Как сделать литическую смесь: Литичка — литическая смесь от температуры для детей и взрослых

Содержание

Литичка — литическая смесь от температуры для детей и взрослых

Многие из нас знают, что если при высокой температуре вызвать скорую помощь, то приехавшие по вызову медики сделают укол, после которого температура упадёт. Этот укол называется Летичка или ,как её частенько называют сами врачи скорой, Тройчатка. Литичка — это литическая смесь или летический укол, который представляет собой достаточно сильнодействующую смесь трех активных компонентов, способствующую оперативному снижению температуры тела и облегчает состояние пациента. Компоненты лекарства хорошо совмещаются между собой и являются относительно безопасными для человека.

Состав литической смеси

Классический состав литички, который обычно применяют врачи скорой помощи, следующий:
Анальгин(Метамизол натрия) – препарат из группы нестероидных противовоспалительных препаратов, имеюший мощное жаропонижающее и анальгезирующее действие.
Димедрол (Дифенгидрамин) – антигистаминное вещество первого поколения, оказывающий также местноанестезирующее и седативное действие. Оно усиливает действие Анальгина.
Папаверин(Папаверина гидрохлорид) — лекарственное средство спазмолитического и гипотензивного действия, относящееся к группе опиумных алкалоидов, которое за счет расширения сосудов увеличивает теплоотдачу организма.
Папаверин часто подменяют на Но-шпа, что по сути своей одно и то же. Димедрол можно отлично заменить Супрастином.

Соединяясь вместе эти вещества не образуют какого-то нового, особенного или чудодейственного лекарства. То есть они действуют каждый сам по себе. Анальгин непосредственно снижает температуру. Даже если принять его без других составляющих литической смеси, то температура всё равно снизится. Димедрол усиливает действие Анальгина, подсушивает слизистые, снимает аллергические воспалительные проявления болезни, уменьшает насморк, облегчает дыхание. Побочный эффект —  сонливость. Она же позволяет пациенту расслабится и поспать. Папаверин якобы расширяет сосуды, позволяет организму лучше отдавать тепло, у некоторых снимает болезненные проявления.

Запомните! Литичка — это средство, которое лишь симптоматически и временно сбивает температуру. Лечить причиную возникновения высокой температуры (воспаление) надо специальными препаратами. Вирус лечится противовирусными средствами, если бактерия — используют антибиотики. В некоторых случаях требуется хирургическое вмешательство для удаления очага воспаления — фурункулы, аппендикс и т.д.

Дозировка литической смеси для взрослых

Для того, чтобы сделать литический укол взрослому, Вам понадобится:

Анальгин 50 % - 2 мл;
Папаверил или Но-шпа 2 % - 2 мл;
Димедрол 1 % - 1 мл.

Укол делается внутримыщечно, в ягодичную мышцу.

Литичку не обязательно надо колоть. Если пациент в сознании и у него нет стойкой рвоты, то можно обойтись и таблетками:

1 таблетка анальгина;
1-2 таблетки но-шпы или дротаверина;
1 таблетка супрастина.

Единственный совет — лучше всего таблетки растолочь в порошок и запить водой. Эффект от применения «сухой» литички вы почувствуете примерно через 25-30 минут после приём лекарства: температура спадает, у больного идёт облегчение состояние и он может уснуть. При этом он скорее всего пропотеет, а потому не забудьте его позже переодеть в сухую одежду.

Дозировка литической смеси для детей

Думаю понятно, что нельзя давать детям тот же объём тройчатки, что и взрослым. Это очень мощное средство! Именно поэтому детишкам делать литичку стоит только в случае очень высокой температуры, если сиропы и свечи с жаропонижающими не помогают.
Состав детской инъекции следующий:
50%-й раствор анальгина (Метамизол натрия) надо использовать из расчета 10 мг на 1 кг массы тела. 1 мл раствора содержит 500 мг действующего вещества.
Димедрол в ампуле используется из расчета 0,1-0,2 мл на каждый полный год малыша. Для детей возрастом до года берут стандартную дозу в 0,1 мл.
Раствор папаверина гидрохлорида рассчитывают, исходя из возраста. Для детей до года необходимо всего 0,1 мл. Для старших малышей стандартную дозу умножают на количество полных лет.
Внимание: литический укол можно делать не чаще, чем 1 раз в 6 часов

Так что лучше — колоть или пить?

Многие считают что укол не так вреден для организма, как приём таблеток.  Дескать таблетки вредны для желудка, печени и вообще — без укола — это не лечение. Так думают большинство лиц пожилого возраста, которые уверены, что таблетки зло, а укол — спасение от всего.

Что-же, давайте начнём с того, что выпьете ли вы таблетку, сделаете ли укол, или просто натрете кожу чудодейственной мазью —  если действующее лекарство влияет на желудок и печень, то оно все равно на эти органы повлияет — в организме есть процессы всасывания и кровообращения. И тут нет разницы как оно попало в организм! Так что запомните —  от пути введения лекарства зависит только скорость наступления эффекта.  Высокая температура до 40 градусов без проявлений судорог ранее — это не повод для резкого и немедленного снижения температуры. 30 минут тут роли играть не будут. А вот резкое снижение температуры на самом деле тоже опасно для организма точно так же, как и резкое повышение в течение нескольких минут.

 

Как спасти детей от температуры? Рекомендация Минздрава

Уколы от температуры (литическая смесь) — в Кыргызстане запрещены! Ни один врач не должен и не имеет права использовать их в своей практике. Об этом VB.KG заявила главный педиатр КР Бермет Самаганова.

Какая ответственность предусмотрена для медиков, нарушивших требования, специалист Минздрава не уточнила. Но отметила, что литические уколы – это агрессивный метод снижения температуры тела и могут в последствии привести к осложнениям.

— Мы лечим людей в соответствии с клиническим протоколом. Эти уколы вне стандартов медпомощи, они небезопасны. В отечественной медицине достаточно разрешенных лекарственных препаратов, которые могут применяться при неотложной помощи, при высоких температурах. Все врачи о них осведомлены. Поэтому при не сбиваемой температуре тела следует обязательно обращаться в первую очередь к семейным врачам, — сообщила Бермет Самаганова.

Главный специалист по педиатрической службе в очередной раз напомнила родителям, что нужно делать, если у чада не спадает жар. Для начала стоит запомнить, что температуру тела меньше 38,5 ºC сбивать не следует. Но, в любом случае, больной должен потреблять большое количество жидкости.

Обильное питье. Если ребенок грудной, то чаще прикладывать к груди.

Не укутывать, а, наоборот, максимально раскрыть ребенка.

Обтирать водой комнатной температуры.

Если ничего не помогает, и более того, состояние больного ухудшилось (появилась рвота, жидкий стул) немедленно обратится к врачу (вызвать скорую помощь).

До приезда медиков можно использовать жаропонижающие суппозитории (свечи) для детей.

Бермет Самаганова подчеркнула, что ни в коем случае нельзя заниматься самолечением. Поэтому в период подъема вирусных инфекций во всех детских отделениях дополнительно открывается по несколько десятков койко-мест.

Для справки: В литическую смесь входят – Анальгин, который способен понижать температуру, но в лечении детей почти не используется. Димедрол — имеет снотворное действие, успокаивающее. Папаверин — является спазмолитиком, с ним уменьшается риск возникновения судорог.

Литическая смесь для детей — состав и применение

Еще ни один ребенок на планете не вырос без перенесенных простудных или инфекционных заболеваний. Чаще всего малышей поражают вирусы, присутствие в организме которых сопровождается повышением температуры тела.

Есть несколько способов сбить жар. Одним из них является самостоятельное приготовление лекарства под названием литическая смесь для детей.

Когда необходимо сбивать температуру тела

Медики утверждают, что прием жаропонижающих необходимо начинать тогда, когда цифра на термометре достигнет отметки 38 градусов. Если температура тела ниже указанной цифры, то организм ребенка самостоятельно и вполне успешно справляется с болезнью: мешать ему в таком случае не стоит.

Литическая смесь: состав

Это средство имеет достаточно необычный состав. Главным компонентом раствора является Анальгин. Он снимает жар, снижает температуру тела и снимает болевой синдром.

Помимо этого, в состав препарата входит антигистаминное средство. В большинстве случаев это Димедрол. Также могут быть использованы лекарства Тавегил, Супрастин или Фенистил.

Третьим составляющим является Папаверин. При необходимости, вместо него может быть использована Но-Шпа.

Когда необходимо применение литической смеси

В большинстве случаев, в качестве жаропонижающего средства для малышей используются свечи с парацетамолом или сироп с ибупрофеном. Когда эти препараты не помогают сбить температуру, необходимо применение правильной дозировки самостоятельно приготовленного средства.

В том случае, когда у ребенка уже были судороги или предсудорожное состояние вследствие повышения температуры тела, можно применять литическое средство уже после 37,5 градусов. Довольно часто у малышей бывает состояние, когда температура тела высокая, а конечности холодные. Так происходит из-за неправильной работы сосудов. Тут  также поможет литическая смесь для детей. Стоит отметить, что при спазмах сосудов парацетамол или ибупрофен практически бессильны.

Как приготовить

Состав литической смеси зависит от конкретной ситуации. Если у малыша отмечается спазм сосудов, то необходимо взять следующие ингредиенты: Анальгин, Димедрол и Но-Шпа. При других обстоятельствах можно использовать любое другое антигистаминное средство и раствор, снимающий спазм.

Состав для инъекций

Перед тем, как сделать жаропонижающий раствор, необходимо правильно рассчитать дозу. Чаще всего такой препарат готовится для малыша. На каждый год жизни необходимо брать 0,1 мл составляющего.

Так, для годовалого ребенка стоит смешать 0,1 мл Анальгина с аналогичным количеством антигистаминного средства. После этого добавьте к раствору  «Папаверин», дозировка которого составляет 0,1 мл.

Средство для приема внутрь

Есть еще один вариант приготовления жаропонижающего. Для этого вам понадобятся не жидкие препараты, а таблетки. Возьмите одинаковые пропорции следующих лекарств: Анальгин, Парацетамол и Но-Шпа. Если вы панируете дать смесь ребенку, возраст которого младше трех лет, то дозировка   каждого препарата должна быть в одну четвертую часть таблетки. Разотрите каждую часть таблетки в порошок и тщательно перемешайте ингредиенты.

Как дать литическую смесь ребенку

Когда препарат приготовлен с учетом всех пропорций, необходимо дать жаропонижающее средство малышу. Сделать это можно несколькими способами.

Внутримышечное введение

Наберите в стерильный шприц лекарство и выпустите все пузырьки воздуха. Протрите место для укола салфеткой, смоченной в спиртовом растворе. Введите иглу в мышцу и медленно выпустите лекарство. После этого протрите место укола спиртовой салфеткой.

Прием лекарства внутрь

Если вы не имеете возможности сделать инъекцию, можно предложить ребенку выпить приготовленную смесь. Стоит напомнить, что анальгин может вызвать раздражение пищеварительного тракта. Также такое средство будет иметь медленное действие.

Прием порошка

Если вы приготовили смесь из таблеток, то дайте выпить препарат больному, после чего напоите малыша обильным количеством жидкости.

Когда нельзя использовать литическую смесь

Есть ряд ситуаций, когда применение такого самодельного препарата противопоказано.

Если малыш жалуется на сильную боль в любой части живота, стоит отказаться от использования препарата Анальгин, так как он может снять спазм, который требует врачебного вмешательства.

Не давайте ребенку литическую смесь, если в ближайшие часы вы пытались сбить температуру одним из составляющих компонентов лекарства. В противном случае может наблюдаться передозировка.

Медики не рекомендуют использовать такое жаропонижающее средство дольше, чем один день и чаще одного раза в шесть часов.

Также не стоит давать лекарство малышу, возраст которого не достиг полугода.

Чего ждать после применения лекарства

Не ждите, что после приема средства температура тела снизится до нормы. Если в ближайшие полчаса после введения лекарства младенцу стало легче, а столбик термометра перестал подниматься вверх, то препарат действует.

Литическая смесь от температуры для детей, дозировка взрослым – Telegraph

Литическая смесь от температуры для детей, дозировка взрослым

Легендарный магазин HappyStuff теперь в телеграамм!

У нас Вы можете приобрести товар по приятным ценам, не жертвуя при этом качеством!

Качественная поддержка 24 часа в сутки!

Мы ответим на любой ваш вопрос и подскажем в выборе товара и района!

Telegram:

https://t. me/happystuff

(ВНИМАНИЕ!!! В ТЕЛЕГРАМ ЗАХОДИТЬ ТОЛЬКО ПО ССЫЛКЕ, В ПОИСКЕ НАС НЕТ!)

купить кокаин, продам кокс, куплю кокаин, сколько стоит кокаин, кокаин цена в россии, кокаин цена спб, купить где кокаин цена, кокаин цена в москве, вкус кокаин, передозировка кокаин, крэк эффект, действует кокаин, употребление кокаин, последствия употребления кокаина, из чего сделан кокаин, как влияет кокаин, как курить кокаин, кокаин эффект, последствия употребления кокаина, кокаин внутривенно, чистый кокаин, как сделать кокаин, наркотик крэк, как варить крэк, как приготовить кокаин, как готовят кокаин, как правильно нюхать кокаин, из чего делают кокаин, кокаин эффект, кокаин наркотик, кокаин доза, дозировка кокаина, кокаин спб цена, как правильно употреблять кокаин, как проверить качество кокаина, как определить качество кокаина, купить кокаин цена, купить кокаин в москве, кокаин купить цена, продам кокаин, где купить кокс в москве, куплю кокаин, где достать кокс, где можно купить кокаин, купить кокс, где взять кокаин, купить кокаин спб, купить кокаин в москве, кокс и кокаин, как сделать кокаин, как достать кокаин, как правильно нюхать кокаин, кокаин эффект, последствия употребления кокаина, сколько стоит кокаин, крэк наркотик, из чего делают кокаин, из чего делают кокаин, все действие кокаина, дозировка кокаина, употребление кокаина, вред кокаина, действие кокаина на мозг, производство кокаина, купить кокаин в москве, купить кокаин спб, купить кокаин москва, продам кокаин, куплю кокаин, где купить кокаин, где купить кокаин в москве, кокаин купить в москве, кокаин купить москва, кокаин купить спб, купить куст коки, купить кокс в москве, кокс в москве, кокаин москва купить, где можно заказать, купить кокаин, кокаиновый куст купить, стоимость кокаина в москве, кокаин купить цена, продам кокаин, где купить кокс в москве, куплю кокаин, где достать кокс, где можно купить кокаин, купить кокс, где взять кокаин, последствия употребления кокаина

Болезнь малыша, сопровождаемая высокой температурой, является нелегким испытанием для родителей. Современная медицина располагает достаточным количеством препаратов, имеющим свойства снижения температуры и снятия действия простуды. Не всегда общераспространенные препараты для детей могут понизить поднявшуюся температуру, а многие сильнодействующие лекарства наносят вред детскому организму. Если жар у больного не спадает, его состояние может облегчить литическая смесь, которая в наши дни приобретает все большую известность. Это смесь всем известных лекарств, применяемая для быстрого понижения высокой или не сбивающейся температуры у заболевших детей и взрослых. Ее можно применить и как обезболивающий препарат. Чаще всего литической смесью пользуются врачи скорой помощи. Если машина не может прибыть вовремя, то надо заранее узнать у детского врача, из каких компонентов состоит смесь, сколько каждого лекарства берется в данном случае. После предписания и разрешения можно изготовить эту смесь дома самостоятельно. Необходимо строго выдерживать дозировки и соблюдать осторожность при применении. Смесь состоит из 3-х лекарств: Он избавит малыша от жара и уменьшит температуру. В практике врачей детская литическая смесь используется давно. Ее применяли задолго до открытия анальгина, поэтому состав у нее был другой: Впоследствии амидопирин был заменен анальгином, а кодеин совсем удалили из состава. У детишек повышение температуры может произойти очень быстро и за небольшой промежуток времени достигнуть критической отметки. Виной тому являются простудные заболевания. Иногда причиной высокой температуры может быть прорезывание у малыша зубов рекомендуем прочитать: Педиатры советуют применять литическую смесь, если:. При более низких показателях она не представляет опасности для здоровья малышей и говорит о том, что происходит борьба организма с болезнью, а это способствует повышению иммунитета. Перед приготовлением этого средства нужно очень тщательно определить нужные дозы, зависящие от возраста ребенка. Ни в коем случае не назначайте дозировку по своему усмотрению, проконсультируйтесь с врачом. Лучше, если его сделает врач. Обычно литическая смесь вводится внутримышечно — этот способ быстро снижает повышенную температуру и избавляет ребенка от жара. Чтобы литическая смесь для детей начала быстрее действовать, необходимо соблюдение нескольких правил:. Если сделать инъекцию ребенку не удается, медики позволяют выпить раствор. Он действует медленнее, чем укол: Внутренний прием анальгина не рекомендуют детям младше 8-ми лет из-за отрицательного действия на желудок и стенки кишечника. Еще один способ — приготовление смеси из таблеток. Надо взять необходимую долю дозировка должна быть рассчитана заранее вместе с врачом от всех 3-х таблеток: Таблеточная форма хороша тем, что в случае передозировки желудок ребенка можно будет промыть. Литическая смесь обладает высокой эффективностью, но у нее есть противопоказания. Не применяйте это средство, если:. Невыполнение указаний врача и очень частое использование этой смеси приводит к тому, что детский организм не воспринимает другие лекарства. Одноразовое употребление смеси дети переносят без труда, но иногда могут быть побочные результаты: К большому сожалению, передозировка лекарствами-компонентами литической смеси вполне возможна. Часто это случается по вине родителей — составляя литическую смесь, они порой неправильно определяют пропорции лекарств, в нее входящих, или же подают смесь слишком часто. В итоге доза смеси или одного из его лекарств превосходит допустимую норму в несколько раз. В случае появления у ребенка подобных симптомов надо немедленно вызвать машину скорой помощи. Пока она не приехала, дайте больному сорбент — например, Энтеросгель, Полисорб или активированный уголь. Если сорбент подать не удалось, постарайтесь вызвать рвоту. Ребенка надо напоить большим количеством прохладной воды, а потом надавить двумя пальцами на корень языка. Необходим контроль за температурой тела: Ни в коем случае не применяйте другие лекарственные препараты, чтобы избежать нагрузки на печень. Медицинские работники стараются использовать детскую литическую смесь лишь при очень высоких показателях и тех случаях, когда температура не понижается при использовании других лекарственных препаратов. В жизни могут быть разные ситуации, поэтому постарайтесь всегда хранить в семейной аптечке ампулы анальгина, димедрола и папаварина. Что она собой представляет? Какие лекарства включены в смесь и как они действуют? Показания к применению 4. Прием смеси внутрь в виде раствора или в таблетках 7. Отрицательные и побочные эффекты 8. Что делать при передозировке? Возможна замена состава смеси, если у заболевшего обнаружена непереносимость к одной из составных частей. Димедрол разрешается заменить супрастином или тавегилом. Вместо папаверина использовать но-шпу. Частое применение данного раствора не рекомендуется, потому что он является достаточно сильным препаратом. При его злоупотреблении можно нанести здоровью ребенка непоправимый вред. Похожие статьи по теме:. Вам будет также интересно прочитать:. Добавить комментарий Отменить ответ.

Купить анашу новосибирск

Что такое литическая смесь

Спайс россыпь в Орле

Закладки экстази в Томске

Приход от солей

Как сделать литическую смесь: состав и дозировка для детей (в таблетках и ампулах)

Марки в Бокситогорске

Метадон в Ртищеве

Купить закладки амфетамин в Чёрмозе

Литическая смесь для ребенка и взрослого

Коста Брава купить закладку Кокаин MQ

Купить LSD Обоянь

Форум о новостройках Звенигорода

Купить Спиды Заволжье

Купить жидкий экстази Канаш

Литическая смесь для детей как спасение от высокой температуры: состав, как приготовить и применять

Psilocybe в Северодвинске

Литическая смесь от температуры взрослым и детям: дозировка

Закладки LSD в Самаре

Литичка от температуры для детей в таблетках

Бошки в Меленки

Купить регу в новосибирске

Переславль-Залесский купить кокс

Литическая смесь для детей как спасение от высокой температуры: состав, как приготовить и применять

Купить Шмаль Старица

Кто изобрел спайс

Закладки метадон в Острогожске

Что такое литическая смесь

Порошок кристалла Ошугуна

Купить Гаштет Емва

Шницель «Цыганский» из сыра и колбасы

Капли лсд

Кохма купить Метадон VHQ

Литическая смесь для детей как спасение от высокой температуры: состав, как приготовить и применять

Апоморфина гидрохлорид

Как сделать литическую смесь: состав и дозировка для детей (в таблетках и ампулах)

Закладки гашиш в Сосногорске

Литическая смесь для детей как спасение от высокой температуры: состав, как приготовить и применять

Закладки спайс в Донецке

Закладки метамфетамин в Тереке

Ясный купить Гидропоника Afgan Kush

Литическая смесь от температуры взрослым и детям: дозировка

Купить Кокаин в Норильск

Альметьевск купить Героин ОПТ

Купить закладки наркотики в Альметьевске

Литическая смесь для детей как спасение от высокой температуры: состав, как приготовить и применять

Купить Скорость Усинск

Обход блокировки интернета | Эхо России

Купить кодеин Осинники

Е2 порошок легальный

Картон cc

Литическая смесь от температуры взрослым и детям: дозировка

Купить закладки MDMA в Среднеуральске

Литическая смесь для детей как спасение от высокой температуры: состав, как приготовить и применять

Как выращивать бошки

Как сделать литическую смесь: состав и дозировка для детей (в таблетках и ампулах)

Shama biz

Купить кодеин Туапсе

Купить стаф в Краснокаменск

Что такое литическая смесь

Форум legalrc

Экстази заказать

Купить Бошки Верея

Литическая смесь для детей как спасение от высокой температуры: состав, как приготовить и применять

Купить семена калея закатечичи

Пермь купить гашиш

Гашиш воронеж купить

Купить трамадол в Тула

Купить закладки экстази в Переславле-залесском

Литическая смесь для ребенка и взрослого

Зомзом биз

Литическая смесь от температуры взрослым и детям: дозировка

Литическая смесь для детей от температуры: дозировка, состав

Чтобы быстро понизить температуру, нужно сделать литический укол для ребёнка внутримышечно. Благодаря такому методу применения данной смеси происходит понижение температуры тела уже через десять-пятнадцать минут.

При повышенной температуре применяется литическая смесь, состав которой:

  • анальгин – 1 мл;         
  • димедрол – 1 мл;         
  • папаверин – 2 мл.

Всё это необходимо водить внутримышечно одним шприцом.

 Дозировка, когда применяется литическая смесь от температуры детям, особенно волнует родителей. Проще всего рассчитать дозу следующим образом: 0,1 миллилитра состава соответствует 1 году ребенка по каждому препарату. Так, если возраст равен одному году, то смесь состоит из анальгина, димедрола и папаверина по 0,1 миллилитру. Если возраст 2 года– 0,2 мл, и т. д.

Литическая смесь от температуры

Многих интересует, не вредно ли пить смесь, которая приготовлена из препаратов для уколов. Если возникла такая необходимость, то это можно сделать. Однако тогда температура будет снижаться гораздо медленней, чем если сделать укол от температуры ребёнку. С особой осторожностью следует принимать анальгин, так как при приёме средства внутрь происходит раздражении желудочно-кишечного тракта, особенно у детей. Для них производятся анальгиновые свечи.

Помимо уколов из литической смеси, существует также литическая смесь для детей в таблетках, дозировка которых также рассчитывается в зависимости от того, сколько лет ребёнку. Но при таком методе снижение температуры произойдет медленней, чем при уколе – примерно спустя тридцать минут или один час.

 Литический укол для ребёнка: показания для применения 

Введение литической смеси имеет основное показание – это повышение температуры тела малыша до 38,5 °C.

Очень часто применение смеси происходит, когда не получается понизить температуру лекарственными препаратами (Нурофен, Детский Панадол и др.), принимаемыми внутрь.  Также литическая смесь используется, если препарат невозможно принять перорально. Например, при рвоте или потере сознания. В этих случаях также можно применять свечи для понижения температуры.

Противопоказания для применения литической смеси следующие:

  • Когда повышение температуры происходит одновременно с болевыми ощущениями в животе. Литическая смесь снимает боль. Однако, если у ребёнка идет процесс воспаления аппендицита, это будет опасно. Нельзя применять подобное средство до осмотра доктора. Это скроет признаки заболевания, и у больного могут развиться опасные осложнения.        
  •  Бывают случаи, когда для лечения в последние четыре часа уже применялись лекарства, которые содержатся в составе литической смеси. Тогда нужна передозировка лекарства либо использование других лекарственных средств.        
  •  Когда у больного имеется аллергия на лекарства, входящие в состав препарата.        
  •  Детям до шести месяцев нельзя принимать папаверин.

Теги по теме:
здоровьеребенок 1-3

Оцените материал:

спасибо, ваш голос принят

 

«Пока я лежал в больнице с коронавирусом, дома переболела вся семья. Но у них диагноз — ОРВИ» — Город — Новости Санкт-Петербурга

Поделиться

Я перенес коронавирус в среднетяжелой форме. Врачи были откровенны со мной, потому что я сам — врач. Когда я поступил в больницу имени Боткина, думал, неделю полежу и выпишусь. Но медики предупредили: «Мы не можем предсказать, как ты будешь переносить эту болезнь».

Все началось 19 апреля. Сначала чувствовалась сильная слабость. В первый день я думал, что это «на погоду». Не хотелось никуда идти, просто лежать. Поскольку был выходной, то я и лежал. Весь день. А на следующее утро поднялась температура. Начались боли в мышцах. Все тело болело: ноги, руки, прямо ломка какая-то. Но я даже не думал, что это может быть коронавирус. Мои симптомы не вызывали у меня настороженности: ни насморка, ни кашля. Температура колебалась от 37,5 до 38,5. И так — вплоть до госпитализации через 5 дней. Когда температура поднималась до 38,5, я ее сбивал. Но она не сбивалась до нормальной, сколько бы жаропонижающего я ни выпивал, уходила в 37,5 минимум.

У меня пропало обоняние и чувство вкуса. В конце концов близкие просто заставили меня сделать компьютерную томографию легких. В нашей клинике нет аппарата, поэтому мне пришлось буквально бегать по городу в поисках места, где можно сделать томографию. Да, мне пришлось сбить температуру перед процедурой, потому что ее измеряли на входе. Но я пришел полностью в СИЗ, и всё было организовано так, что я ждал своей очереди в отдельном помещении и ни с кем не пересекался. Как мне сказали, передо мной тоже был пациент с вирусной пневмонией. Потом рентгенолог вышел с круглыми глазами и сказал мне: «Срочно в больницу!»

У меня была двусторонняя пневмония с поражением 70–80 % легких, с множественными очагами воспаления по типу «матового стекла». В заключении говорилось: «Подозрение на вирусную пневмонию, не исключен COVID-19». Было 24 апреля. В этот же день я лег в больницу. Собрал сумку и поехал в Боткинскую больницу, не вызывая скорую. Там я просто договорился с коллегами-однокурсниками, которые там работают. Они меня ждали.

Меня поместили в отдельный бокс и начали лечить. С первого дня мне стали давать гидроксихлорохин, плюс два антибиотика — один в капельнице, второй в таблетках. Еще давали таблетки от кашля и от изжоги. Последнее было, скорее, потому, что «так положено» при приеме антибиотиков.

Со второго дня в больнице у меня началось серьезное ухудшение состояния. Мне стало очень тяжело дышать. Температура поднялась до 39,5. Поначалу мне давали парацетамол, который я пил на ночь, чтобы хоть чуть-чуть поспать. К 4 утра температура опять поднималась, и я снова пил парацетамол. А потом она просто перестала сбиваться. Тогда мне прокапали жаропонижающее в капельнице. Но и это не помогло. Мне вкололи внутримышечно так называемую литическую смесь — очень болезненный укол. Температура снизилась, но только до 37,5. И тут уже врач испугался. Больше способов снизить температуру не осталось. А если не снизить — это обостряет все хронические заболевания, мишенью оказываются сердце, головной мозг, организм ослаблен и открыт для присоединения новых инфекций. При длительной температуре может развиться полиорганная недостаточность.

Всю неделю в больнице я плохо спал. На 5–6 день мне стали давать успокоительное. Состояние сознания при коронавирусе, прямо скажем, тяжелое: не то что книжки читать, даже кино смотреть невозможно. Тяжело сконцентрироваться, обостряется раздражительность. Тебя бесит все. Особенно люди, которые звонят, чтобы узнать, как дела. Честно скажу, мне было страшно.

Первый тест на коронавирус мне сделали 24 апреля. Положительный результат пришел через день. Второй тест взяли через неделю. Он тоже был положительный. Под выписку сделали еще два. Тест, сданный 3 мая, оказался отрицательным.

На лекарства у меня была индивидуальная реакция — жуткая икота. Сначала это всех смешило. Но икота не прекращалась в течение трех дней ни днем, ни ночью. Скорее всего, это была реакция на гидроксихлорохин — раздражение диафрагмы или чего-то еще. У меня уже живот начал болеть от икоты. Мне стали давать церукал — противорвотное.

Еще я отдельно попросил, чтобы мне назначили клексан — это уколы в живот, которые снижают тромбообразование. Этот препарат я покупал себе сам, его не было в больнице. Но я решил, что это нужно сделать, потому что к тому моменту уже накопились наблюдения медиков, что осложнением при коронавирусе часто бывает тромбообразование (а это приводит к инсультам, инфарктам), то есть нужно делать профилактику. Правда, это были источники на английском языке. Более дешевый аналог клексана — аспирин.

Трижды в день ко мне приходил врач с пульсоксиметром. Отклонений по уровню насыщения крови кислородом у меня не было. Это был основной критерий того, насколько ухудшается мое состояние. Если бы уровень кислорода начал снижаться, я бы попал в реанимацию.

Я просил, чтобы мне дали кислород, потому что он существенно облегчает состояние. Но заведующий отделением сказал мне: «Ты сейчас привыкнешь к чистому кислороду, тебе станет легче, уровень кислорода в крови повысится. Но как мы сможем понять, не началась ли отрицательная динамика в организме?» Тут я с ним согласился.

Врачи, которые лечили меня, были со мной откровенны. Они говорили, что не могут предсказать, каким будет течение болезни. И что очень многое зависит от того, насколько сильным окажется иммунитет. Я бы хотел это подчеркнуть. У меня на момент начала болезни иммунитет был плохой. И я сам в этом виноват. В первый же день, когда я почувствовал слабость, надо было начинать лечение, но я решил «отлежаться». Как только поднялась температура, я тоже ничего не делал — работал дома, разговаривал, занимался делами. Я не придавал значения болезни и, видимо, ухудшил ее дальнейшее течение. Если бы я сразу начал пить много жидкости, принимать витамины, я бы, наверное, смягчил последствия.

У меня дома остались жена, дети двух и четырех лет, и теща 62 лет. Через шесть дней после того, как я попал в больницу, жена и теща тоже заболели, симптомы были схожи с моими. Я понимал, что если их госпитализируют, детей девать некуда: няню не вызовешь, дети контактные. Поэтому лечились дома сочетанием рибавирина и арбидола. Плюс — большие дозировки витаминов С, D и цинка. Такое лечение мне подсказали коллеги из Военно-медицинской академии. Еще жена и теща сделали КТ. «Матовое стекло» было у обеих, потеря обоняния и чувства вкуса тоже. Из поликлиники в Парголово пришли, взяли мазки — результата нет до сих пор, хотя все уже выздоровели. «Если ответа нет, значит, отрицательный», — говорят нам. Но где гарантия, что мазки просто не потерялись? Вся моя семья была контактной, и симптомы были схожи с моими.

Как только я лег в больницу, я настоял, чтобы дома все принимали витамины. Но по сути они лечились на свой страх и риск, и я не хочу, чтобы кто-то воспринимал это как руководство к действию. К тому же у нас дома есть пульсоксиметр и можно контролировать насыщение крови кислородом — если бы оно начало падать, конечно, все сразу же поехали бы в больницу.

Детям мы КТ не делали, результаты их мазков мы так и не получили. Симптомов у них не было, поэтому мы ничего не давали им, кроме витамина С.

Есть еще важный момент. Теще нужен был больничный лист. Чтобы его открыть, вызвали участкового врача на дом. Поначалу, услышав, что у тещи температура, в поликлинике сказали, что это ОРВИ и надо лечиться симптоматически. Врач приехала практически без средств индивидуальной защиты, просто в одноразовой маске и перчатках. Хотя теща предупредила, что был контакт с зараженным коронавирусом. Компьютерную томографию легких сделали за свой счет. На КТ было видно, что у жены и тещи пневмония. Но врач после этого визита так ни разу больше и не появилась. Карантин членам моей семьи никто не назначал. Я думаю, что в официальную статистику они не попали.

Меня выписали 8 мая, через две недели после того, как я поступил в больницу. Еще две недели был на самоизоляции. До сих пор у меня сохраняется слабость, и мне сложно дышать, если я, например, говорю по телефону на ходу. О том, чтобы пробежаться, я пока даже не мечтаю. Я бы сдал кровь на плазму, чтобы это помогло тем, кто болеет сейчас. Но ко мне с таким предложением никто не обращался. Сам я не могу разобраться, куда её сдать, чтобы ее максимально эффективно использовали. Как я могу понять, где больше всего в ней нуждаются?

И до того, как заболел, я понимал, что это не выдуманная болезнь. Но осознания, насколько это опасно, не было. Теперь, когда вся моя семья переболела и я перенервничал за них, мне хочется рвать и метать, когда известная телеведущая Елена Малышева называет этот вирус «чудо чудное» или когда доктор Мясников заявляет журналистам, что волноваться не о чем, потому что смертность от коронавируса «низкая».

Людям не хватает информации о новом коронавирусе из первых рук. Думаю, было бы полезно, если бы врачи хотя бы иногда делали, например, прямые трансляции в «Инстаграм» и рассказывали о том, какие бывают клинические картины у этой болезни, как лечат таких пациентов. Чтобы остальные понимали: болезнь не выдуманная и очень опасная.

Я видел, насколько это опасно. В день моей госпитализации в Боткинской умер врач из Александровской больницы. Понятно, что врачи для врача сделали все, чтобы его спасти — и все равно не удалось. А если заболеть где-нибудь в 100 километрах от Петербурга, просто беда. Не потому, что медики плохие, а потому, что нужных лекарств или аппаратов может не найтись. И еще меня крайне удивляет, когда мои знакомые вызывают врача на дом, имея симптомы коронавируса, и им ставят диагноз ОРВИ. И заболевшие тянут с началом настоящего лечения.

Всех, у кого ухудшилось состояние или у кого начали болеть родственники, я бы хотел попросить быть максимально бдительными: вирус тем и коварен, что на начальном этапе его легко спутать с известными нам вирусными заболеваниями. Уверен, что сейчас врачи уже стали более настороженными, но всё-таки изменения в лёгких они часто не слышат. Единственный выход — сделать компьютерную томографию.

Еще я хотел бы сказать своим коллегам-врачам: относитесь к коронавирусу максимально серьезно. В Боткинской больнице все медсестры и санитарки, которых я видел, были старше 50. И каждый день я тысячу раз говорил им «спасибо» за их работу и за их риск.

Записала Венера Галеева, «Фонтанка.ру»

Возможно ли применение парацетамола и анальгина вместе?

Как сбить температуру у ребенка :12

Этим утром, я встала с огромным трудом, глаза, напрочь отказывались открываться, а руки и ноги, вовсе не хотели слушаться. Да ночка действительно выдалась беспокойная. А началось все, поздно вечером, когда

Подробнее

Жаропонижающие свечи для детей до года :00

Предусмотрительные родители еще до приезда малыша из роддома заботятся о том, чтобы ему было комфортно. И сейчас считается необходимым вместе с приданым подготовить детскую аптечку, где будет все самое

Подробнее

Жаропонижающие при беременности :00

Беременность всегда меняет привычный распорядок и привычки. Женщина в положении должна вести здоровый образ жизни, правильно питаться, больше отдыхать и ни в коем случае не расстраиваться по пустякам.

Подробнее

Температура у ребенка что делать?

Температура у ребенка что делать? Когда Ваш малыш болен, мы готовы сделать все, чтобы ему помочь. Но что именно нужно сделать, и как при этом не навредить ребенку, знает далеко не каждый. Повышение температуры

Подробнее

Как сбить температуру у грудничка? :00

Повышение температуры у младенца всегда является симптомом какого-то заболевания. Симптом этот положительный, он означает, что организм адекватно отвечает на возникновение заболевания. 1 / 6 Известно,

Подробнее

1. Общие положения. Оснащение:

1. Общие положения. Инъекция это впрыскивание лекарственных веществ в ткани, сосуды, полости, субарахноидальное пространство. Цель внутримышечной инъекции: введение лекарственного средства в мышечную ткань.

Подробнее

Микардис таблетки по 80 мг 28 (7х4)

mini-doctor.com Инструкция Микардис таблетки по 80 мг 28 (7х4) ВНИМАНИЕ! Вся информация взята из открытых источников и предоставляется исключительно в ознакомительных целях. Микардис таблетки по 80 мг

Подробнее

Khatkhokhu M.G., Popova Ya.S., Tsygankova L.Yu.

ОСНОВЫ ТЕРАПИИ АБУЗУСНОЙ ГОЛОВНОЙ БОЛИ Хатхоху М.Г., Попова Я.С., Цыганкова Л.Ю. Майкопский Государственный Технологический Университет, медицинский институт Майкоп, Адыгея THE BASIS OF MEDICATION OVERUSE

Подробнее

ЧТО ТАКОЕ САХАРНЫЙ ДИАБЕТ?

ЧТО ТАКОЕ САХАРНЫЙ ДИАБЕТ? Сахарный диабет пожизненное заболевание, характеризующееся повышенным содержанием сахара (глюкозы) в крови как следствие недостатка инсулина. Однако, вы можете научиться управлять

Подробнее

Лечение простуды во время беременности :00

Возможно, вы это просто почувствовали, возможно, экспресс тест показал две, еле заметные, полоски, а может, этой новостью вас ошарашил гинеколог, на прием к которому, вы вообще, пришли по-другому поводу.

Подробнее

Показания к применению

Латинское название: Neurobion Код АТХ: А11DВ Действующее вещество: витамины В1, В6, В12 Производитель: раствор д/инъекций MERCK, KGaA (ФРГ) таблетки: MERCK (Австрия) Условие отпуска из аптеки: По рецепту

Подробнее

Детская аптечка в дорогу :40

С самого первого дня, после того, как вы с малышом вернетесь из роддома, вам желательно, собрать, и всегда иметь под рукой, детскую аптечку. Возможно, многие лекарства из нее, вам никогда не пригодятся,

Подробнее

Чем лучше полоскать горло? :00

Дискомфорт в горле, боли при глотании, першение, сухость во рту, красные миндалины и увеличенные лимфоузлы — все это, в сочетании со слабостью, ломотой, насморком, кашлем и иногда повышенной температурой,

Подробнее

Менингококковая инфекция B (Men B)

Менингококковая инфекция B (Men B) На этой странице содержатся краткие сведения о данной болезни и вакцине против нее. Ссылки на ресурсы с более подробной информацией приведены в конце страницы. Что такое

Подробнее

Первая помощь при ожогах у детей :24

С чем только не приходится сталкиваться, воспитывая ребенка. Но не всегда, получается, уследить за подвижным и активным малышом, на секунду отвернешься, а он, уже пытается засунуть палец в розетку, или

Подробнее

Контроль глюкозы в крови. Гипогликемия

Контроль глюкозы в крови. Гипогликемия Контроль глюкозы крови Контроль глюкозы крови Контроль сахарного диабета означает поддержание глюкозы в крови на уровне, близком к норме. В норме у людей без диабета

Подробнее

ПРАВИТЕЛЬСТВО РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРАВИТЕЛЬСТВО РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ П О С Т А Н О В Л Е Н И Е от 15 ноября 2017 г. 1380 МОСКВА Об особенностях описания лекарственных препаратов для медицинского применения, являющихся объектом закупки

Подробнее

РЕЗОНАТИВ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ

РЕЗОНАТИВ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ Состав: международное непатентованное название: Human anti-d immunoglobulin; действующее вещество: 1 мл 625 МЕ (125 мкг) анти-d иммуноглобулина человека. (содержание

Подробнее

ПАМЯТКА ДЛЯ НАСЕЛЕНИЯ О ГРИППЕ

ПАМЯТКА ДЛЯ НАСЕЛЕНИЯ О ГРИППЕ Грипп чрезвычайно контагиозное острое инфекционное заболевание, легко передающееся от человека к человеку и распространенное повсеместно. Каждый человек абсолютно восприимчив

Подробнее

Основные рекомендации для населения

Грипп и ОРВИ Острые респираторные инфекции (ОРИ) заболевания, которые передаются воздушно-капельным путем и вызываются различными возбудителями: вирусами (аденовирусы, вирусы гриппа, парагриппа, респираторно-сентициальные

Подробнее

Бактериофаг Интести раствор по 100 мл

mini-doctor.com Инструкция Бактериофаг Интести раствор по 100 мл 1 ВНИМАНИЕ! Вся информация взята из открытых источников и предоставляется исключительно в ознакомительных целях. Бактериофаг Интести раствор

Подробнее

Что такое гемофилия?

Что такое гемофилия? 1425 René Lévesque Boulevard West, Suite 1010 Montréal, Québec h4G 1T7 Canada Что такое гемофилия? Гемофилия это проблема кровотечения. У больных гемофилией кровотечение происходит

Подробнее

Как приготовить литическую смесь

Литическая смесь — незаменимый инструмент для эффективного и быстрого снижения высокой температуры. Чаще всего литическую смесь применяют для лечения гипертермии у детей раннего возраста.

Инструкция

1

Детское заболевание, сопровождающееся высокой температурой, — непростое испытание для молодых родителей. Далеко не всегда удается сбить жар у малыша обычными средствами, и в этом случае на помощь приходит литическая смесь, в состав которой входят 50% анальгина, 1% димедрола и 0,1% папаверина.

2

Литическую смесь применяют только в том случае, если гипертермия длится более 5 часов, температура не опускается ниже 38,5 ° С, а обычные жаропонижающие средства не дают эффекта. После введения литической смеси температура снижается на полчаса.

3

При приготовлении литической смеси важно соблюдать дозировку в соответствии с возрастом ребенка. На каждый год жизни требуется по 0,1 мл каждого компонента смеси. Компоненты набираются в шприц, после чего производится внутримышечная инъекция в верхний внешний квадрат ягодицы.Игла вводится строго перпендикулярно коже на 2/3 ее длины. В связи с тем, что смесь содержит анальгин (метамизол натрия), инъекция достаточно болезненна, и вводить лекарство необходимо медленно. После введения лекарства на месте укола может образоваться шишка. Чтобы предотвратить появление инфильтратов, место укола можно обработать йодной сеткой.

4

Перед смешиванием компонентов ампулы с ним необходимо подержать лекарство в ладонях для его разогрева.После этого ампулы обрабатываются спиртом, чтобы предотвратить попадание в лекарство болезнетворных микроорганизмов. Для инъекций используются только одноразовые шприцы.

5

Если у вас нет возможности сделать укол, можно приготовить смесь для перорального применения, используя необходимые препараты в таблетках, но инъекция намного эффективнее. Прием таблеток снижает температуру не так быстро, как укол.

6

Для использования литической смеси для понижения температуры есть противопоказания.В частности, инъекции запрещены, если гипертермия сопровождается болями в животе. Обезболивающее действие препарата затруднит диагностику. Не рекомендуется повторно использовать литическую смесь, если ребенку уже сделали укол и вскоре снова поднялась температура. Также противопоказано применение литической смеси при индивидуальной непереносимости компонентов препарата. Детям до 6 месяцев литическую смесь следует готовить без папаверина, так как это спазмолитическое средство не рекомендуется для новорожденных.

Как приготовить литическую смесь для взрослого

Литическая смесь — это раствор нескольких препаратов. В его состав входят 3 компонента: антигистаминный препарат, представитель группы ненаркотических анальгетиков и спазмолитическое средство.

Инструкции

1

Литическую смесь целесообразно применять как быстродействующее средство при высокой температуре и как анальгетик быстрого действия. Уникальное сочетание анальгетика с антигистаминными и сосудорасширяющими препаратами обеспечивает снижение температуры до нормальных значений в течение 20-30 минут.

2

Если вы решили нормализовать температуру у больного литической смесью, обязательно проверьте, нет ли индивидуальной непереносимости ее компонентов, т.к. есть аллергия на «Димедрол», «Анальгин» и другие препараты. Существует ряд противопоказаний к применению литической смеси, например, ее нельзя вводить пациенту при высокой температуре на фоне абдоминального синдрома (боли в животе неясного характера). Также запрещено применять литическую смесь тем пациентам, которые принимали анальгетики в течение последних 4 часов.Дозу составляющих компонентов литической смеси необходимо рассчитывать для взрослого пациента индивидуально с учетом его массы, т. введение смеси меньших доз не приведет к терапевтическому эффекту, а превышение предельно допустимых назначений может привести к тяжелым последствиям и навредить здоровью.

3

В составе литической смеси ненаркотических анальгетиков рекомендуется использовать «Анальгин», его раствор всегда выпускается в концентрации 50%.«Анальгин» обладает жаропонижающим действием, помогает купировать болевой синдром, развивающийся при воспалении, а также оказывает противовоспалительное действие на организм. Для литической смеси используется максимально допустимая разовая доза препарата — 1 г. 2 мл 50% раствора. Раствор «Анальгин» имеет маслянистую структуру, поэтому рекомендуется предварительно набрать его в шприц.

4

Добавьте антигистаминный препарат в шприц. Для литической смеси часто используют «Дифенгидрамин». Этот препарат позволяет не только нейтрализовать аллергическую реакцию, развивающуюся в ответ на вирусы и бактерии, продуцируемые токсинами, но и снимает спазм мышечных волокон.Под действием «Димедролуса» мышцы расслабляются, восстанавливается кровоток в периферических сосудах, что позволяет лучше «работать» иммунитету. Дозируется «Димедрол» взрослому пациенту 10-50 мг, в литической смеси используют 2-3 ампулы по 1 мл. Если под рукой нет «Димедрола», можно использовать Супрастин, его дозировка составляет 1-2 мл.

5

Третий компонент литической смеси должен быть спазмолитиком. Из всего многообразия препаратов этой группы врачи предпочитают «Папаверин» или «Дротаверин».Дозировка одного из этих препаратов для литической смеси взрослому человеку составляет 2 мл.

6

После последовательного набора всех 3 компонентов закрыть иглу колпачком и перемешать раствор. Для этого аккуратно встряхните шприц 3-4 раза. Затем визуально отметьте место инъекции (верхняя внешняя четверть ягодицы), обработайте кожу в этой точке спиртом и сделайте внутримышечную инъекцию.

49: Бактериофаги (эксперимент) — Biology LibreTexts

  1. Последнее обновление
  2. Сохранить как PDF
  1. НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ: по таблице
  2. ПРОЦЕДУРА
    1. Общая процедура
    2. Подробная процедура со схемой
  3. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
  4. ВОПРОСЫ
  5. Авторы и ссылки

Цели обучения

  • Узнайте, как культивировать вирусы в клетке-хозяине
  • Определите количество вирусов в образце
  • Определить вирусные бляшки на бактериальном газоне

Бактериофаги — это вирусы, поражающие бактерии.PHAGE (как в случае фагоцитоза) означает «есть» и обычно относится к вирусу. У большинства бактерий есть фаги, способные паразитировать на них. Фактически, способность инфицироваться известным типом фага используется для идентификации некоторых штаммов бактерий (например, Staph ), известных как фаг с типом . Поскольку вирус заражает бактериальные клетки, с которыми он был смешан, литическая инфекция уничтожает бактерии. Бактерии были высыпаны на так называемую бактериальную лужайку на чашке с агаром.По мере того как окружающие клетки заражаются и убиваются выпущенными вирусами, на агаре — на бактериальной лужайке — образуется чистое пятно, которое называется бляшкой . Бляшки можно подсчитать и определить количество вирусных частиц или вирионов в них. исходный образец можно количественно определить как вирусов / мл бляшкообразующих единиц / мл (БОЕ).

В этой лаборатории будут использоваться 2 вида бактериофагов — вирусы T4 и phi 174. Бактериями-хозяевами являются 2 разных штамма E. coli , поэтому эти бактериофаги называются колифагами.Цель использования 2 разных вирусов — показать специфичность вируса для его хозяина, даже для этих маленьких бактериальных вирусов. Разжиженный триптоновый мягкий агар, в который помещаются бактерии и вирусы, имеет меньшую концентрацию агара, чем обычный разжиженный агар. Это способствует лучшему распространению вирусов и лучшему контакту с бактериями.

НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ: на стол

  • 10 -3 разведение бактериофага (этот 1/1000 уже сделан для вас) — либо T4, либо phi 174
  • микропипетка и наконечники
  • Пи-помпа и пипетки 10 мл
  • 5 пробирок для разведения
  • 1 флакон физиологического раствора (0.9% NaCl) для разведения
  • Водяная баня 50º C
  • 1 штамм E. coli (B или C) в TSB
  • 6 пластин TSA
  • 6 — Пробирки с жидким мягким агаром по 3 мл (на водяной бане)

ПРОЦЕДУРА

Общая процедура

  1. Образец фага, который вы будете использовать, уже разбавлен до 1/1000, и вы будете разбавлять его дальше.
  2. Бактерии и фаг смешивают в пробирках с мягким агаром.Смесь инкубируют на водяной бане.
  3. После инкубации смесь добавляют в мягкий агар и выливают на чашки с триптонным агаром.
  4. ОБЯЗАТЕЛЬНО смешайте разведения.
  5. Меняйте пипетки между разведениями.
  6. В каждой таблице будет использоваться различная комбинация фага и хозяина E. coli .

Подробная процедура со схемой

Установите 5 пробирок для разбавления с физиологическим раствором (0,85% NaCl) с маркировкой 10 -4 , 10 -5 , 10 -6 , 10 -7 и 10 -8 .В каждую пробирку налейте 9 мл pf, в которые вы разведите вирусный раствор. Вы будете делать 1/10 разведения.

  1. Начиная с разведения вируса 10 -3 , которое вы подобрали (или дали ваш инструктор), перенесите 1 мл в пробирку для разведения с маркировкой 10 -4 и перемешайте.
  2. Сделайте еще 4 разведения до 10 -8 .
  3. В 6 микропробирок добавьте 100 микролитров каждого вирусного разведения плюс 300 микролитров E.coli . Дайте постоять при комнатной температуре 10 минут, пока вирус не заразит бактерии. . Хорошо перемешайте.
  4. Переместите пробирки в водяную баню и перенесите все содержимое пробирок с фагом E. coli — в 6 пробирок с мягким агаром, используя стерильную пластиковую пипетку для переноса. Хорошо смешать. СОХРАНЯЙТЕ МЯГКИЕ АГАРЫ ВНУТРИ ВОДНОЙ ВАННЫ, ЧТОБЫ ОНИ НЕ ЗАВЕРДАЛИСЬ.
  5. Удалите по 1 пробирке с мягким агаром и вылейте ее на чашки с агаром TSA, осторожно вращая пластину WELL , чтобы фаговые бактерии распространились по всему агару.
  6. Дайте планшетам затвердеть и инкубируйте при 37 ° C правой стороной вверх .

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

  1. Положите 6 чашек лицевой стороной вверх, от наименьшего разбавления к наибольшему разбавлению.
  2. Возьмите каждую пластину, поднесите ее к свету и определите, какая из них содержит от 30 до 300 пластинок (вы также можете использовать счетчики колоний Квебека — хорошая подсветка!)
  3. Получите точное количество этой тарелки. Заполните формулу для подсчета вирусов.
  1. Рассчитайте количество вирусов на мл. оригинального экземпляра.

ВОПРОСЫ

  1. Почему количество вирусов выражается в единицах образования бляшек (БОЕ)?
  2. Два фага росли на обоих штаммах E. coli ? Почему или почему нет?
  3. Определите количество бляшек / мл для вашего вирусного образца.

Авторы и авторство

Принцип, процедура, результаты • Microbe Online

Последнее обновление 30 мая 2021 г.

Бактериофаги «пожиратели бактерий» — это инфекционные агенты, которые размножаются как облигатные внутриклеточные паразиты в бактериях, но во внеклеточной среде они метаболически инертны.Типичный фаг содержит «голову» (содержащую ДНК, встроенную в белковую оболочку), «шейку» и белковый «хвост» (для адсорбции на рецепторе, присутствующем на поверхности бактериальной клетки). Бактериофаги (сокращенно фаги) классифицируются на две основные группы в зависимости от способа их размножения:

  1. Вирулентный (литический фаг) : Рост вирулентного фага в чувствительных бактериях разрушает клетки-хозяева и производит множество копий самих себя. например Фаги Т2 и Т4 E. coli.
  2. Фаг умеренного климата: Фаги умеренного климата способны переходить в нелитическое состояние профага.

По мере того, как мир борется с проблемами роста устойчивости к противомикробным препаратам, проводятся различные исследования для оценки применения фагов для лечения бактериальных инфекций (в качестве замены антибиотикотерапии).

Использование фагов для лечения бактериальных инфекций было разработано еще в 1920-х и 1930-х годах в Восточной Европе и Советском Союзе.

Анализ зубного налета — один из широко используемых подходов для определения количества инфекционного вируса в образце. Таким способом можно анализировать только вирусы, которые вызывают видимые повреждения клеток. Анализ зубного налета был впервые разработан для расчета титров исходных бактериофагов. В настоящее время его модифицированная процедура используется также для определения титра многих различных вирусов животных.

Принцип анализа фаговых бляшек

Когда суспензия инфекционного фага (e.грамм. T4 фаг) распространяется по лужайке восприимчивых бактериальных клеток (например, Escherichia coli), фаг прикрепляет бактериальную клетку, реплицируется внутри нее и убивает ее во время литического высвобождения. На лизис бактериофага указывает образование зоны очистки или налета на лужайке от бактерий. В отсутствие литического фага бактерии образуют сплошную лужайку роста.

Каждая бляшка соответствует участку, где один бактериофаг выступил в качестве инфекционной единицы и инициировал свой литический цикл.Распространение инфекционного фага от первоначально инфицированной бактериальной клетки к окружающим клеткам приводит к лизису находящихся поблизости бактерий, в конечном итоге формируя налет, достаточно большой, чтобы быть видимым невооруженным глазом. Бляшки не продолжают распространяться бесконечно. Размер образовавшейся бляшки зависит от вируса, хозяина и условий культивирования.

Количество образующихся бляшек и соответствующие коэффициенты разведения можно использовать для расчета количества бактериофагов i.е.
бляшкообразующих единиц (БОЕ) в образце.

Среда, используемая в анализах фаговых бляшек, имеет относительно низкий процент агара и поэтому называется мягким агаром ; он обеспечивает диффузию фага в соседние неинфицированные клетки, но не позволяет новым фагам перемещаться в удаленные части планшета.

Процедура анализа бактериофаговых бляшек

Анализ бактериофаговых бляшек

Приготовление исходного раствора серийным разведением
  1. Поместите восемь стерильных пробирок с физиологическим раствором (0.По 9 мл) в штатив для пробирок.
  2. Пометьте одну пробирку «контрольной», а остальные пять пробирок пометьте последовательно от 10 -1 до 10 -7.
  3. Пометьте шесть чашек с питательным агаром так же, как и пробирки.
  4. С помощью стерильной пипетки на 1 мл асептически перенесите 0,1 мл суспензии бактериофага в пробирку с солевым раствором, обозначенную 10 -1 .
  5. Трубку хорошо перемешайте, перекручивая ее между ладонями.
  6. С другой пипеткой на 1 мл перенесите 0.1 мл из пробирки 10 -1 в пробирку 10 -2 . Перемешайте в пробирке.
  7. Используя новую пипетку для каждого переноса, перенесите 0,1 мл суспензии из пробирки 10 -2 в пробирку 10 -3 и продолжите эту процедуру разведения последовательно для оставшихся пробирок с физиологическим раствором. Не забывайте тщательно перемешивать каждую пробирку до и после разбавления.
Наложение чашки со смесью фага и агара
  1. (Примечание: здесь нужно работать быстро) Возьмите шесть пробирок с расплавленным мягким верхним агаром из водяной бани.Внесите пипеткой по 0,3 мл бульонной культуры E.coli в каждую из пробирок с мягким агаром. Хорошо перемешайте каждую трубочку, перекатывая между ладонями. Пометьте каждую пробирку своими инициалами и как можно скорее верните их в ванну. Не позволяйте агару затвердеть.
  2. (снова работайте быстро) Удалите одну засеянную пробирку с мягким агаром из водяной бани. Вытрите всю воду с поверхности трубки. Используя пипетку на 1 мл, асептически перенесите 0,1 мл солевого фагового разведения 10 -1 в пробирку с мягким агаром.Перемешайте пробирку с агаром, перекручивая ее в руках.
  3. Немедленно асептически вылейте мягкий агар на поверхность чашки с питательным агаром, обозначенной соответственно как 10 -1 . Закройте крышку и, не поднимая чашку, осторожно поверните ее по 6-8-дюймовому кругу на поверхности стола, чтобы равномерно распределить агар.
  4. Используя каждый раз свежую пипетку на 1 мл и работая быстро, повторите шаги 1 и 2 для оставшихся пробирок для разведения фагов с физиологическим раствором и для контрольной пробирки с физиологическим раствором.
  5. Для каждой пробирки для разведения используйте чашку с питательным агаром, помеченную соответствующим образом.
  6. Дайте мягкому агару затвердеть.
  7. Переверните и инкубируйте планшеты при температуре от 35 ° C до 37 ° C в течение 24 часов.

Результаты

  1. После инкубации исследуйте каждую чашку и подсчитайте количество бляшек на каждой чашке, на которой есть четко дифференцированные бляшки.
  2. Запишите свои подсчеты. Пластины, на которых бляшки покрывают всю пластину и на которых бляшки не различимы друг от друга (более 300 бляшек), должны быть записаны как TNTC (слишком много, чтобы их можно было подсчитать).
  3. Рассчитайте количество литических фагов на миллилитр, которые были в исходной суспензии бактериофага, используя формулу, упомянутую выше.

Результаты анализа бактериофаговых бляшек

Если 48 бляшек наблюдаются при коэффициенте разведения 10 -5 , при добавлении 0,1 мл вируса количество бляшкообразующих единиц / мл будет 4,8 X 10 7 .

На практике вы можете подсчитать бляшкообразующие единицы, рассчитать и свести в таблицу следующим образом:

0

  • 9044

    1. Блог вирусологии: Обнаружение вирусов: анализ зубного налета
    2. Биология микроорганизмов Брока, Майкл Т.Мэдиган
    3. Принципы микробиологии Рональда М. Атласа
    4. Лабораторные упражнения по микробиологии Роберта А. Поллака и др.

    Связанные

    Лаборатория 1: Фаговое титрование

    Фаговое титрование (определение количества фагов).
    частиц в запасе) — важный метод молекулярной биологии. Когда проверяются генетические библиотеки в фаговых векторах
    для положительных клонов скрининговые планшеты должны иметь
    приблизительно 50-500 фаговых бляшек на пластину для достижения оптимальных результатов.Меньше бляшек будет означать, что слишком много тарелок
    придется проверить, в то время как большее количество бляшек затруднит идентификацию
    отдельные положительные бляшки. Таблички в
    идеальный диапазон получается путем подготовки последовательных разведений исходных фагов.

    Также будет подготовлена ​​планшет для штриховок для одиночных колоний.

    Несколько заметок о бактериофаге:

    Бактериофаги составляют вирусов . Это означает, что для размножения им нужна подходящая клетка-хозяин.Фаговый запас, который вы будете титровать
    содержит вектор клонирования бактериофага лямбда Ch5 с P. ochraceus Eco RI
    в него клонирована геномная библиотека. Гостья
    клеткой, используемой для выращивания фага, будет Escherichia coli штамм C600. Поскольку сайт связывания фага лямбда
    белок транспорта мальтозы, клеток E. coli , используемых в качестве хозяина для лямбда
    необходимо выращивать в среде, содержащей мальтозу, чтобы вызвать экспрессию lamB
    ген.

    Пластинчатые культуры бактериофагов получают путем комбинирования
    фаг с восприимчивыми клетками-хозяевами в верхних слоях агара (поверх
    чашки с обычным питательным агаром). Верхний агар
    препараты содержат более низкие концентрации агара (7 г / л), чем обычные растворы
    используется для приготовления чашек с агаром (15 г / л).
    Низкая концентрация агара позволяет фагу-потомству из лизированных клеток
    диффундируют через среду и заражают соседние бактериальные клетки. Когда эти клетки также лизируются, бляшка
    (зона лизированных клеток) производится на планшете.Поскольку фаг может воспроизводиться только в активно растущих клетках,
    размер образовавшихся бляшек будет зависеть от того, как скоро бактерии в агаре
    достичь стационарной фазы и прекратить размножение.
    На этом этапе бляшки перестанут распространяться.

    Верхние слои агара получают путем смешивания разведенных фагов.
    с чувствительными бактериями, а затем добавление ~ 3 мл жидкого верхового агара при 45-50 ° C. Накладки аккуратно перемешиваются, а затем заливаются
    поверх предварительно нагретых пластин с питательным агаром.(Верхний агар должен поддерживаться при температуре 45-50 ° C до непосредственного
    использование более высоких температур убьет бактерии, а более низкие температуры позволят
    агар преждевременно затвердевает.)

    зарядка:

    Частицы бактериофага иногда прилипают к пластику или
    стекло. Если частицы прилипают к дозатору
    наконечников во время переноса, это может снизить количество фаговых частиц, присутствующих в
    образец переносят в бланк следующего разведения.Один из способов минимизировать эту проблему — зарядить дозатор
    пипетирование образца раствора вверх и вниз в наконечник и выгрузка
    образец обратно в исходную пробирку. А
    свежий образец затем может быть взят из той же пробирки и использован для переноса в
    бланк следующего разведения. Покрытие
    частицы фага, уже приставшие к стенкам наконечника, должны минимизировать потери
    во втором примере.

    смешивание фагов:

    Поскольку верхний агар представляет собой вязкий раствор, стандартное перемешивание
    имеет тенденцию вводить пузырьки воздуха в среду, что может быть затруднительно
    отличить от фаговых бляшек.К
    уменьшить количество пузырьков воздуха в результате смешивания расплавленных растворов агара
    следует смешивать, используя соответствующую технику. Точный метод использования будет зависеть от типа трубки, которую необходимо использовать.
    образцы подготовлены в.

    Метод, называемый смешиванием фагов, был разработан для
    образцы в стандартных стеклянных пробирках.
    Это делается, удерживая трубку с колпачком в ладони, и
    пальцы крепко держатся за трубку.
    Трубку держат под углом 45 ° и вращают по кругу 4-6 раз в 1-2 раза.
    секунд.(Трубка должна оставаться на 45
    при вращении это будет продемонстрировано в классе.)
    тщательное перемешивание с минимальным введением пузырьков.

    Если образцы приготовлены в пластиковых пробирках объемом 4 мл с
    защелкивающиеся колпачки (как и в этой лабораторной работе), наиболее эффективный метод
    смешивание растворов будет заключаться в плотном закрытии пробирок и осторожном переворачивании
    пробирки 4-6 раз за 2-3 секунды. Делать
    не перемешивайте дольше этого, так как агар начнет остывать и затвердевать.

    Разведения:

    Предоставляются аликвоты фагов: 1 / 10
    разведения (в SM) исходного запаса фага, имеющего от 10 7
    и 10 8 БОЕ / мл. (pfu =
    бляшкообразующие единицы — это жизнеспособные фаговые частицы, способные инфицировать
    восприимчивые клетки-хозяева). Рассчитать
    Вам потребуется разведения, чтобы получить окончательное количество 50-500 бляшек на пластину. (Обратите внимание, что 0,100 мл раствора фага будет
    быть добавленным к верхним бланкам агара, это эквивалентно дополнительному количеству 1 / 10
    этап разбавления.)

    Разведения будут проводиться с использованием SM (суспензионная среда). Это связано с тем, что лямбда-капсиды фагов требуют
    Ионы Mg 2+ для стабильности. Если
    разведения производятся в dH 2 O (или особенно TE, который содержит EDTA, a
    хелатирующий агент для двухвалентных катионов) количество жизнеспособных фагов будет уменьшено.

    Материалы и методы

    Материалы

    1 / 10 разведение (в SM) исходного фага (Ch5
    с P.ochraceus Eco RI геномная библиотека)

    1 мл E. coli C600

    (получен выращиванием ночной культуры в 10 мл среды LB
    содержащий 100 микролитров, стерилизованный фильтром 20% мальтозы, затем центрифугирование и
    ресуспендирование в 10 мл SM)

    SM (средняя подвеска)

    NaCl 5,8 г

    MgSO 4 7 H 2 O 2 г

    1 M Трис, pH 7,5 50 мл

    2% (мас. / Об.) Раствор желатина 5 мл

    dH 2 O до 1 л

    Пластиковые пробирки Falcon 4 мл

    Верхний агар

    LB (плавлен в микроволновой печи, охлажден до 50 ° C в
    водяная баня)

    не удалять из воды
    ванна непосредственно перед использованием

    одноразовые пипетки

    чашки LB (предварительно нагретые в инкубаторе 37C

    )

    E.coli Базовая пластина C600

    Методы Часть I Разведение фага

    1. Получите необходимое количество LB
    чашки, чтобы позволить 1 чашку LB для каждого разведения фага в диапазоне, ожидаемом
    производить действительное количество тарелок. (Плиты
    предварительно нагретый до 37C
    инкубатор.) Надлежащим образом промаркируйте чашки,
    и верните их в инкубатор 37C. (Этикетки должны включать название группы, дату, разведение фага и среду
    использовался.) (Верхний агар не схватывается так быстро
    на предварительно нагретых пластинах LB это позволит фаговым покрытиям распространяться больше
    равномерно.)

    2. Подготовить серийный номер 1 / 10
    или 1 / 100 разведений исходного фага с использованием 0,9 мл или
    Заготовки SM 0,99 мл. Первое разведение
    должно быть разбавлением 1 / 100 , чтобы минимизировать объем
    использован исходный фаговый запас. Разведения в
    ожидаемый диапазон для получения действительного количества планшетов должен составлять 1 / 10
    разведений. (Точное количество
    Пробирки будут зависеть от количества разведений, которые вы запланировали в своем разведении.
    схема.) Потери фага могут быть уменьшены
    используя зарядку насадок (см. введение).
    Разведения следует проводить в асептических условиях.

    3. Перенесите по 0,100 мл каждого фага.
    тестируемое разведение в пробирку Falcon объемом 4 мл.

    4. Добавьте 0,100 мл бактериальной культуры в
    0,100 мл образцов фага. Коротко перемешайте,
    и инкубируйте при комнатной температуре в течение 15 минут.

    5. Добавьте 3 мл верхнего агара в пробирки. Аккуратно перемешайте пробирки и сразу же залейте
    на предварительно нагретые пластины LB.Распространение
    наложение поперек пластины путем наклона и поворота пластины до тех пор, пока наложение не будет
    равномерно распределены. Ободок
    Пробирку с образцом также можно использовать для распределения наложения и лопания любых пузырьков, которые
    настоящее время. Не пытайтесь распространять
    наложите дальше, как только он начнет схватываться.
    Это создаст зернистый непрозрачный слой, на котором будут образовываться бляшки.
    трудно увидеть.

    6. Дайте чашкам остыть, пока агар не остынет.
    набор. Переверните тарелки (крышкой вниз),
    и инкубировать 12-24 часа при 37 ° C.Подсчитайте свой
    планшетов, запишите результаты в лабораторную книгу и рассчитайте концентрацию
    pfu в исходном складе.

    Часть II
    Штрихи для изолированных колоний

    Перенос одиночной колонии из E. coli C600
    на чашку с правильно маркированной LB и штрих для изолированных колоний. (Если вы не знакомы с техникой
    для этого попросите ТА для демонстрации.)

    Вопросы для изучения

    1.Что это
    концентрация фага (в БОЕ / мл) исходного запаса фага?

    (Покажите свой
    расчет.)

    2. Где находится
    ближайшая: станция промывки глаз

    огнетушитель

    душ

    3. Согласно листам паспортов безопасности материалов, какие
    меры предосторожности необходимо использовать с фенолом и акриламидом?

    4. Сколько сахарозы потребуется для
    сделать 100 мл 0,1% раствора?

    5.Сколько NaCl (58,44 г / моль) будет
    нужно для приготовления 500 мл 2 мМ раствора NaCl?

    6. Как приготовить 100 мл 0,2 N раствора NaOH, 1% SDS, используя
    два стандартных решения, перечисленных ниже?

    5 н. NaOH

    10% SDS

    7. Сколько в 100 мг / мл ампициллина в запасе?
    следует добавить к 200 мл среды, чтобы получить конечную концентрацию 50 мкг / мл?

    границ | Характеристика литических бактериофагов, инфицирующих мультирезистентные токсикогенные шига шига атипичные штаммы Escherichia coli O177, выделенные из фекалий крупного рогатого скота

    Введение

    Бактериофаги (фаги) представляют собой самовоспроизводящиеся вирусы, которые способны инфицировать и лизировать свои специфические бактерии-хозяева (1).Это вездесущие организмы на Земле, количество которых оценивается в 10 30 -10 32 (2). Фаги относительно безопасны, нетоксичны и безвредны для животных, растений и человека (3, 4). Они встречаются в различных средах, связанных с их хозяином, например, в пище, почве, сточных водах, фекалиях и на фермах (2). Несколько видов бактерий, таких как Campylobacter, Escherichia coli, Listeria, Salmonella, Pseudomonas и Vibrio , используются в качестве хозяев для выделения их специфических бактериофагов (5–7).Из-за своей специфичности к хозяину и нетоксичности литические фаги считаются альтернативным решением для борьбы с устойчивыми к противомикробным препаратам патогенами. В Южной Африке были зарегистрированы вспышки листериоза и широкое распространение множественной лекарственной устойчивости у видов E. coli, Salmonella и Staphylococcus (8–11). Однако не было попыток использовать бактериофаги для борьбы с устойчивыми к антибиотикам патогенами ни в больницах, ни в пищевой промышленности.

    Устойчивость к антибиотикам патогенов пищевого происхождения, особенно E.coli , остается проблемой общественного здравоохранения. Патогены, устойчивые к антибиотикам, не только увеличивают экономические и социальные издержки, но также вызывают тяжелые инфекции у людей (12). В 2014 году инфекции пищевого происхождения стали причиной около 600 миллионов заболеваний и 420 000 смертей во всем мире (13). Кроме того, с 2017 по 2018 год в Южной Африке было зарегистрировано 978 случаев листериоза, в результате которых погибло 183 человека (11). Ведущими патогенными бактериями, вызывающими озабоченность, являются видов E. coli O157, Campylobacter, Listeria и Salmonella (14).Более того, недавние сообщения показали, что штаммы, не относящиеся к O157, особенно O26, O45, O103, O111, O121 и O145, проявляют множественную лекарственную устойчивость и являются одной из основных причин инфекций пищевого происхождения (15).

    С учетом вышеизложенного, для борьбы с инфекциями пищевого происхождения и распространением устойчивых к антибиотикам патогенов было разработано и реализовано несколько вмешательств, таких как физические, химические и биологические методы, на всех уровнях пищевой цепи (16). Однако эти традиционные методы имеют существенные недостатки, такие как коррозия предприятий пищевой промышленности, загрязнение окружающей среды, изменение пищевых матриц, развитие устойчивости к антибиотикам и токсические эффекты химических остатков (17).Кроме того, применение химических агентов в сочетании с отсутствием эффективных нормативных актов в отношении пищевых продуктов может затруднить международную торговлю и, таким образом, повлиять на экономику страны-экспортера (16, 18). Следовательно, отсутствие новых антибиотиков и неэффективность традиционных стратегий борьбы с бактериальными патогенами с множественной лекарственной устойчивостью требует поиска альтернативных стратегий контроля, таких как использование бактериофагов. Учитывая их биологические свойства, как объяснено выше, литические фаги могут применяться на всех уровнях пищевой цепи, включая внесение перед сбором урожая.Вмешательство перед уборкой урожая имеет то преимущество, что предотвращает передачу болезнетворных микроорганизмов пищевого происхождения от животных, производящих пищу, к человеку.

    Принимая во внимание профили вирулентности и устойчивости к антибиотикам штамма E. coli O177, в сочетании с отсутствием новых антибиотиков и ограничениями традиционных стратегий снижения устойчивости к антибиотикам, существует потребность в расширении поиска новых бактериофагов для применения в биоконтроле. Таким образом, настоящее исследование было разработано для выделения и характеристики литического E.coli O177-специфические бактериофаги как потенциальные агенты биоконтроля. Стабильность и жизнеспособность фагов определяли при температурах и диапазонах pH, которые могут быть получены у живых жвачных животных, чтобы оценить их стабильность для использования у этих животных перед сбором урожая.

    Материалы и методы

    Бактериальный штамм

    Мультирезистентный и вирулентный атипичный энтеропатогенный штамм E. coli O177 был использован для выделения E. coli O177-специфических бактериофагов.Атипичные энтеропатогенные изоляты E. coli O177 были получены из фекалий крупного рогатого скота и подтверждены с помощью ПЦР-анализа. Изоляты были дополнительно проверены на наличие детерминант вирулентности и антимикробных генов. Перед выделением фага 40 изолятов E. coli O177, хранившихся при -80 ° C, реанимировали на агаре MacConkey и инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов. Отдельную колонию из каждого образца переносили в 15 мл питательного бульона в 50 мл пробирках Falcon. Образцы инкубировали в шейкере (160 об / мин) при 37 ° C в течение 3 часов, пока рост не достигал оптической плотности (OD) 0.4–0,5 (600 нм).

    Обогащение и выделение Очистка

    E. coli O177-специфических бактериофагов

    Escherichia coli O177-специфические бактериофаги были выделены из фекалий крупного рогатого скота с использованием экологического штамма E. coli O177 по методу обогащения (19, 20) с некоторыми модификациями. Двадцать образцов фекалий были собраны с двух коммерческих откормочных площадок и двух молочных ферм. Образцы были собраны непосредственно из прямой кишки с использованием ректальных перчаток на расстоянии вытянутой руки, помещены в холодильник, содержащий пакеты со льдом, и доставлены в лабораторию.Пять граммов каждого образца фекалий растворяли в 20 мл разбавителя лямбда и встряхивали для получения гомогенной смеси. Смесь центрифугировали при 10000 × g в течение 10 мин с использованием Hi Centrifuge SR (модель: Z300, Германия) для осаждения фекалий и других примесей. Аликвоту 10 мл супернатанта экстрагировали и стерилизовали фильтрованием, используя шприц-фильтр с размером пор 0,22 мкм (GVS Filter Technology, США), чтобы получить неочищенные фильтраты фагов. Для обогащения 5 мл каждого фильтрата добавляли к 100 мкл экспоненциальной фазы (OD 600 = 0.4–0.5) культуры каждого из 40 штаммов-хозяев E. coli O177 в 10 мл трипсинового соевого бульона (TSB) двойной концентрации с добавлением 2 мМ хлорида кальция (CaCl 2 ). Образцы инкубировали в инкубаторе со встряхиванием (80 об / мин) при 37 ° C в течение 24 часов. После инкубации образцы центрифугировали при 10000 × g в течение 10 минут с использованием Hi Centrifuge SR (модель: Z300, Германия) для удаления бактериальных клеток и остатков образцов. Супернатант стерилизовали фильтрованием с помощью шприцевого фильтра Acrodisc с размером пор 0,22 мкм (GVS Filter Technology, США), чтобы получить неочищенные фильтраты фагов.

    Затем был проведен спот-тест для определения присутствия фагов, как описано ранее (19). Вкратце, 100 мкл экспоненциально-фазовой (OD 600 = 0,4-0,5) культуры бактериального хозяина смешивали с 3 мл мягкого агара (0,3% агара в / в), выдерживаемого при 50 ° C, затем выливали на модифицированное питательное вещество. чашки с агаром (MNA), чтобы создать бактериальный газон, и дали затвердеть в течение 15 мин. Десять микролитров каждого неочищенного фильтрата фага наносили на бактериальный газон, и планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов.После инкубации планшеты наблюдали на наличие прозрачных зон или бляшек в точках инокулирования. Бляшки собирали с помощью стерильного наконечника пипетки и суспендировали в 1 мл лямбда-разбавителя [10 мМ Tris Cl (pH 7,5), 8 мМ MgSO 4 · 7H 2 O] в 2-мкл пробирках Эппендорфа. Пробирки оставляли при комнатной температуре, чтобы фаги могли диффундировать в раствор. Затем пробирки центрифугировали при 11000 × g в течение 10 минут, и супернатант стерилизовали фильтрованием с 0.Шприцевой фильтр Acrodisc с размером пор 22 мкм (GVS Filter Technology, Германия).

    Очистка и размножение бактериофагов

    Бактериофаги были очищены от одиночных изолятов бляшек методом наложения мягкого агара (21, 22). Был проведен анализ зубного налета, и планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов. После инкубации отдельные бляшки с каждого планшета отбирали в зависимости от их размера и прозрачности с помощью стерильного наконечника пипетки и ресуспендировали в 1 мл разбавителя лямбда в 2-мкл пробирках Эппендорфа.Пробирки оставляли при 4 ° C на 24 часа, чтобы фаг мог диффундировать в буфер. Затем пробирки центрифугировали при 10000 × g в течение 10 мин, и супернатант стерилизовали фильтрованием с использованием шприцевого фильтра Acrodisc с размером пор 0,22 мкм (GVS Filter Technology, Германия). Процесс очистки повторяли три раза подряд до получения гомогенных бляшек для каждого изолята фага. Очищенные фаги размножали с использованием бактерий-хозяев E. coli O177. Сто микролитров исходных чистых фагов смешивали со 100 мкл экспоненциальной фазы (OD 600 = 0.4–0.5) культура соответствующего хозяина (ов) в 50 мл пробирке сокола, содержащей 10 мл стерильного TSB двойной концентрации с добавлением 2 мМ CaCl 2 . Смесь инкубировали в инкубаторе со встряхиванием (150 об / мин) при 37 ° C в течение 24 часов. После инкубации образцы центрифугировали при 8000 × g в течение 10 минут при 4 ° C, и супернатант стерилизовали фильтрованием с использованием шприцевого фильтра Acrodisc с размером пор 0,22 мкм (GVS Filter Technology, Германия). Готовили десятикратные серийные разведения, титры фагов определяли с помощью анализа бляшек и титры выражали в БОЕ на миллилитр.Исходные фаги хранили при 4 ° C для дальнейшего анализа.

    Характеристика выбранных

    E. coli О177-специфических бактериофагов

    Диапазон хозяев и перекрестная инфекция фаговых изолятов

    Диапазон хозяев восьми выбранных изолятов фагов был оценен против 50 бактериальных хозяев [13 E. coli O177, 12 E. coli O157, 12 E. coli O26 и 10 видов Salmonella (экологические штаммы) , 1 Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), 1 Salmonella enterica (ATCC 12325) и 1 Salmonella typhimurium (ATCC 14028)], и все виды окружающей среды были изолированы из фекалий крупного рогатого скота.Изоляты фагов были отобраны на основании различной морфологии бляшек и их прозрачности и размеров. Для определения литического спектра активности каждого изолятов фага использовалась методика точечных тестов, как описано ранее (21). Бактериальные газоны всех выбранных бактериальных хозяев готовили на чашках MNA. Десять микролитров исходного фага (10 7 –10 9 БОЕ / мл) наносили на бактериальный газон и оставляли для высыхания на воздухе в ламинарном потоке воздуха в течение 10 мин. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов.После инкубации планшеты наблюдали на наличие бляшек в месте нанесения, и литические профили фагов были разделены на три категории в соответствии с их прозрачностью: прозрачные, мутные и отсутствие лизиса (23). Тест проводили в трех экземплярах для каждого изолята фага.

    Эффективность посева фагов

    Эффективность посева (EOP) выполняли для определения литической эффективности фага по сравнению с подходящими для них бактериями-хозяевами, как описано ранее (24), с модификацией.Пятнадцать бактериальных штаммов (пять E. coli O177, пять E. coli O26 и пять E. coli O157) были отобраны на основании их чувствительности к фагам. Готовили десятикратные серийные разведения фагов для получения единичных бляшек. Аликвоту по 100 мкл каждого фага (1 × 10 4 БОЕ / мл) смешивали со 100 мкл экспоненциально-фазовой (OD 600 = 0,4–0,5) культуры каждой бактерии в 50-мл стерильных пробирках Falcon и оставили на 10 мин при комнатной температуре, чтобы фаг мог прикрепиться к хозяину.Затем в пробирку добавляли 3 мл мягкого агара (0,3% мас. / Об.) И смесь выливали на планшеты с MNA. Для каждого изолята фага проводили три независимых анализа. После затвердевания планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов. После инкубации подсчитывали количество бляшек на чашку. EOP рассчитывали как отношение между средним числом бляшек на бактериях-мишенях (БОЕ) и средним числом бляшек эталонных бактерий-хозяев (БОЕ). EOP был классифицирован как высокий (EOP ≥ 0.5), умеренной (EOP> 0,01 <0,5) и низкой (EOP ≤ 0,1) в зависимости от воспроизводимой инфекции целевых бактерий (25). Для расчета значений EOP использовалась следующая формула:

    Относительный EOP = среднее количество бляшек на целевых бактериях-хозяевах (БОЕ), среднее количество бляшек на эталонных бактериях-хозяевах (БОЕ)

    Анализ с помощью просвечивающей электронной микроскопии

    Восемь изолятов фага подвергали просвечивающей электронной микроскопии (ТЕМ), и морфотип фага определяли с использованием методов отрицательного окрашивания, как описано ранее (26), с некоторыми модификациями.Вкратце, фаги размножали для получения высокого титра (10 8 –10 11 БОЕ / мл). Десять миллилитров каждого фага (10 8 –10 11 БОЕ / мл) концентрировали в 50-миллилитровых пробирках сокола, добавляя 10% (мас. / Об.) ПЭГ, и смесь инкубировали при 4 ° C в течение ночи, чтобы позволить осаждение фаговых частиц. После инкубации частицы фага осаждали центрифугированием при 11000 × g в течение 10 мин при 4 ° C. Супернатант сливали, а осадок трижды промывали 0.1 М ацетат аммония (pH 7,0). Осадок ресуспендировали в 200 мкл ацетата аммония. Десять микролитров концентрированного раствора фага наносили на медные сетки размером 200 меш с покрытыми углеродом пленками из формвара. Фаговым частицам давали адсорбироваться в течение 2 минут, а избыток жидкости сливали стерильной фильтровальной бумагой. Решетке дали высохнуть на воздухе. Добавляли каплю 1% (мас. / Об.) Молибдата аммония (водный, pH 6,5) для отрицательного окрашивания фаговых частиц и оставляли для высыхания на воздухе в течение 10–15 мин.Сетка, содержащая образец (фаговые частицы), затем загружалась в просвечивающий электронный микроскоп (модель: FEI Tecnai; ТЕМ, Чешская Республика) и работала при 120 кВ для сканирования и просмотра изображений фага с диапазоном увеличения 20 000–100 000. Микрофотографии были сделаны камерой Gatan, установленной снизу, с использованием программного обеспечения Digital Micrograph при 80 кВ и диапазоне увеличения 20 000–250 000 раз. Были сделаны изображения, и морфологические характеристики были использованы для классификации изолятов фагов, как описано ранее (27).

    Влияние различных температур и pH на стабильность и жизнеспособность фагов

    Стабильность и жизнеспособность фага оценивали при различных температурах (37 и 40 ° C) в течение 60-минутного периода в термостатируемом инкубаторе. Перед началом эксперимента была стандартизирована концентрация бактерий-хозяев и титры фагов. Сто микролитров экспоненциально-фазовой культуры [10 5 колониеобразующих единиц (КОЕ) / мл] и 100 мкл фагов (10 5 БОЕ / мл) добавляли к 10 мл TSB двойной концентрации с добавлением 2 мМ CaCl 2 .Пробирки инкубировали в предварительно установленном инкубаторе со встряхиванием при 37 и 40 ° C в течение 60 минут, образцы отбирали через 10, 30 и 60 минут инкубации и оценивали жизнеспособность и концентрацию с использованием двухслойного агара (22). Анализ зубного налета проводили в трех экземплярах для каждого образца, и результаты выражали в БОЕ на миллилитр. Что касается pH, фаги подвергались воздействию различных уровней pH (3,0, 4,5, 6,3, 7,0, 8,5 и 10,0) в течение 48-часового инкубационного периода. Десять миллилитров стерильного TSB двойной концентрации (с поправкой на 2 мМ CaCl 2 ) были распределены в 50-миллилитровые пробирки Falcon для приготовления растворов с различным pH.PH регулировали с помощью соляной кислоты (HCL, 6M) или гидроксида натрия (NaOH, 6M). Сто микролитров каждого бактериального хозяина (10 5 КОЕ / мл) и их соответствующих изолятов фага (10 5 БОЕ / мл) добавляли к 10 мл. Пробирки инкубировали в предварительно установленном инкубаторе со встряхиванием (80 об / мин) при 37 ° C в течение 48 часов. Образцы отбирали через 24 и 48 ч инкубации, и титр фага для каждого образца определяли с помощью стандартного анализа бляшек. Анализ зубного налета проводили в трех экземплярах для каждого образца, и результаты выражали в БОЕ на миллилитр.

    Кривая одношагового роста

    Эксперимент с одноэтапной кривой роста был проведен для определения латентного периода и размера взрыва выбранных фагов, как описано ранее (21), с некоторыми модификациями. Вкратце, 5 мл экспоненциально-фазовой культуры каждого хозяина центрифугировали при 8000 × g в течение 5 минут при 4 ° C. Поддон ресуспендировали в 10 мл TSB двойной концентрации с добавлением 2 мМ CaCl 2 до получения OD 0,4–0,5 (600 нм). Концентрацию бактерий доводили с использованием стерильного TSB двойной концентрации для получения 1 × 10 8 КОЕ / мл.Каждый фаг (10 8 БОЕ / мл) добавляли к соответствующей бактериальной суспензии хозяина для достижения множественности инфекции (MOI) 1,0. Смесь оставляли при комнатной температуре на 10 мин, чтобы фаги адсорбировались на бактериях-хозяевах. Через 10 мин 1,5 мкл смеси переносили в 2-мкл пробирки Эппендорфа и центрифугировали при 11000 × g в течение 10 мин для удаления неадсорбированных фаговых частиц. Осадок ресуспендировали в 100 мкл TSB с добавлением 10 мМ сульфата магния (mTSB) и переносили в 9.9 мл предварительно подогретого mTSB. Образцы инкубировали в инкубаторе со встряхиванием (160 об / мин) при 37 ° C в течение 1 ч. Двести микролитров отбирали из каждого образца с 5-минутными интервалами в течение 60 минут. Анализ бляшек проводили в трех экземплярах для каждого образца для определения титра фага. Полученные данные использовались для определения латентного периода, времени всплеска и относительного размера всплеска фага на инфицированную клетку. Размер всплеска рассчитывали как отношение окончательного количества выпущенных потомков фага к начальному количеству инфицированных бактериальных клеток-хозяев в латентный период с использованием следующей формулы, как описано ранее (28):

    Относительный размер взрыва = конечный титр (БОЕ) — начальный титр (БОЕ) начальный титр (БОЕ) (БОЕ)

    Относительный размер пакета в различные моменты времени был нанесен на график в зависимости от времени, чтобы определить латентный период и размер пакета каждого изолята фага.

    Статистический анализ

    Жизнеспособность и стабильность фагов проверяли при различных температурах и уровнях pH. Данные были преобразованы в log 10 БОЕ на миллилитр и проанализированы с использованием SAS (2010). Влияние температуры, времени и типа фага на жизнеспособность и стабильность фагов анализировали с использованием процедуры общей линейной модели (GLM) SAS (2010) для факторной обработки 2 (температура) × 3 (время) × 8 (фаги). компоновка по следующей модели:

    Yijkl = μ + Ti + Sj + Vk + (T × S) ij + (T × V) ik + (S × V) jk + (T × S × V) ijk + Eijkl

    , где Y ijkl — наблюдение зависимой переменной ijkl ; μ — фиксированный эффект среднего значения для переменной; T i — влияние температуры; S j — эффект времени; V k — действие фагов; ( T × S ) ij — эффект взаимодействия между температурой на уровне i и временем на уровне j ; ( T × V ) ik — эффект взаимодействия между температурой на уровне i и фагом на уровне k ; ( S × V ) jk — это эффект взаимодействия между временем на уровне j и фагом на уровне k ; ( T × S × V ) ijk — это эффект взаимодействия между температурой на уровне i , временем на уровне j и фагом на уровне k ; и E ijkl — случайная ошибка, связанная с наблюдением ijkl .

    Данные о жизнеспособности и стабильности фагов в ответ на возрастающие уровни pH были оценены на предмет линейных и квадратичных эффектов с использованием полиномиальных контрастов. Регрессионный анализ поверхности отклика (Proc RSREG; SAS 2010) был применен для описания откликов на pH в соответствии со следующей квадратичной моделью: y = a + bx + cx 2 , где y — переменные отклика, b и c — коэффициенты квадратного уравнения, a — точка пересечения, x — уровень pH, и — b /2 c — значение x для максимального отклика.Для всех статистических тестов значимость была заявлена ​​на уровне p ≤ 0,05.

    Результаты

    Выделение, очистка и размножение бактериофагов

    Тридцать один литический E. coli O177-специфический бактериофаг был выделен из фекалий крупного рогатого скота. Фаги были способны инфицировать 15% изолятов E. coli O177, использованных для выделения. Изоляты фагов были обозначены как ECPV в соответствии с родом бактерий-хозяев, с последующим обозначением фагового вируса и числовым номером в качестве идентичности.Изоляты фагов выявили различную морфологию бляшек с точки зрения размеров, от маленьких до больших (1-2 мм, соответственно) бляшек (рис. 1). Большая часть (71%) изолятов фагов выявила большие бляшки, в то время как небольшая часть (29%) показала маленькие бляшки на их предпочтительных хозяевах. Все фаги выявляли прозрачные (полный лизис) бляшки, и никаких мутных бляшек не наблюдалось. Титр фага после размножения варьировал от 6,2 × 10 5 до 3,1 × 10 13 БОЕ / мл. Фаг EC3A2PV имел самый низкий титр, тогда как фаг EC198B1PV имел самый высокий титр по сравнению с другими изолятами фага.

    Рисунок 1 . Репрезентативное изображение фаговых изолятов, изображающих различные морфологии бляшек: (A) EC198B2PV (большие бляшки) и (B) EC3B1PV (маленькие бляшки).

    Диапазон фагов-хозяев и анализ EOP в отношении различных штаммов E. coli

    Точечный тест был проведен для определения диапазона хозяев восьми выбранных изолятов литических фагов против 50 бактериальных хозяев, включающих различные виды бактерий. Результаты показали, что фаги способны инфицировать E.coli видов ( E. coli O177, E. coli 0157 и E. coli O26 штаммы окружающей среды) (рис. 2). Все фаговые изоляты продуцировали прозрачные бляшки против всех E . coli O177 и 83–100% из штаммов E. coli O26 (таблица 1). Три фага (EC10C3PV, EC11B2PV и EC12A1PV) были способны инфицировать E. coli, O157 (75–83%; таблица 2). Ни один из фагов не может инфицировать штаммы ATCC и виды Salmonella в окружающей среде.Анализ EOP был проведен на 15 изолятах (пять E. coli O177, пять E. coli O26 и пять E. coli O157), которые были чувствительны к фагам в тесте на пятнах. Хотя результаты точечного теста выявили прозрачные бляшки на E. coli O177, результаты EOP показали различные литические паттерны фагов. Несмотря на то, что анализ EOP выявил высокую (EOP ≥ 0,5) продуктивную инфекцию на E. coli O177, наблюдались умеренные инфекции (Таблица 2). Четыре фага показали высокие значения EOP (0.5–0.8) на изолятах E. coli O177. С другой стороны, анализ EOP выявил умеренную и низкую продуктивность инфекций у изолятов E. coli O26 и E. coli O157 (значения EOP варьируются от 0,0 до 0,4 и от 0,0 до 0,3, соответственно).

    Рисунок 2 . Репрезентативное изображение, показывающее результаты точечного тестирования фагов на различных штаммах Escherichia coli .

    Таблица 1 . Инфекция фагами в диапазоне хозяев.

    Таблица 2 .Эффективность посева фагов против различных серотипов Escherichia coli .

    Морфологическая характеристика фагов на основе TEM

    Восемь отобранных изолятов фагов подвергали ТЕМ-анализу для определения их морфотипа. Просвечивающие электронные микрофотографии фагов и структурные размеры показаны на фиг. 3 и в таблице 3 соответственно. Изоляты фагов были классифицированы в соответствии с классификацией Международного комитета по таксономии вирусов (ICTV) на основе наблюдаемой трехмерной структуры.Все фаговые изоляты показали сходный морфотип при ТЕМ-анализе. Структурно фаги имели икосаэдрическую голову и шейку, прикрепленную к длинному сократительному хвосту с хвостовыми волокнами, и они были классифицированы под отрядом Caudovirales, семейство Myoviridae . Размер икосаэдрических головок фагов составлял от 81,2 ± 6 до 95,6 ± 3 нм, а сократительных хвостов — от 118,1 ± 0,3 до 135 ± 2 нм. Фаг EC10C2PV имел самую длинную икосаэдрическую голову диаметром 95,6 ± 3 нм и самый длинный сократительный хвост 135 ± 2 нм с волокнами.Фаг EC10C3PV имел самую маленькую икосаэдрическую головку диаметром 81,2 ± 6 нм и самый короткий сократительный хвост 118,1 ± 0,3 нм с волокнами.

    Рисунок 3 . Просвечивающие электронные микрофотографии репрезентативных изолятов фагов, отрицательно окрашенных 1% молибдатом аммония. Оба фага ( A : EC11B2PV; B : EC118BPV) принадлежат к семейству myoviridae и демонстрируют икосаэдрический капсид и длинный сократительный хвост с хвостовыми волокнами. Полоски указывают масштаб (100 нм).

    Таблица 3 . Размеры фагов на основе анализа просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ).

    Стабильность и жизнеспособность фагов при различных температурах

    Результаты показали значительное ( p <0,001) влияние взаимодействия время × температура на стабильность и жизнеспособность фагов. Инкубация фагов от 10 до 60 мин приводила к значительному росту фагов при 37 ° C (рис. 4). Прирост с 10 до 30 минут составил от 8,55 до 8.75 log 10 БОЕ / мл (при 37 ° C). Фаг EC3A1PV показал самую низкую скорость роста, тогда как фаг EC10C3PV показал самую высокую скорость роста от 10 до 60 минут. Рост фагов при 40 ° C при инкубации в течение 10-60 мин показан на фиг. 5. За период от 10 до 30 мин семь фагов показали значительную скорость роста (в диапазоне от 8,71 до 9,13 log 10 БОЕ / мл). Наблюдалось снижение скорости роста фага EC12A1PV (с 10 до 60 минут), в то время как два фага (EC10C2PV и EC10C3PV) демонстрировали снижение скорости роста с 30 до 60 минут инкубационного периода.

    Рисунок 4 . Влияние времени на устойчивость (стабильность / выживаемость) отдельных фагов при 37 ° C. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение. PFU, бляшкообразующий агрегат.

    Рисунок 5 . Влияние времени на устойчивость (стабильность / выживаемость) отдельных фагов при 40 ° C. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение. PFU, бляшкообразующий агрегат.

    Воздействие на отдельные фаги 37 ° C в течение 10–30 мин показало значительное увеличение скорости роста со временем (0.Скорость роста 4–2,3% при 37 ° C; Рисунки 6, 7). Средняя скорость роста фагов увеличилась с 0,2 до 0,17 log 10 БОЕ / мл при 37 ° C (10–30 мин инкубационного периода). Фаги показали различные ответы при инкубации при 40 ° C. Наблюдалось снижение скорости роста других фагов. При инкубации в течение 10 минут при 40 ° C скорость роста EC10C3PV снизилась больше всего на 4,8%, в то время как скорость роста фага EC3A1PV пострадала меньше всего, показав снижение только на 0,2%. После 30 мин инкубации у фагов EC366BPV (0.2%), EC366VPV (0,2%) и EC10C3PV (2,4%) (рисунок 7). При инкубации в течение 60 мин при 40 ° C фаги EC10C2PV (0,28 log 10 БОЕ / мл), EC10C3PV (0,39 log 10 БОЕ / мл) и EC12A1PV (0,37 log 10 БОЕ / мл) показали наибольшую снижение темпов роста по сравнению с их соответствующими темпами в течение 60 минут при 37 ° C (Рисунок 8).

    Рисунок 6 . Выживаемость и стабильность отдельных фагов при воздействии различных температур в течение 10 мин. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение.PFU, бляшкообразующий агрегат.

    Рисунок 7 . Выживаемость и стабильность отдельных фагов при воздействии различных температур в течение 30 мин. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение. PFU, бляшкообразующий агрегат.

    Рисунок 8 . Выживаемость и стабильность отдельных фагов при воздействии различных температур в течение 60 мин. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение. PFU, бляшкообразующий агрегат.

    Стабильность и жизнеспособность фагов при различных уровнях pH

    Регрессионный анализ поверхности ответа выявил квадратичные эффекты ( p <0.0001) от pH на стабильность фага при инкубации в течение 24 и 48 часов (рисунки 9A – H, 10A1 – h2 соответственно). Оптимумы pH для всех фагов находились в диапазоне от 7,6 до 8,0 со значениями R 2 в диапазоне от 0,90 до 1,0 при инкубации в течение 24 часов (рисунки 9A – H). Три фага показали максимальную стабильность при pH 8,0, определенную с помощью следующих квадратных уравнений: y = -13,9 (± 2,93) + 6,4 (± 0,98) x — 0,4 (± 0,07) x 2 (EC10C2PV), y = −13.9 (± 3,04) + 6,4 (± 1,01) x — 0,4 (± 0,08) x 2 (EC366BPV) и y = -13,9 (± 2,97) + 6,4 (± 0,99) x — 0,4 (± 0,08) x 2 (EC366VPV). Фаги EC10C3PV и EC11B2PV показали максимальную стабильность при pH 7,6, что было определено с помощью следующих квадратных уравнений: y = -13,4 (± 2,87) + 6,1 (± 0,95) x — 0,4 (± 0,07) x 2 и y = −13,5 (± 2,94) + 6,1 (± 0,98) x — 0.4 (± 0,07) x 2 соответственно. При инкубации в течение 48 часов оптимумы pH для стабильности фага находились в диапазоне от 7,9 до 8,0 при значениях R 2 в диапазоне от 0,90 до 1,0 (рисунки 10A1 – h2). Семь фагов показали максимальную стабильность при более высоком (8,0) оптимальном pH, в то время как только один фаг показал максимальную стабильность при более низком (7,9) pH, определенном с помощью квадратного уравнения y = -13,8 (± 3,10) + 6,3 (± 1,03) x — 0,4 (± 0,08) x 2 .

    Рисунок 9.(A – H) Взаимосвязь между pH ( x ) и стабильностью фагов [log 10 бляшкообразующих единиц (БОЕ), y ] при инкубации при 37 ° C в течение 24 часов.

    Рисунок 10. (A1 – h2) Взаимосвязь между pH ( x ) и стабильностью фагов [log 10 бляшкообразующих единиц (БОЕ), y ] при инкубации при 37 ° C в течение 48 часов.

    Одношаговая кривая роста бактериофагов

    Одноступенчатый анализ кривой роста восьми изолятов фага выполняли для определения латентного периода и относительного размера взрыва на инфицированную бактериальную клетку.Полученные данные были проанализированы и использованы для построения трехфазных кривых (рисунки 5–11A – H). Латентный период для всех фагов составлял от 15 до 25 мин (в среднем = 20 ± 3,8 мин). Фаги EC11B2PV и EC3A1PV имели самый длинный латентный период (25 мин), а фаги EC118BPV и EC366VPV — самый короткий (15 мин) латентный период. Латентный период для остальных четырех фагов составил 20 мин. Что касается размера пачки, фаги EC10C3PV и EC12A1PV имели наибольший размер пачки на инфицированную клетку (522 и 367 БОЕ соответственно), тогда как фаг EC366VPV имел наименьший размер пачки (91 БОЕ) на инфицированную клетку.

    Рисунок 11. (A – H) Одностадийные кривые роста для восьми Escherichia coli O177-специфичных изолятов фага. Скрытый период (L) и размер пакета (B). Планки погрешностей указывают стандартное отклонение.

    Обсуждение

    Появление устойчивости к антибиотикам у патогенов пищевого происхождения возродило интерес к возможному использованию литических бактериофагов в качестве альтернативной стратегии биоконтроля. Благодаря своей способности лизировать патогены с множественной лекарственной устойчивостью литические бактериофаги считаются естественной и зеленой технологией для сохранения и безопасности пищевых продуктов (29).Выделение, идентификация и полная характеристика бактериального хозяина является предпосылкой для успешного выделения подходящих литических бактериофагов, предназначенных для биоконтроля антимикробных патогенов пищевого происхождения (30). Кроме того, необходимо использовать надежные, воспроизводимые и эффективные методы для выбора подходящих фагов-кандидатов для применения в биоконтроле (31). В этом исследовании 31 литический изолятов E. coli O177-специфических бактериофагов был успешно выделен из фекалий крупного рогатого скота с использованием атипичных энтеропатогенных бактерий E.coli O177 в качестве хозяина. Поскольку крупный рогатый скот является основным резервуаром атипичного энтеропатогенного штамма E. coli O177, это подтверждает идею о том, что фаги присутствуют в каждой экосистеме, где существуют их хозяева (4). Фаги имели четкие и дискретные бляшки разного размера. Размер бляшек варьировал от малого до большого (1-2 мм, соответственно), а титры фагов — от 6,2 × 10 5 до 3,1 × 10 13 БОЕ / мл. Интересно, что большая часть (71%) изолятов фагов продуцировала большие и прозрачные бляшки на их предпочтительных хозяевах.Эти характеристики были аналогичны описанным для фагов, специфичных для E. coli O157-, Listeria -, Pseudomonas -, Salmonella — и Vibrio (23, 32, 33). С точки зрения биоконтроля, строго литические фаги с высокими титрами считаются идеальными кандидатами для применения в биоконтроле (4, 34).

    Диапазон хозяев — один из наиболее важных критериев при выборе фагов, предназначенных для биоконтроля антимикробных патогенов пищевого происхождения (35).Для определения диапазона фаговых хозяев были выбраны восемь фагов. Критерии отбора основывались на литических профилях, прозрачности бляшек и размере фагов. Точечный тест показал, что фаги были способны инфицировать различные штаммы E. coli из двух разных категорий [атипичный энтеропатогенный в окружающей среде E. coli O177 и E. coli , продуцирующий токсин Shiga ( E. coli O26 и E. coli, O26 и E. coli O157)]. Ясные бляшки преимущественно наблюдались на E.coli O177 и E. coli O26 серотипов. Интересно, что три фага демонстрировали четкие бляшки на штаммах E. coli O177, E. coli O26 и E. coli O157, что позволяет предположить, что эти фаги были поливалентными и инфицировали штаммы из двух разных категорий. Несмотря на это, ни один фаг не смог заразить все штаммы ATCC и видов Salmonella из окружающей среды, протестированных в этом исследовании. Это может быть связано с тем, что штаммы ATCC и виды Salmonella не имеют специфических рецепторов для прикрепления фагов.На основании анализа EOP фаги показали высокую эффективность (EOP ≥ 0,5) на штамме E. coli O177. Несмотря на тот факт, что все фаги выявили четкие бляшки на штаммах E. coli, O26 и O157 в тесте на пятнах, только три фага показали EOP от среднего до низкого (<0,5) на серотипах E. coli O26 и O157. Это свидетельствует о высокой специфичности фагов к штамму E. coli O177. Более того, специфичность хозяина считается желательной характеристикой для сильного применения фагов, особенно у живых животных, чтобы гарантировать, что они оказывают незначительное влияние или не оказывают никакого влияния на полезную микрофлору кишечника (2, 6).Кроме того, вариабельность инфекционности может быть связана с неспецифическими связывающими рецепторами на стенке клетки-хозяина или наличием устойчивых к фагам штаммов (6).

    Для ПЭМ-анализа использовали процедуру отрицательного окрашивания. По результатам ПЭМ все восемь изолятов фага выявили сходный морфотип. Конструктивно фаги имели икосаэдрическую голову и шейку, прикрепленную к длинному сократительному хвосту, а хвостовые волокна были соединены с опорной пластиной. Икосаэдрическая голова фагов составляла от 81,2 ± 6 до 95.6 ± 3 нм, сократительные хвосты — от 118,1 ± 0,3 до 135 ± 2 нм. На основании этих характеристик изоляты фагов были отнесены к отряду Caudovirales и семейства Myoviridae (27). Более того, эти характеристики были аналогичны таковым у T1-7-подобных фагов E. coli (4, 36). Учитывая тот факт, что семейство Myoviridae содержит двухцепочечные ДНК-фаги (4), все восемь фагов предположительно были отнесены к линейным двухцепочечным ДНК-фагам.Хвостовые волокна содержат белки, которые помогают фагу распознавать свои специфические рецепторы на стенке бактериальной клетки и, таким образом, ограничивают связывание фага с неспецифической бактериальной клеткой (37). Это объясняет специфичность фагов, выделенных в этом исследовании, в отношении хозяина.

    Внешние факторы, такие как pH и температура, могут влиять на стабильность и инфекционность фагов (7). Эти факторы могут колебаться, особенно у живых животных, из-за диеты и / или температуры окружающей среды. В связи с этим фаги, предназначенные для применения в области биоконтроля, особенно у живых жвачных животных, должны тестироваться в соответствующем диапазоне pH и температуры.По этой причине оценивали влияние воздействия разных температур (37 и 40 ° C) в разное время на инфекционность и стабильность восьми фагов. Учитывая, что полный лизис бактерий фагом занимает 20–40 мин (33), рост фага при различных температурах контролировали через 10, 30 и 60 мин. Кроме того, температуры инкубации были выбраны потому, что температура в пищеварительной системе жвачных животных колеблется от 37 до 40 ° C. Способность фагов выживать при этих температурах предполагает, что они могут применяться на живых животных в качестве агентов биоконтроля.При инкубации при 37 ° C фаги показывали значительную скорость роста в каждый момент времени. Фаги EC10C3PV, EC11B2PV и EC366VPV показали самые высокие темпы роста; фаг EC3A1PV показал самую медленную скорость роста от 10 до 60 мин. Эти результаты аналогичны результатам предыдущих исследований (28).

    Фаги показали различные модели роста при воздействии на них 40 ° C. Как правило, скорость роста фагов снижалась при 40 ° C по сравнению со скоростью роста при 37 ° C. При воздействии 40 ° C в течение 10–30 мин семь фагов показали значительную скорость роста.Однако один фаг показал снижение скорости роста через 30 минут, в то время как два фага, EC10C2PV и EC10C3PV, показали снижение только с 30 до 60 минут при 40 ° C. Это демонстрирует, что эти три фага были менее стабильны при высокой температуре, и поэтому их применение у живых животных ограничено, поскольку температура рубца составляет 39 ° C. Несмотря на это, другие пять фагов были довольно стабильны при 40 ° C, что позволяет предположить, что они могут быть пригодны для применения в биоконтроле живых животных.

    Регрессионный анализ поверхности ответа выявил значительную взаимосвязь между pH и стабильностью фага.Оптимальный pH для фагов при разном времени инкубации составлял от 7,6 до 8,0 (24 ч) и от 7,9 до 8,0 (48 ч). При инкубации в течение 24 и 48 часов все фаги демонстрировали сходные тенденции роста и выживаемости в широком диапазоне pH (4,5–10,0). Несмотря на это, все фаги были чувствительны к низкому pH (3,0), и никакой активности не наблюдалось после 24 и 48 часов инкубации при этом pH. Это согласуется с предыдущими исследованиями, в которых сообщалось, что воздействие на фаги pH 3,0 и ниже значительно снижает жизнеспособность и стабильность фагов (38, 39).Хотя оптимальный pH для всех фагов составляет 7,6–8,0, фаги показали хорошую стабильность даже при более низких значениях pH 6,3 и 7,0, что соответствует значениям pH рубца (6,5–6,9). И это указывает на их потенциальную пригодность для использования в стратегиях предуборочного вмешательства, которые могут быть разработаны для применения на жвачных животных.

    Латентный период фага и размер пакета являются важными параметрами, которые следует учитывать при выборе фагов для целей биоконтроля (5, 31). Фаги с коротким латентным периодом и большим размером взрыва более эффективны в инактивации бактерий и, таким образом, считаются подходящими для применения в биоконтроле (35).Одношаговые кривые роста показали, что восемь фагов имеют разные модели роста, что позволяет предположить, что они имеют разные генотипы. Они продемонстрировали выдающиеся характеристики, такие как короткий латентный период и большой размер бюста, что делает их привлекательными для контроля штамма E. coli O177. Латентный период фагов составлял от 15 до 25 мин, а размер пакета — от 91 до 522 БОЕ на клетку-хозяина. Кроме того, средний латентный период для всех фагов составлял 20 ± 3,8 мин, в то время как размер пакета составлял 260 ± 144 БОЕ на клетку-хозяина.Эти результаты соответствовали ранее опубликованным (35). Два фага, EC118BPV и EC366VPV, имели самый короткий латентный период (15 мин), тогда как EC11B2PV и EC3A1PV имели самый длинный латентный период (25 мин). Фаги EC10C3PV, EC118BPV и EC12A1PV имели наибольший размер пачки на инфицированную клетку (522 и 367 БОЕ на клетку-хозяина соответственно). Интересно, что эти три фага также показали широкий диапазон хозяев в спот-тесте. Это показывает, что эти фаги лучше подходят для применения в биоконтроле (40).

    В заключение, в этом исследовании были успешно выделены литические бактериофаги, заражающие экологический штамм E. coli O177. Кроме того, фаги были способны инфицировать три штамма E. coli из двух разных категорий: атипичный энтеропатогенный E. coli ( E. coli O177) и E. coli , продуцирующий токсин Shiga ( E. coli ). O26 и E. coli O157). Несмотря на это, ни один фаг не смог заразить штаммы ATCC и протестированных видов Salmonella в окружающей среде.Учитывая сильную литическую активность, широкий спектр и стабильность при различных температурах и уровнях pH, фаги, выделенные в этом исследовании, рассматриваются как потенциальные кандидаты для in vivo контроля штамма E. coli O177. Однако необходимы дальнейшие исследования с использованием соответствующих моделей in vitro, и in vivo, , чтобы оценить эффективность E. coli O177-специфических фагов в снижении количества E. coli O177 у живых животных и мясных продуктов.Более того, анализ последовательности всего генома также необходим для определения присутствия нежелательных генов в этих фагах.

    Заявление о доступности данных

    Наборы данных, созданные для этого исследования, доступны по запросу соответствующему автору.

    Заявление об этике

    Заявление «Этическое разрешение» было получено от этического комитета факультета естественных и сельскохозяйственных наук Северо-Западного университета до начала исследования. Исследованию был присвоен этический номер NWU-01223-19-S9.

    Взносы авторов

    VM и CA разработали и спланировали эксперименты, предоставили реагенты, материалы и инструменты для анализа. ПМ проводил эксперименты. PM, VM и CA написали документ и анализ данных.

    Финансирование

    Это исследование было поддержано Национальным исследовательским фондом (номер гранта: 112543) и стипендией для аспирантов Северо-Западного университета.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Авторы выражают благодарность д-ру Анин Йордан за ее техническую поддержку во время анализа ПЭМ на бактериофаги и г-ну Б. Дж. Морапеди за его помощь в сборе проб.

    Список литературы

    1. Ахтар М., Виазис С., Диез-Гонсалес Ф. Выделение, идентификация и характеристика литических бактериофагов широкого диапазона хозяев из сточных вод против сероваров Salmonella enterica . Контроль пищевых продуктов. (2014) 38: 67–74.DOI: 10.1016 / j.foodcont.2013.09.064

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    2. Хуанг Ч., Ши Дж., Ма В., Ли З., Ван Дж., Ли Дж. И др. Выделение, характеристика и применение нового специфического бактериофага Salmonella в различных пищевых матрицах. Food Res Int. (2018) 111: 631–41. DOI: 10.1016 / j.foodres.2018.05.071

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    4. Харада Л.К., Сильва Е.С., Кампос В.Ф., Дель Фиол Ф.С., Вила М., Дабровска К. и др.Биотехнологическое применение бактериофагов: современное состояние. Microbiol Res. (2018) 212–3: 38–58. DOI: 10.1016 / j.micres.2018.04.007

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    5. Ниу Й, Джонсон Р., Сюй Й., Макаллистер Т., Шарма Р., Луи М. и др. Диапазон хозяев и литическая способность четырех бактериофагов против бычьих и клинических человеческих изолятов токсина Shiga, продуцирующего Escherichia coli O157: H7. J Appl Microbiol. (2009) 107: 646–56. DOI: 10.1111 / j.1365-2672.2009.04231.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    6. Ахтар М., Виазис С., Кристенсен К., Кремер П., Диц-Гонсалес Ф. Выделение, характеристика и оценка вирулентных бактериофагов против Listeria monocytogenes . Контроль пищевых продуктов. (2017) 75: 108–15. DOI: 10.1016 / j.foodcont.2016.12.035

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    7. Инь И, Лю Д., Ян С., Алмейда А., Го Ц., Чжан З. и др.Потенциал бактериофага против биопленок Vibrio parahaemolyticus . Контроль пищевых продуктов. (2019) 98: 156–63. DOI: 10.1016 / j.foodcont.2018.11.034

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    8. Ateba CN, Bezuidenhout CC. Характеристика штаммов Escherichia coli O157 от людей, крупного рогатого скота и свиней в Северо-Западной провинции, Южная Африка. Int J Food Microbiol. (2008) 128: 181–8. DOI: 10.1016 / j.ijfoodmicro.2008.08.011

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    9.Акиндолайр М., Бабалола О., Атеба С. Обнаружение устойчивого к антибиотикам Staphylococcus aureus из молока: значение для общественного здравоохранения. Int J Environ Res Public Health. (2015) 12: 10254–75. DOI: 10.3390 / ijerph2204

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    10. Дламини Б.С., Монсо П.К., Кумар А., Атеба С.Н.. Распределение факторов вирулентности, детерминанты устойчивости к антибиотикам и молекулярный фингерпринт видов Salmonella , выделенных из образцов крупного рогатого скота и говядины: наводящие на размышления доказательства заражения мяса от животных. Environ Sci Pollut Res. (2018) 5: 32694–708. DOI: 10.1007 / s11356-018-3231-4

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    12. Барилли Э., Висмарра А., Вилла З, Бонилаури П., Баччи С. ESβL E. coli , выделенная в цепи свиней: генетический анализ, связанный с фенотипом и оценка синтеза биопленок. Int J Food Microbiol. (2019) 289: 162–7. DOI: 10.1016 / j.ijfoodmicro.2018.09.012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    14.Фаррох С., Джордан К., Овре Ф., Гласс К., Оппегаард Х., Рейно С. и др. Обзор шига-токсина Escherichia coli (STEC) и их значение в молочном производстве. Int J Food Microbiol. (2013) 162: 190–212. DOI: 10.1016 / j.ijfoodmicro.2012.08.008

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15. Гулд Л.Х., Моди Р.К., Онг К.Л., Клогер П., Кронквист А.Б., Гарман К.Н. и др. Повышенное признание инфекций Escherichia coli , не продуцирующих токсин O157 Shiga в США в период 2000–2010 гг .: эпидемиологические особенности и сравнение с E.coli O157 инфекции. Пищевой патоген. Дис. (2013) 10: 453–60. DOI: 10.1089 / fpd.2012.1401

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    16. Hungaro HM, Mendonça RCS, Gouvêa DM, Vanetti MCD, De Oliveira Pinto CL. Использование бактериофагов для уменьшения содержания Salmonella в коже цыпленка по сравнению с химическими агентами. Food Res Int. (2013) 52: 75–81. DOI: 10.1016 / j.foodres.2013.02.032

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17.Чен Дж, Рен Й, Сео Дж, Лю Т., Банг В., Юк Х. Технологии вмешательства для обеспечения микробиологической безопасности мяса: текущие и будущие тенденции. Compr Rev Food Sci Безопасность пищевых продуктов. (2012) 11: 119–32. DOI: 10.1111 / j.1541-4337.2011.00177.x

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18. Боатемаа С., Барни М., Дрими С., Харпер Дж., Корстен Л., Перейра Л. Пробуждение после кризиса листериоза: проблемы безопасности пищевых продуктов, практика и управление в секторе розничной торговли продуктами питания в Южной Африке. Контроль пищевых продуктов. (2019) 104: 333–42. DOI: 10.1016 / j.foodcont.2019.05.009

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    19. Сэмбрук Дж., Фрич Э. Ф., Маниатис Т. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. 2-е изд. Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк: Лаборатория Колд-Спринг-Харбор Пресс (1989).

    Google Scholar

    20. Ван Твест Р., Кропинский AM. Обогащение бактериофагов из воды и почвы. В: Бактериофаги. Методы молекулярной биологии ™. Humana Press (2009). п. 15–21. DOI: 10.1007 / 978-1-60327-164-6_2

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21. Редактор Адамса MH. Методы исследования бактериальных вирусов. Бактериофаги. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Издательство Interscience (1959). п. 443–522.

    Google Scholar

    22. Sambrook J, Russell DW. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. 3-е изд. Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк: Лаборатория Колд-Спринг-Харбор Пресс (2001).

    Google Scholar

    23. Zhang H, Yang Z, Zhou Y, Bao H, Wang R, Li T, et al. Применение фага для обеззараживания Vibrio parahaemolyticus устриц. Int J Food Microbiol. (2018) 275: 24–31. DOI: 10.1016 / j.ijfoodmicro.2018.03.027

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Куттер Э. Диапазон хозяев фага и эффективность посева. В: Clokie MRJ, Kropinski AME, редакторы. Бактериофаги. Методы молекулярной биологии ™.Нью-Йорк, Нью-Йорк: Humana Press; Спрингер (2009). п. 501. DOI: 10.1007 / 978-1-60327-164-6_14

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25. Манохар П., Сталсби Лундборг С., Тамханкар А.Дж., Нахимуту Р. Терапевтическая характеристика и эффективность коктейлей с бактериофагами, заражающих видов Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae и Enterobacter видов. Front Microbiol. (2019) 10: 574. DOI: 10.3389 / fmicb.2019.00574

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27.Ackermann HW. Классификация и характеристика фагов. В: Clokie MRJ, Kropinski AM, редакторы. Бактериофаги: методы и протоколы, Том 1: Выделение, характеристика и взаимодействия. Тотова, Нью-Джерси: Humana Press; Спрингер (2009). п. 127–40. DOI: 10.1007 / 978-1-60327-164-6_13

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28. Эль-Дугдуг Н.К., Кучич С., Абдельхамид А.Г., Бровко Л., Кропински А.М., Гриффитс М.В. и др. Контроль Salmonella Newport на помидорах черри с использованием коктейля литических бактериофагов. Int J Food Microbiol. (2019) 293: 60–71. DOI: 10.1016 / j.ijfoodmicro.2019.01.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30. Рао Б.М., Лалита К. Бактериофаги для аквакультуры: полезны они или вредны. Аквакультура. (2015) 437: 146–54. DOI: 10.1016 / j.aquaculture.2014.11.039

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    31. Перейра С., Морейринья С., Левика М., Алмейда П., Клементе С., Кунья А. и др. Бактериофаги с потенциалом инактивировать Salmonella Typhimurium : использование отдельных фаговых суспензий и фаговых коктейлей. Virus Res. (2016) 220: 179–92. DOI: 10.1016 / j.virusres.2016.04.020

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    32. Niu YD, McAllister TA, Nash JH, Kropinski AM, Stanford K. Четыре Escherichia coli O157: фаги H7: новый род бактериофагов и таксономическая классификация T1-подобных фагов. PLoS ONE. (2014) 9: e100426. DOI: 10.1371 / journal.pone.0100426

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    33.Перера М.Н., Абуладзе Т., Ли М., Вулстон Дж., Сулаквелидзе А. Бактериофаговый коктейль значительно снижает или устраняет Listeria monocytogenes заражение салатом, яблоками, сыром, копченым лососем и замороженными продуктами. Food Microbiol. (2015) 52: 42–8. DOI: 10.1016 / j.fm.2015.06.006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Снайдер А.Б., Перри Дж. Дж., Юсеф А. Э.. Разработка и оптимизация обработки бактериофагами для борьбы с энтерогеморрагической Escherichia coli в свежих продуктах. Int J Food Microbiol. (2016) 36: 90–7. DOI: 10.1016 / j.ijfoodmicro.2016.07.023

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    35. Duc HM, Son HM, Honjoh KI, Miyamoto T. Выделение и применение бактериофагов для уменьшения загрязнения сырого куриного мяса сальмонеллами. LWT. (2018) 91: 353–60. DOI: 10.1016 / j.lwt.2018.01.072

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    36. Трункайте Л., Шимолюнас Е., Заянчкаускайте А., Калиниене Л., Манкявичюте Р., Станюлис Дж. И др.Бактериофаг vB_EcoM_FV3: новый член «rV5-подобных вирусов». Arch Virol. (2012) 157: 2431–5. DOI: 10.1007 / s00705-012-1449-x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    37. Сингх А., Арья С.К., Гласс Н., Ханифи-Могхаддам П., Найду Р., Шимански С.М. и др. Белки-хвосты бактериофагов в качестве молекулярных зондов для чувствительного и селективного обнаружения бактерий. Biosens Bioelectron. (2010) 26: 131–8. DOI: 10.1016 / j.bios.2010.05.024

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    38.Hu Z, Meng XC, Liu F. Выделение и характеристика литических бактериофагов против Pseudomonas spp., Нового биологического вмешательства для предотвращения порчи сырого молока. Int Dairy J. (2016) 55: 72–8. DOI: 10.1016 / j.idairyj.2015.11.011

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    39. Сталин Н., Сринивасан П. Эффективность потенциальных фаговых коктейлей против видов Vibrio harveyi и близкородственных видов Vibrio , выделенных из среды аквакультуры креветок на юго-восточном побережье Индии. Vet Microbiol. (2017) 207: 83–96. DOI: 10.1016 / j.vetmic.2017.06.006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    40. Калацис П.Г., Бастиас Р., Коккари С., Катариос П. Выделение и характеристика двух литических бактериофагов, ϕSt2 и ϕGrn1; применение фаготерапии для биологической борьбы с вибрионом alginolyticus в живых кормах для аквакультуры. PLoS ONE. (2016) 11: e0151101. DOI: 10.1371 / journal.pone.0151101

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Lysis — обзор | ScienceDirect Topics

    ВВЕДЕНИЕ

    Лизис эпидуральных спаек — это интервенционный метод обезболивания, который со временем развивался [1].Цель лизиса эпидуральных спаек — разрушить барьеры в эпидуральном пространстве, которые, как считается, способствуют болезненным процессам и предотвращают доставку обезболивающих лекарств к целевым участкам. Методика, которая была впервые описана и до сих пор используется наиболее часто, основана на введении судоходного катетера в эпидуральное пространство. Совсем недавно эпидуроскопия была представлена ​​как альтернативный или дополнительный подход к катетерной технике. Процедура лизиса проводится по всей оси позвоночника, но лизис с помощью эпидуроскопии обычно ограничивается поясничной и крестцовой областями.Эта глава посвящена осложнениям, связанным с лизисом для лечения боли в пояснице и радикулопатии нижних конечностей с поражением поясничного и крестцового сегментов.

    Целью лизиса эпидуральных спаек является уменьшение механических барьеров, препятствующих попаданию лекарств в ганглии дорзального корня. Техника возникла из наблюдений во время инъекции под визуальным контролем. Было очевидно, что у некоторых пациентов образование рубцовой ткани препятствовало инъекции жидкости или установке катетера рядом с спинномозговыми нервами.Сенсорный блок, который развивается при введении эпидурального местного анестетика для проведения хирургической анестезии, обезболивания или обезболивания при родах, как правило, симметричен, что позволяет предположить, что распространение местного анестетика в этой популяции относительно равномерно. Однако у пациентов с хронической болью в спине распространение контраста было неравномерным, с большими дефектами наполнения, наблюдаемыми у многих пациентов. Жидкость, помещенная в эпидуральное пространство, будет следовать по пути наименьшего сопротивления и не будет распространяться в места, где есть препятствие, вызванное рубцовой тканью.Если катетер помещали в непосредственной близости от наблюдаемой рубцовой ткани и вводили местный анестетик, рентгеноконтрастное вещество и другие жидкости, часто следовало обезболивание, и продолжительность обезболивания значительно превышала продолжительность местного анестезирующего эффекта. Введение инъекций большого объема в эпидуральное пространство часто приводило к длительному облегчению боли и более равномерному распределению контраста по эпидуральному пространству. Это предполагает, что размещение жидкости в эпидуральном пространстве может привести к уменьшению или устранению механических барьеров, вызванных рубцеванием.

    В 1991 году Kuslich et al. очертили чувствительные к боли структуры позвоночного канала при проведении хирургических ламинэктомий под местной анестезией [2]. Используя механическую, а также электрическую стимуляцию, они обнаружили, что чувствительные к боли структуры включают кольцо, нервные корешки, фасеточные суставы, заднюю продольную связку, сухожильные прикрепления мышц (но не сами мышцы), связки и фасции. Они также обнаружили, что нервные корешки болезненны, если они сдавлены, опухли, воспаляются или ограничены рубцовой тканью.Нервы в 3,2 раза чаще вызывают корешковую боль, если они окружены рубцовой тканью [3]. Область бокового углубления — это место выхода нервных корешков из позвоночного канала. Эти корни подвержены травмам из-за образования рубцов, гипертрофических фасеточных суставов, выпуклых дисков и многочисленных осложнений, связанных с хирургической и инъекционной техникой [1]. Начиная с наблюдений Куслича и др. Вентролатеральное эпидуральное пространство постепенно стало признаваться как место-мишень для лечения во время лизиса эпидуральных спаек.Разработка навигационного рентгеноконтрастного катетера с мягким наконечником, устойчивого к изгибам, позволила большинству пациентов разместить его на этом целевом участке или рядом с ним. Однако существует ряд осложнений, связанных с лизисом эпидуральных спаек. В некоторых случаях использование больших объемов эпидурального пространства вызывает баротравму содержимого позвоночного канала, включая спинной мозг, нервные корешки и кровоснабжение спинного мозга.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    2021 © Все права защищены.
  • Разведение фага 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5
    Количество бляшек
    Расчеты количества бляшек / мл