Эффекты ПО на дендритные клетки (ДК)

ДК являются ключевыми регуляторами иммунных ответов, способными примировать наивные покоящиеся Т-клетки и инициировать первичные Т-клеточные ответы. Следовательно, влияние ПО на Т-клетки у пациентов с раком груди может быть опосредовано модуляцией постоянного тока. Мы обрабатывали адгезивные клетки PBMC колониестимулирующим фактором гранулоцитов-макрофагов (GM-CSF) и интерлейкином-4 (IL-4) в течение 5 дней для образования незрелых DC (iDC) и способствовали их созреванию (mDC) еще на 2 дня. инкубация с липополисахаридом (ЛПС).Мы проанализировали влияние ПО на генерацию и созревание постоянного тока с использованием трех протоколов. Во-первых, мы добавили несколько концентраций PO с 0 по 7 день. Это указывает на способность PO влиять на образование / распространение iDC. Во-вторых, мы лечили нДК перорально на 5-й день (D5). Это позволило нам отслеживать способность ПО индуцировать созревание iDC per se , таким образом указывая, способствует ли ПО формированию гуморального и / или клеточно-опосредованного иммунного ответа. В-третьих, мы созрели iDC с LPS, одновременно обрабатывая клетки несколькими концентрациями PO.Это исследует способность ПО влиять на созревание ЛПС-индуцированного ДК. iDC были идентифицированы по экспрессии CD1a и CD1c и потере экспрессии CD14. Созревание DC контролировали по экспрессии костимулирующих молекул CD40, CD80, CD83 и CD86 в клетках HLA-DR +. Процент нДК, которые экспрессировали костимулирующие молекулы CD80, CD86, CD40 и CD83, был относительно низким и значительно увеличивался в LPS-индуцированных мДК (дополнительный рисунок 4).

PO не влиял на жизнеспособность iDC и mDC и увеличивал образование iDC и mDC при добавлении 100 мкг / мл в день 0 ().Напротив, при добавлении на 5-й день в дозах 1 и 10 мкг / мл он немного снизил жизнеспособность DC (для HD3) и, следовательно, окончательный подсчет (). Мы наблюдали вариабельность между донорами, но ПО неизменно хорошо переносилось с точки зрения жизнеспособности и размножения DC (дополнительный рисунок 5). Взятые вместе, эти результаты предполагают, что ПО может улучшить распространение mDC. Следовательно, в участках воспаления, где происходит созревание DC, PO может способствовать продукции mDC.

Влияние PO на жизнеспособность и расширение DC.Количество клеток (справа) и их жизнеспособность (слева), полученные на 7 день от трех отдельных здоровых доноров. Различные концентрации PO (1, 10 и 100 мкг / мл) добавляли либо в день 0 (iDCs D0), либо в день 5 (iDCs D5). Созревание DC (mDC) индуцировали добавлением LPS (50 нг / мл) в отсутствие или в присутствии различных концентраций PO. Из-за изменчивости между донорами мы нормализовали расширение, присвоив разложению iDC значение 1 и скорректировав другие значения до этого числа. Графики представляют собой средние значения ± SEM; * р <0.05, ** р <0,01, *** р <0,001; U Манна-Уитни использовали для сравнения с необработанными клетками.

Затем мы выполнили фенотипический анализ на D7, чтобы оценить уровень экспрессии HLA-класса II и костимулирующих молекул CD40, CD80, CD83 и CD86 (дополнительный рисунок 4). Экспрессия этих поверхностных маркеров увеличивается во время созревания DC и может свидетельствовать об иммуногенных свойствах PO. ПО не влияло на экспрессию любого из этих маркеров во время генерации iDC с точки зрения процента положительных клеток () или уровней экспрессии ().Добавление 10 мкг / мл перорально на 5 день увеличивало процент нДК, экспрессирующих некоторые костимулирующие молекулы, у двух из трех доноров (). Более того, такая же концентрация PO увеличивала уровни экспрессии некоторых костимулирующих молекул у этих пациентов (). Это показывает, что ПО обладает иммуногенными свойствами. ПО не изменяет LPS-индуцированную экспрессию костимулирующих молекул (дополнительные рисунки 4, 6). Фактически, увеличение, вызванное LPS, уже было очень высоким, что позволяет предположить, что PO не может увеличивать его дальше.

Влияние РО на процент ДК, экспрессирующих маркеры созревания ДК. iDC были индуцированы, как описано в заголовке. (A) Процент DC, экспрессирующих различные маркеры. (B) Анализировали уровни экспрессии (MFI) маркеров созревания DC. Графики представляют собой средние значения ± стандартная ошибка среднего для каждого отдельного здорового донора с биологическими экспериментами, выполненными в трех биологических повторностях. * p <0,05, ** p <0,01; U-критерий Манна-Уитни использовали для сравнения с необработанными клетками.

Наконец, для проверки созревания ДК, индуцированного ПО, обработанные ПО ДК культивировали совместно с Т-клетками, меченными CFSE, для оценки их способности индуцировать пролиферацию аллогенных CD4 и CD8 Т-клеток. Мы использовали незрелые и зрелые DC в качестве контроля. Во-первых, важно отметить, что пролиферация как CD4, так и CD8 Т-клеток индуцировалась во всех условиях, испытанных в трех независимых биологических экспериментах для двух отдельных доноров.

Повышенное количество пролиферирующих Т-клеток наблюдалось после инкубации с мДК у обоих доноров.Инкубация с iDC, обработанными PO, увеличивала пролиферацию аллогенных CD4 и CD8 T-клеток по сравнению с контрольными iDC (). Хотя эти результаты различались у разных доноров, они продемонстрировали хорошую иммуногенность ДК, обработанных ПО, и их способность индуцировать пролиферацию CD4 и CD8 Т-клеток.

PO увеличивает потенциал iDC для стимуляции реакции смешанных лимфоцитов (MLR). iDC, обработанные в D5 различными концентрациями PO (0, 1, 10, 100 мкг / мл) или mDC, как описано в заголовке, использовали для стимуляции CFSE-меченных аллогенных Т-клеток при соотношении DC: T-клетки. из 1:40. (A) Пролиферацию Т-клеток анализировали на 5 день. Все условия тестировали, по крайней мере, в трех повторностях. На рисунке представлены репрезентативные точечные графики (вверху) и гистограммы, изображающие пролиферацию аллогенных клеток CD4 + , меченных CFSE, и клеток CD8 + , меченных CFSE (внизу). (B) Процент высоко пролиферирующих клеток CD4 (вверху) и CD8 (внизу). * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, **** p <0.0005; Mann-Whitney U использовали для сравнения с необработанными клетками.

В заключение, ПО не влияет на дифференцировку ДК, но может способствовать их созреванию и экспрессии костимулирующих молекул, что приводит к хорошей иммуногенности ДК, отражаемой пролиферацией Т-клеток. Однако существует вариабельность, предполагающая, что эффекты перорального введения могут зависеть от иммунного статуса пациента / донора.

Эффекты ПО на NK-клетки

NK-клетки являются частью врожденной иммунной системы и обладают естественной цитотоксичностью.NK-клетки преимущественно нацелены на клетки, лишенные MHC-I, включая трансформированные или инфицированные вирусом клетки, которые подавляют экспрессию MHC-I, чтобы избежать распознавания CTL. Следовательно, гипотеза «отсутствующего« я »» предполагает, что NK-клетки отличают клетки-мишени от других здоровых «собственных» клеток на основе экспрессии MHC-I. Однако теперь ясно, что активация NK-клеток зависит от сложного процесса передачи сигналов, опосредованного активирующими и ингибирующими рецепторами. Результат зависит от силы различных активирующих и тормозящих сигналов.Ингибирующие рецепторы в основном распознают молекулы MHC-I (HLA у людей), а активирующие рецепторы могут распознавать стрессовые лиганды в клетках-мишенях. Следовательно, NK-клетки также устраняют «стрессовые» клетки, даже если они экспрессируют нормальные уровни MHC-I.

Поскольку NK-клетки обеспечивают противораковую защиту (18, 19), мы проанализировали влияние PO на активацию и экспансию NK-клеток. Клетки PBMC, истощенные по CD3 + , инкубировали при различных концентрациях PO, и количество клеток анализировали на 7, 14 и 21 день.Мы наблюдали снижение количества только при концентрациях 500 мкг / мл, но эффект не отличался статистически при любой концентрации (дополнительный рисунок 7). Фактически, необработанные данные были очень разнородными из-за различий в исходном количестве NK-клеток в мешках с кровью и реакции на протокол активации / расширения. Это было ожидаемо, учитывая различный процент NK-клеток у здоровых людей (примерно 5–20%) и ответы NK-клеток на различные стимулы (14). Чтобы противодействовать этой проблеме, мы рассчитали среднее количество клеток для каждого донора и получили нормализованное значение.Мы использовали это для нормализации значений в клетках, обработанных PO. Это показало, что ПО при 500 мкг / мл снижает пролиферацию NK-клеток (). Напротив, более низкие концентрации не оказали никакого эффекта. Следовательно, ПО не влияет на жизнеспособность и пролиферацию NK-клеток при концентрациях ниже 100 мкг / мл и до 21 дня стимуляции, что позволяет предположить, что эти концентрации не должны отрицательно влиять на жизнеспособность и пролиферацию NK-клеток у пациентов. В этом контексте следует отметить, что периферические NK-клетки имеют короткую продолжительность жизни, в среднем 1 неделю (20), поэтому маловероятно, что большинство NK-клеток будут контактировать с PO в течение более длительных периодов.

Высокая концентрация PO снижает пролиферацию NK-клеток. NK-клетки от трех отдельных здоровых доноров были активированы костимуляцией клетками-мишенями и низкими дозами цитокинов в течение различных периодов времени. В день 0 добавляли различные концентрации PO и определяли количество клеток. Средние контрольные значения были стандартизированы до 1, чтобы уменьшить вариабельность между донорами. Графики представляют собой средние значения ± SEM; * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0.001; Тест ANOVA использовали для сравнения с необработанными клетками.

Затем мы исследовали эффекты ПО на три хорошо известных маркера активации NK-клеток, CD69, CD25 и рецептор трансферрина CD71, на 21 день после активации (дополнительная фигура 8A). CD71 активируется в клетках с высоким метаболизмом. CD25 — это рецептор IL-2 с высоким сродством. CD69 является маркером NK ранней активации. Все эти маркеры были увеличены после активации NK-клеток, и их экспрессия была выше в NK с высокой противораковой активностью (21, 22).Ни одна из концентраций PO не влияла на процент NK-клеток, экспрессирующих CD69 и CD71, или на их уровни экспрессии, измеренные по интенсивности MFI. Мы наблюдали тенденцию к увеличению процента CD25-положительных клеток и более высоких уровней CD25 при PO 10 мкг / мл. Однако обычно ПО не изменяет экспрессию этих маркеров активации.

Во время созревания NK-клеток клетки CD56 bright становятся CD56 dim CD62L + CD57 клеток, которые продуцируют перфорин, сохраняя при этом высокую продукцию IFN-γ в ответ на цитокины (23, 24).CD56 dim CD62L Клетки CD57 + затем демонстрируют низкий ответ на цитокины и более высокую цитотоксическую способность и считаются полностью зрелыми NK-клетками (23, 25). In vitro стимулы на период до 20 дней не индуцируют CD57 (14). PO при 10–100 мкг / мл продемонстрировал тенденцию к снижению экспрессии обоих маркеров (дополнительная фигура 8B). Наконец, полностью зрелые цитотоксические NK-клетки экспрессируют ингибирующие иммуноглобулиноподобные рецепторы киллерных клеток (KIR) и CD16 (26).Дополнительная фигура 8B показывает тенденцию к увеличению экспрессии KIR и отсутствие изменений CD16 в клетках, обработанных PO (до 100 мкМ).

Цитотоксическая функция NK-клеток опосредуется активацией рецепторов, например, NKG2D, который распознает стрессовые лиганды в клетках-мишенях. Их взаимодействие вызывает естественную цитотоксичность. Кроме того, NK-клетки распознают домены Fc в мишенях, опсонизированных мАт, с помощью FcγRIIIa (CD16a). Включение вызывает антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC). ПО в дозах ниже 500 мкМ не влияло на экспрессию этих основных рецепторов (дополнительная фигура 8B).

CD45 — это белок тирозинфосфатаза, который специфически экспрессируется в лейкоцитах (27). Самая большая изоформа CD45RA экспрессируется на «наивных» Т-клетках. Активированные Т-лимфоциты и Т-лимфоциты памяти экспрессируют самую короткую изоформу CD45, CD45RO, в которой отсутствуют экзоны RA, RB и RC. Эта кратчайшая изоформа способствует активации Т-клеток. Экспрессия изоформ CD45 придает NK-клеткам различные функциональные свойства (22). NK-клетки, коэкспрессирующие длинные (CD45RA) вместе с короткими (CD45RO) изоформами, проявляют более высокую противоопухолевую активность у больных гематологическим раком (21).После стимуляции in vitro CD45RA + представляют собой клетки в состоянии покоя, CD45RO + активированы, CD45RARO проявляют более высокую цитотоксичность, а CD45RAdim представляют собой клетки в процессе активации. ПО не оказало значительного изменения в этих популяциях, генерируемых in vitro (дополнительная фигура 9), хотя наблюдалась тенденция к снижению экспрессии CD45RA и к увеличению CD45RO, что могло отражать повышенную цитолитическую активность (22).

Затем мы проанализировали влияние ПО на цитотоксическую функцию, опосредованную NK-клетками, исследуя естественную цитотоксичность и дегрануляцию.Мы использовали два соотношения эффектор: мишень (E: T) 1: 1 и 1: 3. Поскольку более 50% NK-клеток экспрессируют KIR, мы использовали в качестве мишеней первичные клетки, экспрессирующие молекулы MHC-I, которые могут ингибировать KIR-экспрессирующие NK-клетки. Анализ исходных данных не показал изменений ни в одном из этих параметров (дополнительный рисунок 10). Фактически, между донорами была большая неоднородность. Следовательно, мы использовали тот же подход, что и в, для измерения средней цитотоксичности в контрольных клетках для каждого донора и получения соответствующих нормированных значений.Мы использовали их для расчета нормализованных значений для клеток, обработанных PO. Существенных изменений цитотоксичности мы не обнаружили (). Когда мы анализировали дегрануляцию, мы наблюдали тенденцию к усилению ответа при РО 10 мкМ при обоих соотношениях E: T. В заключение, ПО не влияет на цитотоксичность, хотя может способствовать дегрануляции NK.

PO не влияет на цитолитическую функцию NK-клеток. NK-клетки от трех отдельных здоровых доноров были активированы костимуляцией клетками-мишенями и низкими дозами цитокинов в течение 21 дня.Различные концентрации PO были добавлены в день 0. Верхние графики представляют токсичность против опухолевых клеток от пациента с В-клеточной лимфомой при двух различных соотношениях эффектор: мишень (E: T). Нижние графики представляют процент клеток CD107 + . Средние контрольные значения были стандартизированы до 1, чтобы уменьшить вариабельность между донорами. Графики представляют собой средние значения ± SEM; Тест ANOVA использовали для сравнения с необработанными клетками.

Обсуждение

Стимуляция противоопухолевой активности иммунной системы становится основным клиническим подходом.Последние достижения в онкологии позволяют предположить, что использование клинических молекул, стимулирующих иммунную систему против инфекционных заболеваний различного происхождения, является альтернативой традиционной химиотерапии (1, 4). Посторонние природные полиэлектролиты (белки, полисахариды, нуклеиновые кислоты) и их структурные аналоги (полипептиды, полинуклеотиды) обладают антигенными свойствами и могут служить иммуностимуляторами (5). Синтетические полиэлектролиты (SPE) обладают тем преимуществом, что не являются иммуногенными, а N-оксидные группы PO снижают присущую полиаминам токсичность.Это было проверено во многих клинических условиях (5, 6). Следовательно, PO является явным кандидатом для тестирования в терапии рака. Это была наша первая цель, и результаты обнадеживают: 6 из 20 пациентов ответили на лечение, в основном путем набора клеток CD4 + в место опухоли. Однако важно понимать механизм действия новых лекарств, а влияние ПО на лимфоциты в основном неизвестно. Мы провели исследовательское исследование, чтобы попытаться определить молекулярную основу его клинического эффекта.

Хотя ПО предпочтительно связывается с миелоидными клетками, он также связывается с лимфоцитами, хотя и с более низким сродством (7). Поэтому мы изучили эффекты PO in vitro на трех подгруппах иммунных клеток, участвующих в противоопухолевых иммунных ответах (10). Поскольку фармакология ПО в основном была неизвестна, мы использовали несколько концентраций. Более того, поскольку мы не знали, в каких функциях может участвовать ПО, мы исследовали его активность в нескольких контекстах, то есть активации, созревания и пролиферации, для каждого проанализированного типа клеток, т.е.е., NK, T и DC.

Хотя мы проанализировали только три HD, мы выявили, что ПО была иммуногенной, и наблюдали большую вариабельность: один давал относительно сильный ответ, один — умеренный, а третий в основном не отвечал. Это напоминало наши наблюдения у пациентов с раком груди, у ~ 30% респондентов. Следовательно, хотя цель этого исследования не состояла в том, чтобы выявить процент пациентов, которые отвечают на лечение перорально, мы полагаем, что наши результаты показывают, что эффект перорального введения зависит от пациента / донора.Этот относительно низкий процент пациентов, ответивших на лечение, встречается в большинстве видов иммунотерапии (28) и не исключает его использования, в основном из-за его низкой токсичности. Новые препараты обычно не работают в клиниках из-за низкого эффекта и / или высокой токсичности (29). Процент пациентов, «ответивших» на лечение, сильно варьируется. Это более примечательно в иммунотерапии, потому что клетка-мишень может модулировать или модулироваться другими или окружающей средой (28). Например, антитела, блокирующие взаимодействие PD-1 / PD-L1, считаются одним из самых больших достижений в лечении рака за последние 20 лет.Однако эта терапия улучшает прогноз только у 50% пациентов с опухолями с лучшим ответом. Для опухолей с низким уровнем ответа процент уменьшается ниже 5%, даже если пациенты экспрессируют PD-L1 (28). Независимо от механизма действия и прямого воздействия ПО на лимфоциты, примечательно то, что этот препарат практически не токсичен для этих клеток при концентрациях до 100 мкг / мл или даже 500 мкг / мл для Т-клеток. Это наблюдалось даже при лечении лимфоцитов в течение нескольких недель. Более того, он не влияет на активацию лимфоцитов in vitro .Следовательно, наши результаты in vitro и in vivo предполагают, что ПО является безопасным продуктом.

Наши результаты показывают, что ПО не оказывает «большого» воздействия на типы клеток и механизмы, которые мы исследовали. Обычно это наблюдается, когда адъюванты используются отдельно (30), и, хотя эффекты ПО незначительны, они когерентны. Например, мы наблюдали эффективную активацию нескольких маркеров активации DC при определенных концентрациях PO (), что коррелировало с лучшей активацией аллогенных Т-клеток ().Следовательно, DC явно активируются лучшими иммуногенными концентрациями PO. Во-вторых, мы наблюдали, что ПО значительно увеличивало экспансию Т-клеток in vitro при двух более высоких концентрациях, тогда как разрастание другой линии лимфоцитов, то есть NK, не было затронуто или уменьшено. Примечательно, что это коррелировало с привлечением CD4 + Т-клеток к месту опухоли у пациентов с раком груди.

Эффекты ПО не зависели от дозы. Это заставило нас использовать несколько концентраций в нескольких условиях, чтобы выявить те условия, которые демонстрируют иммуногенность.Фактически, отсутствие дозозависимого эффекта не является чем-то необычным для иммунной системы, где чрезмерно сильная иммунная активация может привести к ингибированию клеток. В лимфоцитах двухфазные ответы зависят от фосфатазы CD45, которая дефосфорилирует ингибирующие остатки Src-киназ и приводит к размножению и активации лимфоцитов. Однако сильная активация CD45 приводит к дефосфорилированию активирующих остатков Src-киназ, что ингибирует активацию Т-клеток (31). Следовательно, чрезмерно сильные активирующие сигналы могут эффективно приводить к нарушению активации лимфоцитов.Кроме того, наивные и активированные лимфоциты экспрессируют разные изоформы CD45, которые обладают разной активностью (22, 32). Следовательно, активированные и наивные лимфоциты по-разному реагируют на одни и те же стимулы.

Следовательно, раскрытые нами мишени PO-клеток могут объяснить переменную реакцию на этот полиамин. Таким образом, хотя ПО показало свою клиническую ценность в нескольких ситуациях, будущая работа должна четко установить, какие больные раком могут получить пользу от лечения ПО для улучшения его клинического применения.

Это первое исследование, демонстрирующее как клиническую, так и биологическую активность ПО в области иммунотерапии рака. В этом контексте очень интересно, что две пациентки, которые лучше ответили на ПО, полный патологический ответ и частичный ответ, страдали тройным отрицательным раком груди. Этот тип имеет плохой прогноз (33), и использование PO может улучшить его.

Заявление о доступности данных

Все наборы данных, созданные для этого исследования, включены в статью / дополнительные материалы.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены N.N. Российский онкологический научный центр им. Блохина в Москве. Пациенты / участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании.

Вклад авторов

CA, MC, PL-P, D-NV, YE, ED-L и Z-YL проводят эксперименты in vitro . PL-P, JH, J-FR и MVi разрабатывают эксперименты in vitro и написали рукопись. FS, OC, MVa, IV, YV и NT выполняют клиническую часть, включая сбор образцов и анализ ex vivo образцов от пациентов с раком молочной железы.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Сноски

Финансирование. Работа частично поддержана контрактом между НПО Петровакс (Москва, Россия) и общественной структурой INSERM France. НПО «Петровакс» не принимало участия в разработке, сборе, анализе, интерпретации данных исследования, написании этой статьи или принятии решения о ее публикации для публикации.Эта работа также была поддержана программой PRT-K 2018 (MVi; 2018-021) и Canceropole GSO Emergence (MVi; 2018/2019).

Ссылки

1. Крюгер С., Ильмер М., Кобольд С., Кадилья Б.Л., Эндрес С., Орманн С. и др. . Достижения в иммунотерапии рака 2019 — последние тенденции. J Exp Clin Cancer Res. (2019) 38: 268. 10.1186 / s13046-019-1266-0 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Bowen WS, Svrivastava AK, Batra L, Barsoumian H, Shirwan H. Текущие проблемы разработки адъюванта противораковой вакцины.Exp Rev Vaccines. (2018) 17: 207–15. 10.1080 / 14760584.2018.1434000 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 4. Пауэлл Б.С., Андрианов А.К., Fusco PC. Адъюванты полиионных вакцин: еще один взгляд на соли алюминия и полиэлектролиты. Clin Exp Vaccine Res. (2015) 4: 23–45. 10.7774 / cevr.2015.4.1.23 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Кабанов В.А.
От синтетических полиэлектролитов до полимерных субъединичных вакцин. Pure Appl Chem. (2004) 76: 1659–77. 10.1351 / pac200476091659 [CrossRef] [Google Scholar] 6.Пружинец П., Чирун Н., Свейката А. Профиль безопасности полиоксидония в повседневной практике: результаты поставторизационного исследования безопасности в Словакии. Иммунотерапия. (2018) 10: 131–7. 10.2217 / imt-2017-0116 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Дьяконова В.А., Дамбаева С.В., Пинегин Б.В., Хаитов Р.М. Изучение взаимодействия иммуномодулятора полиоксидония с клетками иммунной системы человека. Int Immunopharmacol. (2004) 4: 1615–23. 10.1016 / j.intimp.2004.07.015 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Дамбаева С.В., Мазуров Д.В., Голубева Н.М., Дьяконова В.А., Пинегин Б.В., Хаитов Р.М.Влияние полиоксидония на фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови человека. Russ J Immunol. (2003) 8: 53–60. [PubMed] [Google Scholar] 9. Топтыгина А., Семикина Е., Алиошкин В. Влияние иммунопотенциатора Полиоксидония на цитокиновый профиль и продукцию антител у детей, вакцинированных Приориксом. Arch Physiol Biochem. (2012) 118: 197–203. 10.3109 / 13813455.2012.659669 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Fessenden TB, Duong E, Spranger S. Командные усилия: естественные клетки-киллеры на первом этапе эстафетной гонки против опухолевого иммунитета.J Immunother Cancer. (2018) 6:67. 10.1186 / s40425-018-0380-4 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Webber C, Gospodarowicz M, Sobin LH, Wittekind C, Greene FL, Mason MD, et al. . Улучшение классификации TNM: результаты 10-летнего непрерывного обзора литературы. Int J Cancer. (2014) 135: 371–8. 10.1002 / ijc.28683 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Ермилова В.Д., Копосова Т.Л., Муравьева Н.И., Кузьмина ЗВ. [Степень выраженности терапевтического патоморфоза и характер изменения рецепторов эстрогена и прогестерона после лучевой и химиотерапии рака груди].Вопр Онкол. (1985) 31: 69–73. [PubMed] [Google Scholar] 13. Семенова Н.А., Дыдыкина И.Ю., Дедерер Л.Ю., Тихомиров А.Г., Горбунова В.А., Лактионова К.П. и др. . Использование 1H-ЯМР-спектроскопии для прогнозирования эффективности неоадъювантной химиотерапии рака груди. Bull Exp Biol Med. (2000) 130: 701–4. 10.1007 / BF02682110 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Санчес-Мартинес Д., Альенде-Вега Н., Ореккиони С., Таларико Г., Корнильон А., Во Д. Н. и др.
Расширение аллогенных NK-клеток с эффективной антителозависимой клеточной цитотоксичностью в отношении множественных опухолевых клеток.Тераностический. (2018) 8: 3856–69. 10.7150 / thno.25149 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Во Д. Н., Алексия С., Альенде-Вега Н., Моршхаузер Ф., Хуот Р., Менар С. и др. . Активация NK-клеток и восстановление субпопуляций NK-клеток у пациентов с лимфомой после лечения обинутузумабом и леналидомидом. Онкоиммунология. (2018) 7: e1409322. 10.1080 / 2162402X.2017.1409322 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Aguilo JI, Garaude J, Pardo J, Villalba M, Anel A. Протеинкиназа C-тета необходима для активации NK-клеток и in vivo, для контроля прогрессирования опухоли.J Immunol. (2009) 182: 1972–81. 10.4049 / jimmunol.0801820 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Санчес-Мартинес Д., Азасета Дж., Мунтаселл А., Агило Н., Нуньес Д., Гальвез Э.М. и др. . Человеческие NK-клетки, активированные лимфобластоидными клетками EBV, преодолевают антиапоптотические механизмы лекарственной устойчивости гематологических раковых клеток. Онкоиммунология. (2015) 4: e991613. 10.4161 / 2162402X.2014.991613 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Вильяльба М., Ратор М.Г., Лопес-Роюэла Н., Кшивинска Е., Гарауде Дж., Альенде-Вега Н.От метаболизма опухолевых клеток до иммунного бегства от опухоли. Int J Biochem Cell Biol. (2013) 45: 106–13. 10.1016 / j.biocel.2012.04.024 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Анель А., Агило Дж. И., Каталонский Е., Гарауд Дж., Ратор М. Г., Пардо Дж. И др. . Протеинкиназа С-тета (PKC-тета) в функции естественных клеток-киллеров и противоопухолевом иммунитете. Фронт Иммунол. (2012) 3: 187. 10.3389 / fimmu.2012.00187 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Krzywinska E, Allende-Vega N, Cornillon A, Vo DN, Cayrefourcq L, Panabieres C, et al.. Идентификация противоопухолевых клеток, несущих антигены естественных киллеров (NK), у пациентов с гематологическим раком. EBioMedicine. (2015) 2: 1364–76. 10.1016 / j.ebiom.2015.08.021 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22. Krzywinska E, Cornillon A, Allende-Vega N, Vo DN, Rene C, Lu ZY, et al. . Профиль изоформы CD45 идентифицирует подмножества естественных киллеров (NK) с различной активностью. PLoS ONE. (2016) 11: e0150434. 10.1371 / journal.pone.0150434 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23.Bryceson YT, Chiang SC, Darmanin S, Fauriat C, Schlums H, Theorell J, et al. . Молекулярные механизмы активации естественных клеток-киллеров. J. Врожденный иммунитет. (2011) 3: 216–26. 10.1159 / 000325265 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Juelke K, Killig M, Luetke-Eversloh M, Parente E, Gruen J, Morandi B и др. . Экспрессия CD62L идентифицирует уникальное подмножество полифункциональных NK-клеток CD56dim. Кровь. (2010) 116: 1299–307. 10.1182 / blood-2009-11-253286 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Lopez-Verges S, Milush JM, Pandey S, York VA, Arakawa-Hoyt J, Pircher H, et al.. CD57 определяет функционально отличную популяцию зрелых NK-клеток в субнаборе NK-клеток человека CD56 dim CD16 + . Кровь. (2010) 116: 3865–74. 10.1182 / blood-2010-04-282301 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26. Abel AM, Yang C, Thakar MS, Malarkannan S. Естественные клетки-киллеры: развитие, созревание и клиническое использование. Фронт Иммунол. (2018) 9: 1869. 10.3389 / fimmu.2018.01869 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. Каплан Р., Морс Б., Хюбнер К., Кроче С., Хоук Р., Равера М. и др.. Клонирование трех тирозинфосфатаз человека выявило мультигенное семейство рецептор-связанных протеин-тирозинфосфатаз, экспрессируемых в головном мозге. Proc Natl Acad Sci USA. (1990) 87: 7000–4. 10.1073 / pnas.87.18.7000 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Fogel DB. Факторы, связанные с неудачными клиническими испытаниями, и возможности повышения вероятности успеха: обзор. Contemp Clin Trials Commun. (2018) 11: 156–64. 10.1016 / j.conctc.2018.08.001 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31.Ри И., Вейлетт А. Протеиновые тирозинфосфатазы в активации лимфоцитов и аутоиммунитета. Nat Immunol. (2012) 13: 439–47. 10.1038 / ni.2246 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Mustelin T, Vang T, Bottini N.
Белковые тирозинфосфатазы и иммунный ответ. Nat Rev Immunol. (2005) 5: 43–57. 10.1038 / nri1530 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Liedtke C, Mazouni C, Hess KR, André F, Tordai A, Mejia JA и др. . Ответ на неоадъювантную терапию и долгосрочное выживание у пациентов с тройным отрицательным раком молочной железы.J Clin Oncol. (2008) 26: 1275–81. 10.1200 / JCO.2007.14.4147 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Низкодозная вакцина против гриппа Grippol Quadrivalent с адъювантом Полиоксидоний индуцирует гуморальный иммунный ответ, опосредованный T-хелпером-2, и увеличивает активность NK-клеток

Abstract

Грипп вакцина Grippol® Quadrivalent (GQ) — новая вакцина, содержащая адъювант Полиоксидоний® и рекомбинантные гемагглютинины из 4 штаммов вируса гриппа в количестве 5–6 мкг каждого гемагглютинина на дозу для человека.Эти дозы антигенов примерно в 3 раза меньше стандартной дозы, рекомендованной ВОЗ. Мы стремились охарактеризовать иммунный ответ на вакцину GQ и определить вклад адъюванта в этот ответ. Мышей BALB / c вакцинировали GQ или не содержащими адъюванта смесями антигенов (AG). Затем определяли ответ антител, количество Т-клеток памяти в селезенке и функциональные свойства спленоцитов. Было показано, что вакцина GQ индуцирует антитела ко всем 4 гемагглютининам гриппа.Вакцинация GQ вызвала сильное увеличение индуцированной AG пролиферации и продукции цитокинов Th3 ex vivo. Эти эффекты были равны эффекту, достигаемому стандартной дозой антигенов. Вакцинация также вызвала накопление CD4 + больших лимфоцитов с фенотипом центральных и эффекторных Т-клеток памяти в селезенке. Вакцина GQ усиливала цитолитическую активность естественных киллеров (NK), тогда как смесь AG без адъюванта в пониженных и стандартных дозах не влияла на активность NK.Мы не обнаружили заметного ответа Т-клеток Th2 и CD8 + на вакцинацию. In vitro вакцина GQ стимулировала созревание дендритных клеток (ДК) человека, происходящих из моноцитов, повышая экспрессию молекул HLA-DR, CD80, CD83, CD86 и ICOSL. Полиоксидоний без АГ также индуцировал экспрессию ICOSL, который играет важную роль в Т-зависимом гуморальном иммунном ответе. Таким образом, вакцина против гриппа GQ с низкой дозой и полиоксидониевым адъювантом является иммуногенной, индуцирует Th3-поляризованный Т-клеточный ответ и созревание Т-клеток памяти CD4 + , активирует выработку антител к гемагглютининам гриппа и увеличивает активность NK. клетки.

Ключевые слова

Вакцина против гриппа

Адъювант

Азоксимер бромид

Полиоксидоний

Иммунитет

Цитокины

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2020 Авторы. Опубликовано Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Цитирование статей

Основные этапы развития 3-летних | Разобрался

Три года — большая веха. Дети внезапно превращаются из малышей в дошкольников.Также бывает трудно не ожидать внезапного изменения способностей.

Но дети развиваются по-разному. Третий год не означает, что ребенок получит все
дошкольные навыки
сразу.

Ознакомьтесь с этими этапами развития, чтобы получить представление о том, как обычно развиваются навыки у трехлетних детей.

В этом году дети очень много работают над доработкой мотора
навыки, которые они развили в 2-летнем возрасте
. Они тоже начинают делать что-то новое, особенно с мелкой моторикой (движение мелких мышц).

Большинство трехлетних детей к 4 годам учатся делать подобные вещи:

  • Бегать и ходить, не спотыкаясь о собственные ноги

  • Прыгать, подпрыгивать и стоять на одной ноге

  • Идите назад и поднимайтесь по лестнице одной ногой за другой

  • Пинайте и бросайте маленький мяч

  • Поймайте большой мяч (большую часть времени)

  • Поднимитесь

  • Начните крутить педали на трехколесном велосипеде или велосипеде

  • Нарисуйте круг мелком, карандашом или маркером

  • Играйте с игрушками с маленькими подвижными частями и / или кнопками

  • Перелистывайте страницы книги по одной

  • Постройте с помощью Mega Bloks и создавайте башни из шести или более блоков

  • Рабочие дверные ручки и открытые поворотные крышки для бутылок

В этом году дети начинают думать о мире в новые способы.Вы можете увидеть несколько творческих подходов к решению задач и занятий. К концу этого года дети обычно могут:

  • Назовите восемь цветов в коробке с мелками (красный, желтый, синий, зеленый, оранжевый, фиолетовый, коричневый, черный)

  • Назовите числа до 10 и начните. подсчет групп вещей

  • Начните понимать время в терминах утра, ночи и дней недели

  • Вспомните и перескажите любимые истории

  • Поймите и поговорите о вещах, которые «одинаковы» и «разные ”

  • Следуйте простым трехэтапным инструкциям (« Почистите зубы, умойтесь и наденьте пижаму.»)

  • Используйте основные правила грамматики, но делайте ошибки со словами, которые не соответствуют правилам, например, говоря« мыши »вместо« мыши »

  • Говорите достаточно хорошо, чтобы большинство незнакомцев понимали они говорят

  • Используйте пять или шесть слов в предложении и разговаривайте из двух или трех предложений

  • Назовите вам их имя, имя хотя бы одного друга и названия наиболее распространенных предметов

  • Понимайте такие слова, как на , на , за и за следующим

  • Задавайте вопросы «почему», например «Почему?» чтобы получить больше информации

Социальные и эмоциональные вехи

В этом возрасте дети демонстрируют интересное сочетание независимости, игривости и страха.По мере приближения к 4 годам большинство трехлетних детей делают следующее:

  • Интересуются — хотя и колеблются — посещением новых мест и пробованием новых вещей

  • Начинают играть с другими детьми (а не только играть бок о бок)

  • Начните успокаивать и проявлять заботу о несчастном друге без подсказки

  • Играйте по очереди (даже если им это не нравится!)

  • Играйте «по-настоящему» жизнь »с игрушками, такими как игровые кухни

  • Начните находить простые способы разрешения споров и разногласий

  • Покажите (но, возможно, не называйте) различные эмоции, помимо счастья, грусти и безумия

Все дети развиваются на собственное расписание.Но если ребенок приближается к 4 годам и не может делать многие из этих вещей, неплохо было бы выяснить, почему. Родители, учителя и медицинские работники могут работать вместе, чтобы найти ответы.

отзывов о ABCmouse.com для родителей | Common Sense Media

Разочарован. Требуется улучшение.

ABCmouse показалась мне интересной, поэтому я решил зарегистрироваться для своего четырехлетнего сына. Ему очень нравится играть в игры на playstation, iPad и в Интернете (например, Fisherprice, Cartnoon Network).Ему также нравится наша собственная учебная деятельность — мы регулярно выполняем «домашние задания», когда он учится читать и писать слова из четырех-пяти букв, а также играть в математические игры, игры на запоминание и т. Д. Я подумал, что ему понравится этот сайт. Сначала было здорово создать аватар, похожий на него, и наблюдать, как он движется по пути обучения, но это было слишком просто. Итак, я перешел на следующий уровень … все еще слишком просто. ABCmouse, по-видимому, считает, что в математических играх для дошкольников следует считать до 10 и определять числа.Несмотря на это, я позволил ему продолжить уроки. Позже я заметил, что существует довольно много уроков по искусству, что меня просто расстраивало. Я больше, чем кто-либо другой, ценю искусство (у меня степень в искусстве, за то, что кричу громко!), И я не мог этого вынести. Это были раскраски, тонны. У указателя была ужасная задержка для всех сеансов раскраски, и мы с сыном нашли это скучным и утомительным. Может быть, это для некоторых детей, но я не понимаю, как раскраска в линейном искусстве может кого-то чему-то научить. Мой сын считает это рутиной.Почему бы не заняться домашним ремеслом или предложить им посмотреть на настоящее искусство настоящих художников? После завершения «художественной деятельности» это не позволит нам двигаться вперед, если мы не спасем эту чертову штуку. Я настроил действия, чтобы исключить все раскраски, но все же это казалось таким медленным и скучным. Игры так долго загружались, истории были медленными и неинтересными, песни засыпали. Мой совет — сэкономьте деньги, скачайте несколько приложений на планшет или телефон. Если вы не можете этого сделать, посмотрите видео Умизуми в библиотеке и почитайте несколько книг для начинающих.Я не могу сказать достаточно о системе публичных библиотек. Если у вас есть возможность загружать приложения для вашего ребенка, я настоятельно рекомендую для чтения дошкольный ланч-бокс Monkey, Umizoomi Race Around the City для дошкольной математики, любые приложения-головоломки для решения проблем, черт возьми, есть масса ресурсов для держать вашего ребенка в учебе и мотивации. ABCmouse просто не подходит с точки зрения макета сайта, плавной навигации и соответствующих действий, которые будут привлекать внимание дошкольника. Я бы с радостью предложил свои предложения при отмене, но они не предоставили раздел, объясняющий мою проблему, только несколько полей, которые давали вам ОДИН вариант для проверки.Если ABCmouse действительно хочет улучшить свой сайт, им следует отправить опрос или дать родителям раздел для комментариев.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

2021 © Все права защищены.