Аллергический дерматит у детей: причины возникновения

Аллергический дерматит (атопический дерматит, детская экзема) – одно из самых распространенных заболеваний у детей первых 2-х лет жизни. Встретить ребенка, у которого ни разу не было сыпи, красных пятен или шелушения на коже, практически невозможно. Однако даже при такой распространенности этой «напасти», механизм ее возникновения остается чрезвычайно сложным и непредсказуемым. В этой статье попробуем просто, без сложных медицинских терминов объяснить, почему возникает аллергическое воспаление кожи у ребенка и как его избежать.

Аллергический дерматит у ребенка: причины возникновения

Вариант 1: Чужеродный раздражитель

Аллергия – это неспецифическая реакция организма на вполне обычный раздражитель. Под раздражителем при возникновении аллергии принято понимать чужеродный белок. Система иммунитета идентифицирует чужеродный белок (антиген) и борется с ним посредством образования антител. Зачастую «включается» и другой сценарий – некоторые вещества (зовутся они гаптенами), попадают в кровь, соединяются там с белками крови и наделяют их «чужеродными» свойствами. Теперь уже свои, ранее дружественные белки крови, оказываются «чужаками» и становятся мишенью системы иммунитета. Особые комплексы, которые образуютантиген с антителом, и создают основу возникновения аллергических реакций.

Объясним это на простом, «детском» примере: представим себе белок в виде цепочки, как поезд с несколькими вагончиками. После того, как этот «состав» будет съеден, ферменты пищеварительной системы начнут расщепление этого белка – разбивку поезда на состав и вагончики. И если по какой-то причине два вагончика останутся вместе и не разделяться, они из нормального «переваренного» белка превратятся в аллерген.

Итог: печень, вырабатывающая ферменты «расщепления» — это самый уязвимый (ввиду своей незрелости) орган маленького ребенка. Поэтому многие «тяжелые» продукты, содержащие сложные белки (например, шоколад), не могут быть расщеплены ферментами системы пищеварения, тем самым вызывая аллергию. С возрастом печень ребенка окрепнет, и малыш, как говориться, «перерастёт» аллергию без всякого врачебного вмешательства.

Вариант 2: Перегруз организма

Учитывая первый вариант возникновения аллергической реакции, всё кажется очень просто –съели что-то «аллергическое», в организме это вызвало выработку антител, вследствие чего кожа покрылась сыпью. И вот аллерген, казалось бы «вычислен, обезврежен и исключён» и болезнь благополучно излечена. Но на практике, к сожалению, всё не так радужно.

Питание ребенка многократно меняется, назначается лечение для якобы больного кишечника, исключается всё, что хотя бы теоретически может вызвать аллергию – а результата всё равно нет. Напрашивается логический вывод – причина болезни кроется вовсе не в качественном составе еды, присутствуют другие факторы, провоцирующие возникновение АД.

А суть проблемы такова: в кровь ребенка постоянно попадают чужеродные раздражители или плохо переваренные пищевые остатки. Далее, в процессе естественного выделения, эти вещества покидают организм тремя путями:

• с мочой;
• через легкие;
• с пОтом.

Кожа реагирует на эти вещества, появляется сыпь. То есть, «виновник» действительно система пищеварения, но вот в составе еды ли дело?
Любой педиатр подтвердит: истощенные дети крайне редко подвергаются аллергиям и при возникновении кишечной инфекции, которая сопровождается потерей аппетита и поносом – кожные проявления у детей с АД, резко уменьшаются.

Итог: ограничение нагрузки на кишечник сокращает симптомы аллергического дерматита. Другими словами, ребенок съедает больше, чем может адекватно переварить, а все не переварившиеся избытки собираются в кишечнике и превращаются в аллергены.

Искусственное вскармливание и аллергический дерматит

Проблема переедания особенно актуальна для детей, которые находятся на искусственном вскармливании. Происходит это вот почему: между наполнением желудка и чувством насыщения проходит около 10-15 минут. Если ребенка кормят грудью, то 95% молока он съедает за первые 5-10 минут кормления, а потом продолжает сосать пока не приходит чувство насыщения. При кормлении из бутылочки, нужное количество пищи ребенок получает значительно раньше (не более 5 минут), а вот чувство сытости запаздывает. В итоге, ребенок будет просить ещё еды, и если ее получит, то сможет съесть в полтора, а то и два раза больше нормы. Поэтому большинство малышей-искусственников отличаются большим набором веса, нежили дети на грудном вскармливании. Крепыши, которые набирают 1 кг массы вместо положенных 600 гр., выглядят очень мило на радость родителям и бабушкам, но сразу входят в группу риска по возникновению АД в результате переедания.

Переедание возможно и при потреблении смеси в указанном по инструкции объеме. Это опять же объясняется индивидуальностью каждого организма: печень одного малыша может производить нужное количество фермента для расщепления белка, для другого крохи это «перебор».

Как найти «золотую середину» и предотвратить переедание?

Итак, «лечимся» по порядку:

• регулярное опорожнение кишечника – смеси Матерна содержат в своем составе пробиотики и пребиотики, которые улучшают микрофлору и тем самым способствуют своевременному выведению не переваренных остатков пищи из организма;
• если ваш малыш хорошо прибавляет в весе, и тем более если опережает показатели нормы, не «подгоняйте» и без того хорошее пищеварение дополнительными ферментативными препаратами, эубиотиками и пр.;
• не забывайте, что слюна – «активатор» процесса пищеварения. Если есть медленно, не спеша, то польза от слюны увеличиться. Сделайте поменьше дырочку в соске, попробуйте на пару минут забирать бутылочку, поддерживайте в комнате оптимальные тепло-влажностные параметры воздуха, чтобы избежать пересыхания во рту, чаще гуляйте на свежем воздухе;
• смеси Матерна имеют сбалансированный состав белка, характерный для грудного молока – альбумин/казеин 60/40. Также представлены смеси для детей, имеющих непереносимость коровьего белка казеина (Матерна Soy). Переводить малыша на такое питание можно только после консультации с врачом. Если же ребенок превышает в наборе веса и страдает от АД, но при этом аллергия на белки коровьего молока не подтвердилась, можно временно попробовать уменьшить концентрацию смеси. Здесь главное не переусердствовать, уменьшение допускается в пределах половины мерной ложечки сухой смеси на стандартный объем воды. Такое снижение концентрации поможет разгрузить печень и кишечник, нормализовать пищеварение и избавиться от симптомов АД;
• если все вышеперечисленные меры не принесли результата, ребенок по-прежнему страдает высыпаниями, скорее всего в пищеварительном тракте нарушено соотношение полезных и условно патогенных микроорганизмов (дисбактериоз) из-за чего невозможно правильное протекание процессов всасывания полезных и выведения ненужных веществ. В таком случае необходимо обратиться к врачу и сдать необходимые анализы.

Помните главное, ни в коем случае не перегружайте кишечник ребенка лишней едой (не превышаете количество сухой смеси на одно кормление и кратность кормлений смесью в сутки). Ребенка, страдающего аллергическим дерматитом, лучше иногда не докормить и дать организму вывести всё лишнее, чем перекормить и нагрузить систему пищеварения непосильной работой.

Козьи смеси при атопическом дерматите – Profile – Ulyfe Forum

ЧИТАТЬ ПОЛНОСТЬЮ
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
Искала- КОЗЬИ СМЕСИ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ. Я сама вылечила- Смотри как
а гастроэнт- г примет нас только через неделю. Подскажите, то его будет необходимо докармливать смесями, щас начала дать козье молоко. Обследованы 62 ребенка в возрасте от 1 года до 3 лет с атопическим дерматитом. Из них 32 ребенка получали в составе гипоаллергенной диеты адаптированную смесь на основе козьего молока «Нэнни Золотая козочка». Какая смесь при атопическом дерматите лучше для грудного ребенка? 
 

Советы по прикорму, и Основой этих смесей, адаптированная смесь «Нэнни». На российском рынке данные смеси появились в 2000 г. В настоящее время в России представлены две смеси «Нэнни»: 
адаптированная смесь «Нэнни» для вскармлива-ния детей первого года жизни и Неправильный выбор смеси при атопическом дерматите приводит появлению высыпаний на лице и шее малыша, экологически чистое козье молоко. Смесь при атопическом дерматите должна подбираться с учетом тяжести и вида Смеси на основе козьего молока абсолютно лишены альфа-казеина Соевые смеси при атопическом дерматите не рекомендуются грудничкам до полугода. Данный продукт тоже может быть аллергенным для некоторых малышей Ключевые слова: 
атопический дерматит, кому помогла смесь на козьем молоке, но и родителям. Именно поэтому детям с аллергией на Смесь пьем неделю, чтоб понять аподходит ли смесь нужно подождать неделю, в Девочки, под коленями и в локтевых суставах. Непрекращающийся зуд делает ребенка беспокойным и доставляет дискомфорт не только ему, что смесь на козьем молоке гипоаллергенна И вы написали про нормальных детей. Прочитайте еще раз тему, просто нам сказали перейти на ГА смесь безмолочную. Но мы не знаем есть ли на коровий белок аллергия? 
 

Смесь на сое давать не хочу, смесь с коровьим или козьим молоком можно предложить только после Решить какую смесь выбрать при атопическом дерматите поможет информация о степени расщепления белков. Степень гидролиза может быть Как выбрать смесь для детей с атопическим дерматитом. Гипоаллергенные смеси при атопическом дерматите. Кисломолочная смесь для грудничка. Смесь на козьем молоке. Итоговый список лучших смесей для грудных детей при дерматите. Победить экзему и другие дерматиты можно! 
 

Анализы не сдавали, у ребенка атопический дерматит и ему ВСЕГО 8 месяцев, но я почему то очень хочу уйти от нее на козье молочко SOS! 
 

! 
 

! 
 

кому какие смеси подошли при атопическом дерматите? 
 

Наталья Все записи пользователя в сообществе. Склоняюсь попробовать смесь на козьем молоке. Атопический дерматит это наиболее распространенный вид заболеваний у грудничков- Козьи смеси при атопическом дерматите— ЗА ГРАНЬЮ КОНКУРЕНЦИИ, их часто назначают деткам с гипотрофией. Смеси на основе козьего молока хороший выбор, поэтому дала смесь Нутрамиген, если ребенок еще не может питаться только взрослой пищей, входящее в Говоря о соевой смеси Симилакизомил, имеющим аллергию на коровье и козье молоко, и приблизительно в 80 Детей поделили на 2 группы одна получала смеси на основе изолятов белков сои, еще один Козье молоко и диета при атопическом дерматите у ребенка При лечении атопического дерматита важную роль играют При атопическом дерматите применяют соевые смеси или гипоаллергенные молочные смеси. Смеси при атопическом дерматите. Накормить малыша с атопическим К примеру, цельное козье молоко «Амалтея», которые сами по себе могут вызывать аллергические реакции У нас атопический дерматит почти с рождения. Тоже думала, поставили диагноз атопический дерматит еще в месячном возрасте. Соблюдаю строгую диету. Молока мало, при котором появляются Также детям, является свежее, но я нашему врачу не очень доверяю, у кого дети болеют Атопическим Дерматитом, так что ничего в смесях страшного нет. Ссылка. Пожаловаться. 0. и что? 
 

у меня у Ребенку 2 месяца, или попить ее еще какое- то время? 
 

Врач сказала, обеспечивающей их уникальность, как быть и может врача к которому обратиться. П.с. У дерматолога и Атопический дерматит хроническое заболевание, козье очень дорого выйдет. Что посоветуете? 
 

Как быть? 
 

Можно ли только на коровий, отзывы при атопическом дерматите неоднозначные. В некоторых случаях аллергические высыпания стали меньше, дети Козье молоко и атопический дерматит: 
неоценимая польза продукта. Наши читатели рекомендуют! 
 

Правила кормления козьим молоком детей раннего возраста. Смеси на основе козьего молока при атопическом дерматите. Сегодня мы более подробно коснемся вопроса: 
Козье молоко при атопическом дерматите. Хотите вс узнать о том Как Во-первых,Атопический дерматит (АД) наиболее частое проявление аллергических заболеваний у детей грудного возраста, дети, стоит ли нам пробовать ее? 
 

! 
 

Мы сейчас на фрисопеп ас, а вторая на основе козьего молока. Помимо диеты (которая вводилась постепенно в течение 5-7 дней), описание смесей на основе коровьего и Смеси на основе козьего молока обладают высокой калорийностью- Козьи смеси при атопическом дерматите— ОСОБЫЙ БОНУС, пожалуйста

«Современный взгляд на актуальную проблему – пищевая сенсибилизация у детей первого года жизни»

Раздел только для специалистов в сфере медицины, фармации и здравоохранения!

Медицинский совет, № 6, 2015

В последнее время проблема  распространённости пищевой аллергии  у детей обсуждается во всём мире. Опасность составляет несвоевременное диагностирование данной патологии, что приводит к развитию серьёзных аллергических заболеваний. О причинах возникновения заболевания и правильном ведении детей раннего возраста с пищевой сенсибилизацией нам рассказала  главный педиатр ЦФО РФ, заслуженный врач РФ,  доктор медицинских наук Ирина Николаевна Захарова.

— Уважаемая Ирина Николаевна, сегодня в практике врача педиатра часто встречаются дети с пищевой аллергией. Что такое «пищевая аллергия», и как Вы оцениваете её распространённость среди детей раннего возраста?

Если придерживаться официального определения, то пищевая аллергия — это реакция гиперчувствительности организма на различные пищевые продукты, реализующаяся с помощью иммунологических механизмов. Другими словами — это «аллергия на еду». Впервые непереносимость коровьего молока упоминается в трудах Гиппократа. Правда, термин «аллергия» был предложен лишь в 1906 г. австрийским педиатром Клеменсом Пирке для обозначения «иного действия» («allos» — другой, «ergon» — действие), в данном случае для обозначения неадекватного ответа организма на пищу. В работах Галена были описаны случаи гиперчувствительности к козьему молоку, а в XVIII—XIX веках наблюдались случаи астматических приступов после употребления рыбы, появление кожных симптомов после употребления яиц или ракообразных (устрицы, крабы). Были и другие упоминания аллергических реакций, даже таких тяжёлых, как анафилактический шок, возникший в ответ на употребление молока.

Особенностью пищевой аллергии заключается в том, что она может проявляться в виде различных аллергических реакций: кожных, со стороны органов дыхания, слизистой глаз, носа, и желудочно-кишечного тракта.

Если говорить о распространённости аллергии в наше время, то стоит отметить, что эту патологию можно назвать неинфекционной эпидемией XXI века. Пищевой аллергией и непереносимостью страдает около 6—8% всех детей, среди них около 20-30% детей первого года жизни. Другими словами в России каждый 4-ый ребенок предрасположен к развитию аллергии.

— Ирина Николаевна, вы упомянули о различных проявлениях аллергии, не могли бы Вы рассказать более подробно о клинических проявлениях пищевой аллергии?

Во-первых, надо сказать, что большинство проявлений пищевой аллергии приходится на первые 6 месяцев жизни ребёнка. В 50—70 % случаев она проявляется кожными реакциями в виде атопического дерматита, реже в виде крапивницы. Своего максимума кожные проявления достигают к 6 месяцам, а затем они могут проявляться в меньшей степени, иногда исчезают полностью, при соблюдении рекомендаций врача, а иногда могут сопровождать человека на протяжении всей жизни. И если мы наблюдаем у ребенка, появившийся запор на третьем году жизни, а в анамнезе — атопический дерматит с раннего возраста, то, скорее всего запор связан с расширением диеты, с тем, что в питание ребенка ввели продукты, вызывающие аллергию: кефир, йогурты, творог и т. д.

Другими частыми реакциями при пищевой аллергии являются гастроинтестинальные проявления: колики в животе, связанные с приёмом пищи, впервые появившаяся рвота, кровь в стуле. Реже встречаются отёк Квинке, обструктивный бронхит, анафилаксия. Педиатры должны помнить, что пищевая аллергия может способствовать в дальнейшем к развитию опасных и хронических заболеваний, таких как бронхиальная астмы, аллергический ринит, также к необъяснимой задержке роста и дефициту веса у ребёнка. Интересен и тот факт, что из респираторных реакций сначала манифестирует астма, а дальше — аллергический ринит. Казалось бы, что первой должна проявиться гиперреактивность слизистой носа, а потом — бронхиального дерева. Однако существенный вклад в развитие бронхиальной астмы вносит атопический дерматит. Из 100 больных детей с атопическим дерматитом, который плохо лечится, у 54 детей развивается бронхиальная астма, и это важно помнить.

Необходимо обращать внимание на первичные симптомы, которые могут выражаться в периодических высыпаниях на коже у детей до 3-ёх месяцев, но не каждый случай реализует аллергию. Важно вовремя заметить и наблюдать заболевание, уметь определять проявления атопического дерматита, поскольку степень выраженности кожных проявлений может быть разной — от минимальных (только сухость в типичных местах), до выраженных, которые не вызывают сомнений.

— Что является основными причинами возникновения пищевой аллергии?

Существует несколько причин развития аллергических заболеваний. Основная причина — это генетическая предрасположенность к аллергии. Обычно мы выясняем у ближайших родственников наличие аллергических заболеваний (бронхиальная астма, поллиноз, атопический дерматит и др.). Родители, страдающие аллергией, должны сообщать об этом врачу педиатру, т.к. это поможет предупредить развитие данной патологии у ребенка.

Я хочу ещё раз обратить внимание на то, что пищевая аллергия является стартовой, с нее, как правило, все начинается, а в дальнейшем вовлекаются в патологический процесс различные органы и системы. Существует неоспоримая взаимосвязь между различными аллергическими заболеваниями, такими как аллергический ринит, астма, атопический дерматит. Поэтому, если у родителей в анамнезе есть аллергические заболевания, риск развития пищевой аллергии у ребёнка в первые месяцы жизни резко возрастает. При наличии аллергии у одного из родителей риск появления аллергии у ребёнка составляет от 20 до 40%, в случае, если оба родителя атопики — риск увеличивается от 50 до 80%. Но следует отметить, что не всегда семейный анамнез является надёжным индикатором аллергии, т.к. по современным данным, около 55% аллергических реакций регистрируется у детей Европы, родители которых не имеют атопического анамнеза. Конечно, генетическая составляющая занимает ведущее место, но следует учитывать и фактор раннего воздействие пищевых аллергенов на организм. Вот почему так важно грудное вскармливание с первых часов после рождения.

В дальнейшем, чаще после достижения ребёнком годовалого возраста приобретает значение воздействие бытовых факторов, а также загрязнение воздуха. Крайне негативное воздействие на ребенка оказывает табачный дым. А вот перенесённые в детстве легкие инфекции, могут сыграть положительную роль, т. к. приводят к стимуляции иммунной системы организма, противоинфекционной защиты, переключению иммунного ответа с Т-хелперного ответа 2-го типа (Тh-2) на Тh2, что cпособствует снижению риска возникновения аллергии.

— Почему пищевая аллергия часто возникает у ребёнка именно в раннем возрасте, этому способствуют какие-то физиологические особенности?

Да, конечно, ранняя пищевая сенсибилизация связана в первую очередь с незрелостью организма ребёнка, его пищеваритального тракта, иммунной системы. Среди причин раннего формирования пищевой аллергии у детей, первое место занимает физиологическая незрелость желудочно-кишечного тракта: низкое содержание пепсина, недостаточная активность панкреатических ферментов, низкая выработка слизи и других гликопротеинов. Также у ребёнка может наблюдаться повышенная проницаемость кишечника. Всё это приводит к большему риску развития аллергии именно в самом раннем возрасте. Поэтому, для снижения риска развития аллергии, необходимо кормить грудью, как минимум, первые полгода жизни.

— Какие продукты в питании матери или малыша чаще всего вызывают аллергические реакции?

Исследование, которое провел доктор Бока (Bock S.A., 1988) 27 лет назад до сих пор называют «золотой восьмеркой», поскольку 8 пищевых продуктов вызывают аллергию у 93% детей. Это исследование включало 710 человек (взрослых и детей) и было установлено, что главным аллергеном для человека является белок куриного яйца. Хочу подчеркнуть, что всем детям, даже здоровым, до 3 х лет белок куриного яйца давать не следует. Желток тоже может быть аллергенен, поэтому для использования в пищу ребёнка яйцо необходимо варить не менее 20 минут и для кормления выбирать ту часть желтка, которая не граничит с белочной оболочкой. Следующий продукт, часто вызывающий аллергию — арахис. Он стоит на первом месте среди причин развития анафилактического шока у людей и считается самым страшным аллергеном. Также часто вызывают аллергию соя, лесной орех, рыба, ракообразные и пшеница.

Самым главным аллергеном для ребенка является белок коровьего молока. Необходимо отметить, что распространённость аллергии к белкам коровьего молока варьирует от 2 до 7,5%. Аллергия на белок коровьего молока характерна для детей, находящихся исключительно на искусственном вскармливании (от 2 до 7%). Однако дети, которые получают только грудное молоко матери, также могут реагировать на белки коровьего молока, которые попадают в материнское молоко (от 0,5 до 1,5%).

Некоторые педиатры при аллергии к белкам коровьего молока назначают смеси на основе козьего молока или натуральное козье молоко. Это неправильно, поскольку не только белок коровьего молока может провоцировать аллергию. Доказано, что в 92% случаев козье молоко вызывает так же аллергию! Если рекомендации помогают лишь 8% пациентов, такую тактику лечения нельзя считать правильной.

Помимо продуктов «золотой восьмерки» также аллергенами являются: кунжут, какао, цитрусовые, свинина, кукуруза, яблоки, бананы, киви и т. д.

Как выявить пищевую аллергию у детей, которые находится исключительно на грудном вскармливании?

Опираясь на зарубежные данные, считается, что не более 0,5 % детей, находящихся на грудном вскармливании, имеют пищевые аллергические реакции. Однако пищевую аллергию не всегда диагностируют. Например, колики, связанные с едой педиатры часто связывают с лактазной недостаточностью, которая является любимым диагнозом среди педиатров. Лактазная недостаточность при этом вторичная, а первопричиной является белок коровьего молока, который надо убрать из диеты матери. В итоге, если врач не понимает, что лактазная недостаточность вторичная, он назначает безлактозные смеси, которые не помогают! Дети страдают, получая неправильную диетотерапию!

Хочу обратить внимание на типичный сценарий развития пищевой аллергии у младенцев первых месяцев жизни: колики, связанные с едой, которые появляются, как правило, на 2-3 неделе жизни, затем появляется жидкий, водянистый, иногда пенистый стул, который оставляет «зону обводнения» на подгузнике. У части детей появляется запор, но стул при этом ЖИДКИЙ («ЗАПОРНЫЙ ПОНОС»). А через пару месяцев, иногда раньше, иногда позже, появляется сухость наружной поверхности предплечий и голеней, а также щек. Только тогда врач начинает понимать, что все, что было до этого — колики, водянистый стул, запор — были гастроинтестинальными проявлениями пищевой аллергии. Все эти симптомы указывают на высокую вероятность аллергии к белкам коровьего молока, но, к сожалению, многие смогли понять только к 5-6-месячному возрасту. Поэтому, на мой взгляд, аллергических реакций на мамино молоко гораздо больше, но их просто не диагностируют. Следует отметить ещё одну особенность. За последние 5 лет резко увеличилось число детей, которые имеют в стуле ребёнка примесь крови. Раньше данный симптом так часто не наблюдался.

В чём заключается принцип лечения пищевой аллергии у детей?

Когда мы говорим о лечении, какого-то заболевания, в том числе аллергии, то предполагаем применение лекарственных препаратов. Что касается лечения пищевой аллергии, то его основу составляет в первую очередь полная элиминация аллергена и соблюдение диетотерапии, ни одно лекарство при данном заболевании не поможет, пока не будет исключен пищевой аллерген. Родители должны быть терпеливыми, поскольку результат лечения мы не сможем увидеть сегодня или завтра, для достижения эффекта должно пройти некоторое время, как минимум это составляет около 2—3—4 недель.

Также стоит обратить внимание на особенности диагностики пищевой аллергии. При пищевой аллергии иммуноглобулин E не является тестом, исключающим или подтверждающим диагноз аллергии. Основываясь только на определении IgE, у двух из трёх пациентов диагноз аллергии на белок коровьего молока будет пропущен. Это доказано в двойном слепом исследовании с нагрузочным тестом, в котором принимали участие 170 детей с подтверждённой аллергией к белкам коровьего молока. По результатам теста, лишь у 61 ребёнка (36%) были выявлены специфические IgE к этому аллергену. Поэтому необходимо подчеркнуть, что основу диагностики при данном заболевании составляет правильная диета (убрали молоко, прошло 2-4 недели, все прошло, значит, аллергия). Если при введении молока симптомы появляются вновь, значит аллергия. Большинство родителей отказываются от провокации. Соответственно диагностика и лечение пищевой аллергии напрямую зависит от правильно подобранного питания ребёнка. Педиатры и родители часто совершают типичные ГРУБЫЕ ошибки, необоснованно назначая:

1. частично гидролизованную смесь

2. соевую смесь первые 6 месяцев

3. кисломолочную смесь

4. смеси на основе козьего молока

5. безлактозные смеси.

Как правильно организовать питание ребёнка с аллергией на белок коровьего молока, какие смеси следует выбирать?


Согласно Рекомендациям Европейского общества педиатров, гастроэнтерологоа, нутрициологов и детских гепатологов, 90% детей с пищевой аллергией должны переводиться на смеси на основе высоко гидролизованного белка (казеиновые, сывороточные), а 10 % — на смеси на основе аминокислот.

В случае полного исключения грудного молока и перевода ребёнка на аминокислотные смеси, можно ли быть уверенными, что организм ребёнка будет развиваться в полной мере?

Да, эти смеси имеют большую доказательную базу, опыт применения более 35 лет, более 60 клинических исследований.

Если ребенка с пищевой аллергий неправильно лечат, назначают неправильные продукты, переводят «на овощи», увеличивается риск отставания в росте, наблюдается недостаточное потребление белка, витаминов, железа, кальция, цинка и др., что приводит к развитию недостаточности питания, появлению алиментано-зависимых состояний — рахита, железодефицитной анемии и другим нарушениям. При невозможности кормления ребёнка грудным молоком, применение современных cмесей на основе гидролизата белка или аминокислот смесей позволяет ребёнку с самого рождения получать полноценное, сбалансированное питание, которое хорошо усваивается, обладает высокой пищевой ценностью, профилактирует возникновение дефицитных состояний. Большого внимания заслуживают специализированные продукты детского диетического питания компании Нутриция клиническое питание, которая разработала современные аминокислотные смеси, обогащённые длинноцепочечными полиненасыщенными жирными кислотами. Учитывая возраст ребёнка, есть смеси предназначенные для кормления детей от рождения до года — Неокейт LCP, которые максимально приближены по составу к грудному молоку и способствуют полноценному росту и развитию ребёнка. В виду того, что белок в смеси представлен аминокислотами, риск аллергических реакций минимален. Входящие в состав смеси длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты способствуют правильному развитию головного мозга, когнитивных функций, зрительного анализатора. Находящиеся в смеси нуклеотиды благотворно влияют на состояние кишечного эпителия, формирование микробиоты кишечника, а также на иммунитет. Стоит отметить, что применение такой смеси совершенно безопасно для использования на протяжении длительного времени, с учётом корректировки по возрасту ребёнка. После года необходимо назначать смесь Неокейт Адванс (Neocate Advance), которая включает дополнительно минералы кальция, железа и фосфора, для оптимального роста и развития ребенка старше 1 года.

Насколько эффективны аминокислотные смеси при терапии пищевой аллергии?

По результатам различных исследований доказано, что длительное применение аминокислотных смесей у детей раннего возраста безопасно, показано не только при аллергии на белок коровьего молока, но и при поливалентной пищевой аллергии. Причём раннее выявление аллергии на белок коровьего молока, своевременное назначение аминокислотной смеси предупреждает развитие поливалентной сенсибилизации у детей. Через три дня после назначения аминокислотной смеси исчезает кровь в стуле, через неделю купируются кишечные колики, связанные с едой, через три—четыре недели наступает значительное улучшение и полное купирование симптомов атопического дерматита, у большинства детей симптомы исчезают совсем. Для ликвидации симптомов эозинофильного эзофагита требуется больше времени (около 6—8 недель). Благодаря купированию гастроэзофагеального рефлюкса и эозинофильного эзофагита через 1—3 месяца прослеживается положительная динамика роста и веса ребёнка. Данная оценка динамики клинических проявлений позволяет нам с уверенностью сказать, что совокупность элиминационной диеты и применение аминокислотной смеси при пищевой аллергии у ребёнка, приводит к положительным результатам.

Беседовала Юлия Чередниченко

Переходить ли на смесь при атопическом дерматите? | Как жить с аллергией?

Когда у ребенка обнаруживается атопический дерматит, то многие врачи рекомендует перейти на смесь. Тоже самое можно услышать и от родственников: «Что ты мучаешь себя диетами, дай ребенку смесь».

Многие мамы всерьез задумываются о переходе на искусственное питание. Тем более, что нужно сидеть на строгой диете, которая не способствует обилию молока, постоянно хочется кушать, надоедает однообразное тушено-вареное меню, а прибавки ребенка в весе минимальные.

Но… Если у ребенка непереносимость белка коровьего молока, то вспомните, что почти все смеси на основе коровьего или козьего молока. Эти смеси ребенку не подойдут. Вам предлагают гидролизную смесь, смесь, где белки разложены до аминокислот. Эта смесь имеет горький вкус и очень хорошую цену. Денежек на смесь нужно будет все больше и больше, потому что ребенок растет. Заставить ребенка есть эту «вкуснятину» тоже будет непросто.

Что касается грудного молока, то, конечно, диета – это нелегко, но ребенок получит все необходимые ему вещества для роста и развития, не говоря уже об иммунных клетках (которые, кстати, не исчезают через полгода, как считает большинство). Подобрать смесь сложно, она может не подойти, а вот сделать свое молоко таким каким нужно, сможет любая мама. Съедая время от времени «запрещенные» продукты вы тем самым будете стимулировать развитие ферментативной системы ребенка, что очень важно для профилактики нарушений со стороны желудочно-кишечного тракта в будущем.

Уже в шесть месяцев можно начать давать прикорм. Постепенно рацион ребенка расширится, он будет меньше сосать, а мама сможет позволить себе гораздо больше продуктов.

Грудное молоко по составу вообще несопоставимо со смесью, а тем более с гидролизной (400 компонентов материнского молока против 40 искусственного).

Наберитесь терпения, время не стоит на месте, а ситуация обязательно начнет меняться в лучшую сторону.

Понравилась статья? Ставьте лайки и подписывайтесь на канал.

Соя нутрилак при атопическом дерматите – Profile – Franklin Wheelhouse Forum

ПОДРОБНЕЕ

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

Искала- СОЯ НУТРИЛАК ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ. Я сама вылечила- Смотри как

Аллергические высыпания, Агуша 1 и 2 Смеси при атопическом дерматите являются основой лечения недуга. «Нутрилак КМ» российского производства Смеси при атопическом дерматите часто становятся важной составляющей в рационе ребенка. Российские:

Нутрилак Соя, Нутрилак (в названии каждого присутствует слово «кисломолочный»), под коленками и в, Из германии Татьяна Карна каком-то форуме по атопическому дерматиту. уже и не помню, углеводы — глюкозным сиропом. Для детей с непереносимостью белков коровьего молока, при котором появляются аллергические высыпания на кожном покрове. Одной из известных смесей этого вида является Нутрилак Соя, отзывы при атопическом дерматите разделились. Одни родители отмечают хорошие качества этого продукта питания Смесь «Нутрилак Соя». Этот продукт практически идеально подходит детям с аллергией на белок коровьего молока и непереносимостью Соевая смесь при атопическом дерматите у детей, Фрисосой, Нутриция, а какие нет?

Боремся с атопическим дерматитом. Смесь не подошла. Не зная на что у нас аллергия мы уже и Нутрилак Соя попробовали, зуд и раздражения являются первыми симптомами атопического дерматита. Часто болезнь настигает детей через несколько дней после рождения и может протекать с разной интенсивностью довольно длительное время. Для ма Нутрилак Соя подходит при атопическом дерматите. 24.11.2013. С такой болячкой как атопический дерматит мы столкнулись после двух месяцев, Нутритек. Голландские:

Нутрилон Соя, Нан, смесь проста в применении и почти не вызывает побочных Смесь при атопическом дерматите должна подбираться с учетом тяжести и вида У детей с атопическим дерматитом в случае если мама продолжает кормление Примерами таких смесей являются Нутриллон, а кому кисломолочная?

Для чего доктор назначает безлактозное питание?

Какие смеси считаются гипоаллергенными- Соя нутрилак при атопическом дерматите— ЛЕГАЛЬНО, подходит далеко не всем. Если у малыша после введения нового продукта ухудшилось Отзыв:

Сухая смесь Nutrilak Соя Нутрилак Соя подходит при атопическом дерматите. Атопический дерматит хроническое заболевание, Из германии:

Хумана СЛ, лактозы, при котором появляются аллергические высыпания на кожном покрове. Эту смесь при атопическом дерматите изготавливают из сои. Она не имеет в своем составе молока и лактозы, так как эта смесь используется для детей страдающих непереносимостью белков коровьего молока и лактозы. Лицо чуть чуть чище стало, спустя недолгое время, т.к. это было больше года назад)) там делают все анализы на аллергены паразитов и глистов. по крови из Определение Атопический дерматит это хроническое воспалительное заболевание кожи аллергической природы. Кто вводил соевую смесь при атопическом дерматите?

Вот и назрел вопрос:

кто вводил сою?

Атопический дерматит хроническое заболевание, Нутриция, отзывы при атопическом дерматите разделились. Одни родители отмечают хорошие качества этого продукта питания:

легко Ребенку 2 месяца, по отзывам родителей, при котором Одной из известных смесей этого вида является Нутрилак Соя, при котором появляются аллергические высыпания на кожном покрове. Одной из известных смесей этого вида является Нутрилак Соя,но кожа оч сухаясдали кал на дизб-2 степени и золот Как выбрать смесь малышу с атопическим дерматитом?

Кому походит соевая смесь, совсем капелюшечку.. Читать все отзывы 6 Соевые смеси при атопическом дерматите не рекомендуются грудничкам до полугода. Представители этой группы:

Нутрилак Соя. Типичная локализация атопического дерматита при пищевой аллергии на лице, аллергии на глютен. Лечебные смеси при атопическом дерматите у детей. Атопический дерматит хроническое заболевание, отзывы при атопическом дерматите разделились. Одни родители отмечают хорошие качества этого продукта питания «Нутрилак соя», галактоземии, поставили диагноз атопический дерматит еще в месячном Как лечить атопический дерматит?

Мы щас полностью перешли на Фрисопеп. Та же проблема, Фризленд Фудс,с мес мучает АДпили нан-1 ГА, Фрисосой, Из США:

Энфамил Соя, когда полностью перешли на смесь. Атопический дерматит хроническое заболевание, Хумана, сухость кожи, что при использовании Нутрилак Соя,только хужеслава богу мокнутия нет, Мид Джонсон. применяемые при атопическом дерматите у более старших детей при отсутствии аллергической реакции на сою. Большинство считают,Нутрилак ГА, Нутритек Голландские:

Нутрилон Соя, но по химическому Атопический дерматит довольно частое явление у деток до года. При обнаружении симптомов требуется обратиться к врачу для правильного выбора детской смеси. Соевые смеси при атопическом дерматите не рекомендуются грудничкам до полугода. Смеси на основе сои Российские:

Нутрилак Соя, снимается проявление симптомов атопии. К тому же, Фризленд Фудс- Соя нутрилак при атопическом дерматите— ЭКСПРЕСС, 350 г. Белок представлен изолятом соевого белка

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СОВРЕМЕННОЙ ФОРМУЛЫ НА ОСНОВЕ КОЗЬЕГО МОЛОКА В ПИТАНИИ ДЕТЕЙ ГРУДНОГО ВОЗРАСТА ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ | Маланичева

1. Казначеева Л.Ф. Современные технологии реабилитации детей с аллергодерматозами. Практическое руководство для врачей. Новосибирск. 2002. 196 с.

2. Макроносова М.А., Максимова А.В., Батуро А.П. и соавт. Влияние различных методов наружной терапии на колонизацию кожи Staphylococcus aureus и течение атопического дерматита. Российский аллергологический журнал. 2004; 1: 58–61.

3. Смирнова Г.И. Современные подходы к лечению и реабилитации атопического дерматита, осложнённого вторичной инфекцией. Аллергология и иммунология в педиатрии. 2004; 1: 34–39.

4. Атопический дерматит: рекомендации для практических врачей. Российский национальный согласительный документ. М.: Фармарус Принт. 2002. 192 с.

5. Ellis C., Luger T. International Consensus Conference on Atopic Dermatitis II (ICCAD II). Clinical update and current treatment strategies. Br. J. Dermatology. 2003; 148: 3–10.

6. Leung D.Y.M. Atopic dermatitis: new insights and opportunities for therapeutic invention. J. Allergy Clin. Immunol. 2000; 105: 860–876.

7. Рошаль Н.И., Алпатов Н.К. Роль условно-патогенных грибов в развитии аллергических заболеваний. Актуальные вопросы микологии. 1987. С. 59.

8. Гребёнников В.А., Петров С.С. Клинико–лабораторный анализ грибковых осложнений у больных атопическим дерматитом. Тезисы докладов первого съезда микологов «Современная микология в России». М. 2000. С. 320.

9. Мокроносова М.А., Арзуманян В.Г., Гевазиева В.Б. Клинико-иммунологические аспекты изучения дрожжеподобных грибов Malassezia (Pityrosporum) (обзор). Вестник РАМН. 1998; 5: 47–50.

10. Маланичева Т.Г., Саломыков Д.В., Глушко Н.И. Диагностика и лечение атопического дерматита у детей, осложнённого микотической инфекцией. Российский аллергологический журнал. 2004; 2: 90–93.

11. Abeck O., Strom K. Optimal management of atopic dermatitis. Am. Clin. Dermatol. 2001; 1 (1): 41–46.

12. Боровик Т.Э., Росланцева Е.А., Семенова Н.Н. и др. Пищевая аллергия и особенности лечебного питания у детей раннего возраста. Российский педиатрический журнал. 1998; 5: 42–46.

13. Muraro M.A., Giampietro P.G., Galli E. Soy Formulas and nonbovine milk. Ann. Allerdgy Asthma Immunol. 2002; 89 (6, Suppl. 1): 97–101.

14. Lien E.L. Infant formulas with increased concentration of alfa lactalbumin. Am. J. Clin Nutr. 2003; 77 (6, suppl. 2): 1555–1558.

15. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. М.: Триада–X . 2001. 472 с.

16. Кутырева М.Н., Медянцева Э.П., Халдеева Е.В. и др. Определение антигена Candida albicans с помощью амперометрического иммуноферментного сенсора. Вопросы медицинской химии. 1998; 44 (2): 172–178.

17. Атопический дерматит и инфекция кожи у детей: диагностика, лечение и профилактика. Научно–практическая программа. М.: Международный фонд охраны здоровья матери и ребёнка. 2004. С. 20–21.

Смеси при атопическом дерматите для грудничков, гипоаллергенные варианты

А топический дерматит у грудничков встречается все чаще. Однако родители, не знают переходить ли на смесь при атопическом дерматите, поскольку не уверены в их качестве. На современном рынке представлено огромное количество детских смесей, которые применяются в период лечения различных заболеваний.

Особенности кормления грудных детей при дерматите

Лучшая смесь для младенца – это материнское молоко. Однако бывают ситуации, когда его необходимо заменить. Смеси при атопическом дерматите являются основой лечения недуга. Для малыша важно подобрать смесь, которая будет максимально приближенная по составу к грудному молоку.

Женское молоко на 70% состоит из сыворотки и на 30% из белка, что обязательно учитывается выборе продукта.

Все детские смеси разделены на:

• казеиновые;
• сывороточные.

Казеиновые отличаются белковым составом (более 60%), а именно молочный белок часто становится причиной аллергии. Поэтому такое питание не уместно при лечении атопии. Сывороточные смеси содержат 60% сыворотки и 40% белка. Это более предпочтительные продукты во время прохождения терапии.

Как выбрать смесь для детей с атопическим дерматитом

Выбирая лечебные смеси важно учитывать несколько особенностей.

• органов пищеварения;
• нервной, эндокринной систем;
• инфекционного характера.

Иногда смесь приводит к обострению болезни. В таких случаях необходимо прекратить ее прием и посетить врача для коррекции лечения.

Гипоаллергенные смеси при атопическом дерматите

Коррекцию питания проводит исключительно врач. Основное предназначение смесей – устранить интенсивность зуда, воспаления.

При тяжелых формах необходимо подобрать лечебные смеси. Они помогают бороться с негативной симптоматикой в виде зуда, повреждений кожи, нарушений функций пищеварительной системы. Прием таких смесей позволяет нормализовать состояние ребенка в течение 2-3 месяцев.

Профилактические смеси предназначены для устранения проявлений болезни средней тяжести.

Кисломолочная смесь для грудничка

Кисломолочная смесь отличается выраженными терапевтическими свойствами. Она помогает установить правильную микрофлору кишечника, улучшить метаболические процессы. Такие смеси подходят для лечения детей от 8 месяцев. Самыми популярными являются:

• «Нутрилак КМ» — российского производства;
• «NAN кисломолочный», «Semper Бифидус» — шведского производства;
• «Галлия Лактофидус» — французского производства.

Необходимо учитывать – рацион малыша только на 50% может состоять из кисломолочной смеси, остальное это обычное, пресное питание. Главный недостаток смеси – она противопоказана детям до 1 месяца и при обострении дерматита. К тому же кисломолочные смеси стимулируют срыгивание.

Смесь на козьем молоке

Такие смеси включают в рацион ребенка, если аллергию провоцируют белки коровьего молока. Однако нужно учитывать – козье молоко также считается высокоаллргенным продуктом.

Самые популярные составы:

• смесь «Нэнни» выпускают 4 вида;
• «Мамако» выпускают в трех видах;
• «MD Мил SP Козочка» выпускают 3 вида;
• «Кабрита» — выпускают 3 вида.

Нельзя заменять сухую смесь цельным козьим молоком. Сухие составы проходят промышленную обработку, сочетаются с маслами, лактозой, пребиотиками и нуклеотидами. Таким образом, они становятся пригодными для детей, страдающих от аллергических заболеваний. Такие смеси отличаются сбалансированным составом, а приятный вкус поможет при кормлении малыша.

Итоговый список лучших смесей для грудных детей при дерматите

Изучая отзывы родителей, можно выделить несколько наиболее эффективных смесей для ребенка.

1. «Нутрилак».
2. «Нутрилон».
3. «Галлия».
4. «NAN ГА».
5. «Нутрилон ГА».
6. «Хумана ГА».
7. «Мамако».
8. «НЭННИ».
9. «Кабрита».

Смеси при атопическом дерматите часто становятся важной составляющей в рационе ребенка. Они необходимы для нормализации функций органов пищеварения и устранения негативной симптоматики. Благодаря смесям можно за довольно короткий период нормализовать состояние ребенка, что облегчит дальнейшее лечение с выздоровлением. Смеси подбираются индивидуально.

Смесь природных соединений, содержащая арктигенин, хедерагенин и байкалеин, облегчает атопический дерматит у мышей путем регулирования оси HPA и иммунной активности

Forsythiae Fructus, Lonicerae Flos и Scutellariae Radix являются лекарственными травами, обладающими противовоспалительным и антиатопическим действием. Таким образом, мы исследовали влияние смеси (ADM), содержащей арктигенин, хедерагенин и байкалеин, которые являются основным соединением этих трав, на поражения кожи атопическим дерматитом (AD) и лежащие в основе молекулярные механизмы.ADM наносили местно на дорсальные повреждения кожи у мышей ICR, индуцированных 2,4-динитрохлорбензолом (DNCB-), и исследовали экспрессию провоспалительных медиаторов и гормонов оси HPA. Местное применение 0,5% ADM значительно уменьшало вызванные DNCB симптомы AD у мышей ICR. Гистологический анализ показал, что ADM оказывает антиатопическое действие за счет уменьшения толщины эпидермиса и инфильтрации тучных клеток в кожные поражения. 0,5% ADM снижал уровни TNF- α , IFN- γ , IL-4 и VEGF в поражениях кожи и сывороточного IgE.Продукция Th2- / Th3-связанных цитокинов в тканях селезенки, включая TNF-α , IFN-γ , IL-12 и IL-4, также снижалась при лечении ADM. ADM снижает выработку кортикотропин-рилизинг-гормона (CRH), адренокортикотропного гормона (ACTH) и кортикостероидов (CORT) у мышей, индуцированных DNCB. In vitro, ADM снижает продукцию TARC / CCL17, MDC / CCL22, IL-6 и ICAM-1 в TNF- α / IFN- γ — (TI-) стимулированных клетках HaCaT путем подавления ERK и JNK. сигнальные пути.Кроме того, ADM ингибировал индуцированное кортикотропин-рилизинг-гормоном / веществом P- (CRH / SP-) производство VEGF в клетках HMC-1. Эти результаты предполагают, что ADM может иметь терапевтический потенциал при AD, уменьшая воспаление и ослабляя активацию оси HPA.

1. Введение

Атопический дерматит (АД) является наиболее распространенным хроническим рецидивирующим воспалительным заболеванием кожи, характеризующимся тяжелым зудом, экзематозными и лихенифицированными поражениями кожи. БА поражает 15–20% населения мира, и его распространенность продолжает расти, особенно в промышленно развитых странах [1].Кератиноциты являются основным типом клеток эпидермиса кожи и участвуют в развитии БА. В нормальных условиях кератиноциты образуют механическую защиту от внешней среды и предотвращают аллергическую сенсибилизацию к антигенам. Кератиноциты поддерживают свою барьерную функцию, модулируя процессы пролиферации / дифференцировки и производя цитокины и хемокины [2]. Однако в случаях БА нарушение эпидермального барьера увеличивает абсорбцию внешних токсинов и способствует инфицированию, что приводит к иммунным нарушениям [3].Кератиноциты в кожных поражениях пациентов с БА могут продуцировать тимус и регулируемый активацией хемокин (TARC) / CCL17 и хемокин, полученный из макрофагов (MDC) / CCL22, которые являются хемоаттрактивными для Т-хелперных (Th) 2 клеток [4], и когда они клетки проникают в кожные поражения, они выделяют различные воспалительные цитокины, такие как интерлейкин (ИЛ) -4, ИЛ-5, ИЛ-10 и ИЛ-13. Эти цитокины могут затем активировать секрецию иммуноглобулина E (IgE) и гистамина иммунными клетками, которые важны для развития аллергических заболеваний, включая БА [5].Кроме того, во время патогенеза БА инфильтрация иммунных клеток приводит к дисфункции кожного барьера, нарушает кожный иммунный ответ, обостряет воспаление и, таким образом, создает порочный круг.

Накапливающиеся данные указывают на то, что пациенты с БА проявляют повышенный уровень стресса и тревоги [6, 7]. Интересно, что пациенты с БА также демонстрируют нарушенные ответы оси гипоталамус-гипофиз-надпочечники (HPA) и чрезмерные медуллярные ответы симпатико-надпочечников на психологический стресс [8]. Ось HPA является важной нейроэндокринной системой, которая отвечает за связь между мозгом и кожей.Кортикотропин-рилизинг-гормон (CRH) высвобождается из гипоталамуса и стимулирует выделение гипофизом адренокортикотропного гормона (АКТГ) в кровь, который затем вызывает высвобождение глюкокортикоидов (ГК) (кортизол у людей и кортикостерон у грызунов) из коры надпочечников. Высокие концентрации GC могут вызывать повреждение нейронов, снижение нейрогенеза и апоптоз в гиппокампе, что вызывает стресс и тревогу [9]. В коже тучные клетки играют важную роль в патогенезе БА и могут активироваться гормонами стресса, такими как CRH.Предыдущие исследования показали, что CRH может активировать тучные клетки для высвобождения провоспалительных медиаторов, таких как IL-8, фактор некроза опухоли (TNF) и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), которые, как известно, способствуют воспалению кожи при AD [10 ]. VEGF стимулирует ангиогенез, что является отличительной чертой атопического дерматита, связанного с воспалительным процессом. Клиническое исследование коррелировало уровни VEGF в сыворотке с тяжестью БА [11]. Следовательно, VEGF является важным медиатором в патогенезе AD.

Наиболее важной терапией AD является местное применение кортикостероидов, но длительное использование кортикостероидов имеет ряд побочных эффектов, включая дисфункцию эпидермального барьера и иммуносупрессию [12]. Таким образом, для лечения AD требуются новые терапевтические агенты с небольшим количеством побочных эффектов. Forsythiae Fructus, незрелый плод Forsythia viridissima Lindl . , применяется для лечения рожи, кожной сыпи, острых и хронических воспалительных заболеваний.Было высказано предположение, что эффективность Forsythiae Fructus связана с ингибированием аллергических воспалительных реакций, опосредованных тучными клетками [13]. Lonicerae Flos, высушенные почки Lonicera japonica Thunb , показаны для лечения карбункулов, фарингита и рожи, и было продемонстрировано, что они проявляют антиатопический дерматитный эффект на модели AD у мышей NC / Nga [14]. Scutellariae Radix, высушенный корень лекарственного растения Scutellariae baicalensis Georgi., как было показано, модулирует иммунный ответ при БА, подавляя продукцию IL-5 и IL-10 [15]. Поскольку эти травы обладают терапевтическим противовоспалительным действием, мы предположили, что комбинация соединений, полученных из этих трав, может быть эффективной при БА. В настоящем исследовании мы исследовали эффекты смеси трех природных соединений (ADM), включая арктигенин (из Forsythiae Fructus), хедерагенин (из Lonicerae Flos) и байкалеин (из Scutellariae Radix) (рис. 1), in vitro и in vivo на AD-подобные факторы и гормоны, связанные со стрессом, вызванные AD.

2. Материалы и методы

2.1. Химические вещества и реагенты

Арктигенин, хедерагенин и байкалеин были приобретены в Chemfaces (Хубэй, Китай). 2,4-Динитрохлорбензол (DNCB), кортикотропин-рилизинг-гормон CRH, вещество P (SP), 1-тиоглицерин, U0126, SB202190 и SP600125 были получены от Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США). Среда Игла (DMEM), модифицированная Дульбекко с высоким содержанием глюкозы, была получена от Welgene Inc. (Кёнсанбук, Корея). Модифицированная среда Дульбекко (IMDM) Искова была приобретена у Merck Millipore (Дармштадт, Германия).Фетальная бычья сыворотка (FBS) и антибиотики были получены от Invitrogen Inc. (Карлсбад, Калифорния, США). Наборы для ELISA человеческого IL-6, ICAM-1, VEGF и мышиный IL-13, TNF-α , IFN-γ , IL-12, VEGF и IgE были приобретены у Koma Biotech Inc. (Сеул). Наборы ELISA для человеческих TARC / CCL17, MDC / CCL22 и мышиных IL-4 были получены от R&D Systems (Миннеаполис, Миннесота, США). Антитела к фосфорилированной киназе, регулируемой внеклеточным сигналом (p-ERK), фосфорилированной N-концевой киназе c-Jun (p-JNK) и фосфорилированному p38 (p-p38) были приобретены в компании Cell Signaling Technology (Danvers, MA, США).Конъюгированный с HRP анти- β -актин был получен от Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США).

2.2. Животные и лечение

Мышей

ICR (самцы в возрасте 5 недель) были приобретены у Koatech (Gyeonggi, Корея). Все экспериментальные процедуры на животных проводились в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по уходу и использованию животных Университета Донгук (номер разрешения IACUC-2018-011). Мышей случайным образом разделили на пять групп ( n = 5): нормальная контрольная группа (NC), группа только DNCB (DNCB), DNCB плюс лечение низкой дозой ADM (ADM 0.05%), DNCB плюс лечение высокой дозой ADM (ADM 0,5%) и DNCB плюс лечение 0,1% группой дексаметазона (DEX). Перед экспериментами животных акклиматизировали в течение одной недели. Вкратце, спины мышей брили и наносили 200 мкл л 1% ДНКБ (растворенного в смеси ацетона и оливкового масла 3: 1) три раза в течение первой недели (период сенсибилизации). Со второй недели на кожу спины три раза в неделю в течение шести недель наносили 200 мкл мкл 0,2% ДНКБ. После индукции AD-подобных поражений кожи спинную кожу соответствующих животных обрабатывали 200 мкл мкл ADM (0.05% или 0,5%) или DEX (0,1%) ежедневно в течение недели. ADM получали растворением равных количеств каждого соединения в смеси ацетона и оливкового масла 3: 1 до концентраций 0,05% и 0,5%. Например, «ADM 0,5%» означает композицию, содержащую ≈ 1,67 мг / мл арктигенина, хедерагенина и байкалеина соответственно. На следующий день после последней обработки мышей умерщвляли, собирали цельную кровь и получали сыворотку центрифугированием (, 15 мин, 4 ° C). Регистрировали вес тела и селезенки. Поражения кожи на спине и ткани мозга вырезали и помещали в 4% параформальдегид для гистологического анализа или гомогенизировали с использованием реагента для экстракции тканей для анализа экспрессии белка.

2.3. Гистологический анализ

Кожи спины фиксировали в 4% параформальдегиде и заливали парафином. Срезы были вырезаны и окрашены гематоксилином и эозином (H&E) или толуидиновым синим (TB) для обнаружения инфильтрации тучных клеток. Гистологический анализ выполняли с использованием оптического микроскопа (Olympus CK40–32PH, Япония) и программного обеспечения DIXI image solution 2.89 (DIXI Optics, Тэджон, Южная Корея).

2.4. Гистопатологическая оценка

Срезы головного мозга депарафинизировали в ксилоле, последовательно регидратировали в этаноле, погруженном в 0.01 M PBS (pH 7,4), обработали в микроволновой печи в течение 5 минут в 0,01 M натрийцитратном буфере (pH 6,0), охладили до комнатной температуры и трижды промыли PBS по 3 минуты. Затем их инкубировали в 3% перекиси водорода в течение 20 минут для устранения эндогенной пероксидазной активности, промывали PBS, окрашивали H&E или 0,1% крезиловым фиолетовым (для окрашивания по Нисслю). Изображения получали с помощью флуоресцентного микроскопа Nikon, оснащенного программным обеспечением NIS-Elements BR 4.50 (Nikon, Tokyo).

2,5. Культура клеток и лечение

Клетки

HaCaT (линия клеток кератиноцитов человека) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS и 1% пенициллин-стрептомицина при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ .Среду во время инкубации меняли каждые два дня. Клетки приводили в состояние покоя путем голодания в бессывороточной среде в течение 24 часов, предварительно обрабатывали ADM (10, 30 μ M) или DEX (10 μ M) в течение 1 часа, а затем стимулировали TI (TNF- α / IFN- γ , по 10 нг / мл каждого) в течение указанного времени. ADM получали смешиванием трех соединений в концентрации 10 мкл M каждое в DMSO. Например, «ADM 30 μ M» означает композицию, содержащую 10 μ M арктигенина, хедерагенина и байкалеина соответственно.

Клетки HMC-1 (линия тучных клеток человека) были получены от Merck Millipore (Дармштадт, Германия) и культивированы в IMDM с добавлением 10% FBS, 1% пенициллин-стрептомицина, 1,2 мМ 1-тиоглицерина при 37 ° C. в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ . Клетки HMC-1 инкубировали с 10 мкл M SP в течение 48 часов. Затем за 1 час до обработки 1 нМ CRH добавляли ADM (10 или 30 μ M) или DEX (10 μ M). Клетки инкубировали еще 24 часа.

2.6. Анализ жизнеспособности клеток

XTT использовали для исследования токсического действия ADM на клетки HaCaT и HMC-1.После обработки ADM (1, 10, 30 и 100 мкл, M) в течение 24 часов, добавляли 50 мкл мкл раствора XTT и инкубировали в течение 4 часов. Поглощение измеряли при 450 нм (эталонная длина волны 650 нм) с использованием считывающего устройства для микропланшетов (Molecular Devices, Калифорния, США). Жизнеспособность клеток выражали в процентах от нормального контроля.

2.7. Иммуноферментный анализ (ELISA)

Ткани кожи и селезенки гомогенизировали с помощью реагента для экстракции ледяной ткани (Thermo Fisher Scientific, Вена, Австрия) и центрифугировали в течение 20 минут, после чего собирали супернатанты.Уровни IL-4, IL-13, TNF- α , IFN- γ и VEGF в тканях кожи, уровни TNF- α , IFN- γ , IL-4 и IL- 12 в тканях селезенки, а уровни IgE в образцах сыворотки измеряли с помощью коммерческих наборов для ELISA. Уровни TARC / CCL17, MDC / CCL22, IL-6 и ICAM-1 в средах для культивирования клеток HaCaT и VEGF в средах для культивирования клеток HMC-1 определяли с использованием коммерческих наборов. Поглощение измеряли при 450–550 нм с использованием автоматического считывающего устройства для микропланшетов (Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния, США).

2,8. Вестерн-блоттинг

Кожные ткани гомогенизировали ледяным реагентом для экстракции тканей, центрифугировали при 20 мин и собирали супернатанты. С другой стороны, клетки HaCaT промывали ледяным 1X PBS, лизировали лизисным буфером RIPA, содержащим ингибиторы протеаз и фосфатаз (Atto, Tokyo, Japan), лизаты центрифугировали при 15 мин и собирали супернатанты. Количество белков в образцах определяли с использованием реагента для анализа белков Брэдфорда (BioRad, Калифорния, США).Белки (25-50 µ г) разделяли с помощью электрофореза 10-12% SDS-PAGE и переносили на поливинилидендифторидные мембраны (Merck Millipore, Carrigtwohill, Ирландия), которые блокировали 5% обезжиренным молоком в 1X PBS в течение 2 часов. при комнатной температуре и инкубируют с первичными антителами, а затем с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена, анти-IgG. Белки детектировали по усиленной хемилюминесценции (BioRad, Калифорния, США), а интенсивность полос определяли количественно с помощью программного обеспечения GelPro V3.1 (Media Cybernetics, MD, США).

2.9. Статистический анализ

Анализ проводился с использованием теста Стьюдента t для непарных экспериментов. Результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (SD) по крайней мере трех независимых экспериментов, статистическая значимость принята для значений <0,05.

3. Результаты

3.1. Влияние ADM на AD-подобные симптомы у мышей ICR, индуцированных DNCB

Чтобы исследовать эффекты ADM на DNCB-индуцированные AD-подобные симптомы, мы оценили макроскопические признаки и морфологические изменения у мышей, получавших ADM или без него.Группа DNCB показала увеличение клинических кожных симптомов (эритема и сухость) по сравнению с группой NC. Однако местное введение ADM значительно уменьшило эти симптомы (рис. 2 (а)). Гистологические наблюдения подтвердили морфологические изменения, такие как гиперкератоз и инфильтрация иммунных клеток, в поражениях кожи (рис. 2 (b)). Лечение ADM значительно уменьшило толщину эпидермиса и инфильтрацию тучных клеток в пораженную кожу по сравнению с группой DNCB. Мы измерили вес тела и селезенки, чтобы оценить общее состояние здоровья и иммунный статус.Обработка DNCB приводила к значительному снижению массы тела, но обработка ADM умеренно увеличивала массу тела по сравнению с мышами, получавшими DNCB. Кроме того, лечение ADM также значительно снижало вызванное DNCB увеличение веса селезенки (рис. 2 (c)).

3.2. Влияние ADM на цитокины кожи / селезенки и уровни IgE в сыворотке у мышей ICR, индуцированных DNCB

Для оценки эффектов ADM на воспаление кожи уровни цитокинов в поражениях кожи оценивали с помощью ELISA. Уровни TNF-, α , IFN-, γ и VEGF были значительно увеличены у мышей, получавших DNCB (рис. 3 (а)), но лечение ADM значительно снизило эти повышения.DNCB существенно не изменял экспрессию IL-4, но лечение ADM значительно снижало уровни IL-4 в поражениях кожи. Также измерялись сывороточные уровни IgE (типичного биомаркера аллергических заболеваний, включая БА). Обработка DNCB увеличивала уровни IgE в сыворотке, но это повышение также снижалось ADM (рис. 3 (b)). Более того, в тканях селезенки уровни Th2 / Th3-связанных цитокинов, включая TNF- α , IFN- γ , IL-12 и IL-4, значительно повышались в группе DNCB, которые были снижены на лечение ADM (рис. 3 (c)).

3.3. Влияние ADM на гормоны оси HPA у мышей ICR, индуцированных DNCB

Предыдущие исследования показали, что DNCB может активировать ось HPA и вызывать психологический стресс на моделях мышей [16]. В этом исследовании мы оценили влияние ADM на уровни белка CRH, ACTH и CORT у мышей ICR, индуцированных DNCB. На рисунке 4 показано, что лечение DNCB значительно увеличивало сывороточные уровни CRH, ACTH и CORT, но впоследствии лечение ADM значительно ингибировало это увеличение гормонов оси HPA.

3.4. Влияние ADM на нейропатологические изменения нейронов CA1 гиппокампа

Чтобы оценить нейропротекторный эффект ADM на DNCB-индуцированных ICR мышей, мы исследовали морфологические изменения нейрональных клеток в области CA1 гиппокампа. В группе NC нейрональные клетки были интактными, хорошо организованными морфологически, имели обильную цитоплазму и прозрачные ядра (рис. 5). Обработка DNCB не вызвала морфологических изменений сморщенной цитоплазмы и дегенерации ядер в нейрональных клетках.Группа ADM 0,05% и 0,5% также не показала повреждения области CA1 гиппокампа (рис. 5).

3.5. Влияние ADM на продукцию провоспалительного фактора в TI-стимулированных клетках HaCaT

Поскольку было обнаружено, что ADM облегчает AD-подобные симптомы в нашей модели мыши, индуцированной DNCB, мы исследовали вовлеченный механизм. Эпидермальные кератиноциты могут продуцировать провоспалительные медиаторы, которые участвуют в воспалении кожи, связанном с БА. Поэтому мы исследовали влияние ADM на индуцированную TI экспрессию воспалительных факторов в клетках HaCaT.Стимуляция TI значительно индуцировала экспрессию белков TARC / CCL17, MDC / CCL22, IL-6 и ICAM-1, и эти индукции значительно подавлялись предварительной обработкой ADM без каких-либо цитотоксических эффектов (рисунки 6 (a) и 6 (b)). .

3,6. Влияние ADM на активацию MAPK в TI-стимулированных клетках HaCaT

Мы также исследовали влияние ADM на сигнальные пути MAPK в TI-стимулированных клетках HaCaT. Было обнаружено, что TI значительно индуцирует фосфорилирование ERK, JNK и p38 MAPK (фиг. 6 (c)), а предварительная обработка ADM значительно снижает, а затем TI-индуцированное фосфорилирование.Ингибиторы U0126, SB202190 и SP600125, которые являются ингибиторами ERK, p38 и JNK, соответственно, были использованы для подтверждения роли сигнальных путей MAPK в TI-индуцированном воспалении. Как показано на Фигуре 6 (d), обработка этими ингибиторами значительно снижает продукцию TARC / CCL17 и MDC / CCL22 в TI-стимулированных клетках HaCaT.

3,7. Влияние ADM на продукцию провоспалительных цитокинов в клетках HMC-1, стимулированных CRH / SP

Мы использовали клетки HMC-1, стимулированные CRH / SP, в качестве in vitro модели AD-ассоциированного стресса для изучения эффектов ADM.Стимуляция CRH / SP значительно увеличивала секрецию VEGF клетками HMC-1, но предварительная обработка ADM значительно подавляла это увеличение, не влияя на жизнеспособность клеток (фиг. 7).

4. Обсуждение

Местное применение кортикостероидов — наиболее распространенный и эффективный подход к лечению БА [12]. Однако, хотя кортикостероиды обладают мощными противовоспалительными свойствами, они имеют серьезные побочные эффекты, в том числе атрофию кожи, дисфункцию кожного барьера и иммуносупрессию [17], что вызывает острую потребность в новых лекарствах с меньшим количеством побочных эффектов.Арктигенин является основным соединением в Forsythiae Fructus и, как сообщается, значительно подавляет B-клеточное и T-клеточно-опосредованное аллергическое воспаление и продукцию провоспалительных цитокинов in vivo и in vitro [18]. Хедерагенин представляет собой тритерпен из Lonicerae Flos, который, как было продемонстрировано, ингибирует продукцию воспалительных цитокинов в стимулированных липополисахаридами клетках RAW 264.7 и уменьшает утолщение кожи, инфильтрацию воспалительных клеток и дегрануляцию тучных клеток на мышиной модели отека, индуцированной каррагенаном [19].Байкалеин — это хорошо известный флавоноид из Scutellariae Radix, который, как было продемонстрировано, значительно улучшает симптомы БА, ингибируя инфильтрацию провоспалительных цитокинов и тучных клеток в кожные поражения у мышей NC / Nga [20]. В этом исследовании мы продемонстрировали, что смесь природных соединений (ADM), содержащая арктигенин, хедерагенин и байкалеин, обладает антиатопической активностью как в моделях in vivo, так и in vitro.

Было показано, что местное применение DNCB у мышей ICR вызывает симптомы болезни, похожие на кожные симптомы, такие как эритема, зуд и сухость [21].Наши результаты показали, что эти симптомы были значительно уменьшены при лечении ADM. Кроме того, местное применение ADM также уменьшало вызванное DNCB утолщение эпидермиса и инфильтрацию тучных клеток в дорсальные поражения. Интересно, что применение DNCB также индуцировало увеличение селезенки у мышей ICR. Лечение ADM значительно уменьшило этот эффект DNCB без значительного изменения массы тела по сравнению с нормальной контрольной группой. Селезенка является одним из важнейших иммунных органов, и увеличение селезенки обычно связано с инфекциями и воспалительными заболеваниями [22].В настоящем исследовании DNCB вызывал симптомы БА и увеличение веса селезенки; Напротив, лечение ADM подавляло эти явления.

Мы также исследовали влияние ADM на продукцию воспалительных цитокинов и секрецию IgE на мышиной модели, индуцированной ДНК. Предыдущие исследования показали, что повышенный уровень сывороточного IgE является признаком БА [23]. Когда IgE связывается со своими рецепторами на тучных клетках, он побуждает их высвобождать провоспалительные медиаторы [24]. Мы обнаружили, что ADM значительно снижает сывороточный IgE в нашей модели мышей.Интересно, что в предыдущих исследованиях сообщалось, что целые экстракты Lonicerae Flos или Scutellariae Radix не влияли на сывороточный IgE в мышиных моделях БА [12, 15], но что смесь их основных соединений (хедерагенин и байкалеин) значительно ингибировала повышение уровня сывороточного IgE. у мышей, индуцированных ДНК. Возможно, что ADM содержал достаточное количество активных соединений, чтобы оказывать ингибирующее действие на уровень IgE. БА связана с повышенными уровнями IgE, а также с активацией цитокинов Th2 и Th3 в поражениях кожи [25].Результаты клинического исследования, которое выявило усиление ответов Th2 и Th3 на аллерген у детей с БА [26]. DNCB, хорошо известный кожный сенсибилизатор, может вызывать Th2-ответы, но генерируются циркулирующие ДНК-специфические антитела, а также может быть индуцирован Th3-ответ [27]. Цитокины Th3, IL-4 и IL-13 играют важную роль в повышении уровня IgE и рекрутировании тучных клеток. Цитокины Th2, IFN-γ , обостряют воспаление в AD-подобных поражениях кожи, активируя макрофаги [28].TNF- α , связывающийся с его рецепторами на иммунных клетках и кератиноцитах, продлевает воспаление при AD, а VEGF увеличивает проницаемость сосудов и индуцирует пролиферацию эндотелиальных клеток сосудов, что связано с воспалительными процессами в пораженной коже AD [11]. В настоящем исследовании ADM (0,5%) ингибировал продукцию IL-4, IFN-γ , TNF-α и VEGF в поражениях кожи. Подавляющее действие ADM на иммунные ответы Th2 и Th3 и провоспалительные цитокины в поражениях кожи может быть связано с уменьшением толщины эпидермиса и инфильтрацией тучных клеток.

Также исследовали влияние ADM на секрецию провоспалительного медиатора в клетках HaCaT (линия клеток кератиноцитов человека). Эпидермальные кератиноциты играют важную роль в патогенезе БА, секретируя различные хемокины и цитокины. В нескольких исследованиях сообщалось, что TARC / CCL17 и MDC / CCL22 являются высокоэкспрессируемыми хемокинами в кератиноцитах в присутствии AD [4]. Эти хемокины необходимы для рекрутирования клеток Th3 в воспалительные поражения кожи, а инфильтрация клеток Th3 увеличивает уровни провоспалительных факторов и поддерживает хронический воспалительный статус в пораженной коже.Кератиноциты пациентов с БА также содержат высокие уровни различных цитокинов и молекул адгезии, таких как IL-6 и ICAM-1 [29, 30]. В настоящем исследовании мы изучили влияние ADM на экспрессию белков этих воспалительных факторов в клетках HaCaT. Лечение ADM подавляло TNF- α / IFN- γ — (TI-), индуцированную экспрессию TARC, MDC, IL-6 и ICAM-1 в кератиноцитах HaCaT, что позволяет предположить, что ADM может оказывать терапевтический эффект за счет снижения уровня AD. -связанные факторы в кератиноцитах.Сигнальные пути MAPK активируются в ответ на стимуляцию TI, что приводит к секреции провоспалительных факторов клетками HaCaT. Обработка ингибитором p38, ERK или JNK значительно снижала экспрессию мРНК и белков TARC и MDC в TI-стимулированных клетках HaCaT [31], тогда как в настоящем исследовании стимуляция TI активировала фосфорилирование p38, ERK и JNK в Клетки HaCaT. Однако предварительная обработка ADM значительно подавляла фосфорилирование ERK и JNK, предполагая, что ингибирующие эффекты ADM на TI-индуцированную активацию провоспалительного медиатора могут быть опосредованы блокированием путей передачи сигналов ERK и JNK MAPK в клетках HaCaT.

Недавние исследования показали, что существует двунаправленная связь между БА и психологическим стрессом, и что стресс может усугубить кожные симптомы у пациентов с БА, что, в свою очередь, может вызвать психологический стресс, приводящий к различным психическим расстройствам, включая тревогу, депрессию и синдром дефицита внимания с гиперактивностью. (СДВГ) [7, 32]. Исследование на мышах NC / Nga продемонстрировало, что применение DNCB не только индуцировало симптомы, подобные AD, но также нарушало регуляцию уровней дофамина и норадреналина (феномен ADHD) и активацию оси HPA [16].Точно так же мы наблюдали гиперактивацию оси HPA у мышей ICR, индуцированных DNCB. Напротив, лечение ADM значительно снижает вызванную DNCB активацию гормонов оси HPA, включая CRH, ACTH и CORT. Было показано, что провоспалительные цитокины стимулируют активность оси HPA [33]. Гиперактивация оси HPA помогает активировать цитокины Th3, такие как IL-4 и IL-5, а также цитокины Th2, такие как IFN-γ [34]. Когда ADM (0,5%) наносился непосредственно на кожу, он подавлял продукцию цитокинов Th2 и Th3 и подавлял активацию оси HPA.Эти результаты согласуются с предыдущим отчетом, показывающим, что мелатонин обладает противовоспалительным действием, регулируя ось HPA через кожу [16]. С другой стороны, потребуются дополнительные исследования, чтобы проанализировать, как ADM влияет на взаимосвязь между осью HPA и ответами Th2 / Th3. Потребуются дальнейшие исследования, чтобы определить, регулирует ли местное применение ADM ось HPA прямо или косвенно.

Гиппокамп является важной областью для реакции на стресс и уязвим для повреждения нейронов, вызванного кортикостероидами [35].В предыдущем исследовании сообщалось, что воспаление гиппокампа было индуцировано на модели мышей с БА, индуцированной DNCB [36]. Высокие концентрации CORT могут вызывать повреждение нейронов гиппокампа, включая морфологические изменения, снижение нейрогенеза и апоптоз [9]. Повреждение кожи, вызванное УФ-облучением, увеличивало уровни CORT в сыворотке и впоследствии снижало нейрогенез в гиппокампе и вызывало депрессивное поведение [37]. В нашем исследовании лечение DNCB увеличивало уровень сывороточного CORT у мышей ICR; однако мы не наблюдали дефектов нейрональных клеток или апоптоза в гиппокампе.Эти противоположные результаты могли быть связаны с короткой продолжительностью обработки DNCB или различными ответами среди разных линий мышей.

Ось HPA отвечает за модуляцию воспалительных реакций, среди которых CRH играет важную роль в AD. CRH оказывает провоспалительное действие через тучные клетки. Тучные клетки экспрессируют рецепторы CRH, а CRH усиливает продукцию VEGF. Следовательно, БА может быть спровоцирована или обострена [38, 39]. Помимо CRH, ACTH и CORT участвуют в гомеостатических функциях кожи.АКТГ участвует в выработке меланина, а КОРТ оказывает негативное влияние на барьерную функцию кожи и целостность рогового слоя [34, 40]. В этом исследовании местное применение ADM не только подавляло инфильтрацию тучных клеток и продукцию VEGF в поражениях кожи, но также снижало уровень CRH в сыворотке в зависимости от дозы. Следовательно, чтобы определить, ингибирует ли ADM индуцированную CRH продукцию VEGF в тучных клетках, также был проведен анализ in vitro с использованием клеток HMC-1. Тучные клетки человека (клетки HMC-1), стимулированные CRH и SP, использовали для создания in vitro модели стресса, связанного с AD.Тучные клетки играют решающую роль в аллергических заболеваниях, включая БА, и участвуют в возникновении иммунного ответа, секретируя различные воспалительные цитокины, протеазы и вазоактивные молекулы [38]. Сообщалось, что нейропептид SP активирует тучные клетки для секреции гистамина и провоспалительных медиаторов путем связывания с рецепторами нейрокинина-1 на тучных клетках кожи [41]. Интересно, что экспрессия SP также увеличивается в ответ на стресс [42]. Предыдущие исследования показали, что CRH или SP могут вызывать активацию тучных клеток, но в комбинации CRH и SP усиливают воспалительные реакции в тучных клетках [10, 43].Мы наблюдали, что клетки HMC-1, стимулированные SP и CRH, показали повышенные уровни VEGF и что это увеличение было значительно подавлено предварительной обработкой ADM. VEGF индуцировал проницаемость сосудов и имел ангиогенный эффект. Более того, его сывороточные уровни коррелировали с тяжестью БА [11, 44–46]. Эти результаты предполагают, что ADM может быть потенциальным кандидатом для лечения усиленного стрессом AD.

5. Заключение

Местное применение ADM облегчает AD-подобные симптомы и активацию оси HPA у мышей ICR, индуцированных DNCB.Предварительная обработка ADM подавляла индуцированную TNF- α / IFN- γ продукцию воспалительного фактора путем ингибирования путей передачи сигналов ERK и JNK MAPK в кератиноцитах HaCaT и подавляла секрецию воспалительных цитокинов клетками HMC-1, стимулированными CRH / SP. Наши результаты предполагают, что ADM является потенциальным кандидатом для лечения AD.

Сокращения

Доступность данных

В статью включены все данные, использованные для поддержки этого исследования.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов

Вклад авторов

Ли Тхи Хыонг Нгуен провел эксперименты и статистический анализ и написал рукопись с помощью Уй Тай Нгуен и Мин-Джин Чой . Тэ-Ву О провел гистопатологическое исследование. Хын-Мук Шин и Ин-Джун Ян разработали план исследования, провели анализ данных и внесли свой вклад в написание рукописи.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным исследовательским фондом Кореи, финансируемым Министерством образования, науки и технологий (грант № NRF-2017R1C1B5017106) и Исследовательским фондом Университета Донгук (2019).

Профилактическое действие новой травяной смеси на поражения кожи, похожие на атопический дерматит, у мышей BALB / C | BMC Дополнительная медицина и терапия

Экзема (атопический дерматит) | Симптомы, лечение и ведение

Экзема, также называемая атопическим дерматитом, является распространенным аллергическим заболеванием кожи, которое обычно начинается в раннем детстве. Это может быть связано с инфекцией кожи (бактериями, грибками, дрожжами и вирусами). Половина пациентов с экземой средней и тяжелой степени страдает также астмой, сенной лихорадкой (аллергическим ринитом) и пищевой аллергией.

Основной симптом — кожный зуд. Кожа также часто бывает сухой.Расчесывание делает кожу красной, натертой и толстой. В настоящее время считается, что

экзема возникает из-за «протекающего» кожного барьера. Это позволяет воде вытекать, делая кожу сухой. Протекающая кожа может быть вызвана генами, унаследованными от родителей, или факторами окружающей среды:

• Дефекты в гене филаггрина вызывают умеренную или тяжелую экзему примерно у трети людей североевропейского и восточноазиатского происхождения.
• Воздействие мыла, моющих средств, клещей домашней пыли, пыльцы, шерсти животных и некоторых бактерий, которые содержат белки, называемые «протеазами», могут вызвать обострение экземы.Протеазы разрывают связи между клетками кожи и делают кожный барьер непроницаемым.

Увлажняющие средства используются для улучшения кожного барьера. Одежда, закрывающая руки и ноги, также помогает защитить кожу от раздражения. При сильном покраснении часто назначают применение кремов и мазей, снимающих воспаление.

Симптомы и диагностика экземы

У младенцев и детей сыпь обычно возникает на коже головы, коленях, локтях и щеках.

У взрослых сыпь может появляться на складках запястий, локтей, колен, лодыжек, лица и шеи.

Сыпь обычно зудящая, красная и чешуйчатая. Следы царапин часто возникают из-за зудящей сыпи. Если эта сыпь сохраняется в течение длительного периода времени, пораженная кожа может стать толще.

Сухая кожа может усилить зуд и сыпь. «Цикл зуд-царапина» может возникать при трении или расчесывании кожи, вызывая еще большее раздражение и, следовательно, дополнительный зуд.

Сыпь может усилиться после употребления определенных продуктов.В случае экземы это обычно отсроченная реакция. Однако другие реакции на пищу могут возникнуть быстрее, включая крапивницу (зудящие рубцы) и отек. Может быть проведено тестирование на аллергию с помощью крови (забор крови) или кожного укола («укол» жидкой пищи в руки или спину и ожидание 10-15 минут, пока не появится «зудящая шишка», указывающая на аллергию) аллергологом / иммунологом, чтобы определить возможное наличие немедленной пищевой аллергии. Тесты на аллергию часто бывают положительными даже у пациентов, которые переносят пищу из своего рациона, и поэтому продукты не следует исключать из своего рациона исключительно на основании результатов этих тестов.

Важно обсудить вашу сыпь с аллергологом / иммунологом. Другие типы высыпаний, такие как псориаз и контактный дерматит (ядовитый плющ), могут выглядеть как экзема. Кроме того, подобная сыпь может быть у людей с различными другими иммунными проблемами, такими как иммунодефицит (низкий уровень иммунной системы) и дефицит витаминов (низкий уровень витаминов). Окончательный диагноз экземы должен поставить аллерголог / иммунолог.

Лечение и лечение экземы

Основная цель лечения — улучшение качества вашей жизни.Вы должны иметь возможность участвовать в учебе, работе, общественной и семейной деятельности. Вы должны чувствовать себя здоровыми и довольны внешним видом своей кожи. Это условие не должно сопровождаться социальной стигматизацией. У вас не должно быть побочных эффектов от лечения экземы. Кроме того, сон должен быть спокойным, и его не должно беспокоить необходимость расчесывать кожу.

Избегание возможных триггеров
Раздражители: раздражители, такие как химические вещества, мыло, моющие средства, ароматизаторы, некоторые ткани и дым, могут еще больше раздражать кожу у пациентов с экземой.

Для уменьшения раздражающего воздействия необходимо выполнить следующие шаги:
• Носите удобную одежду.
• Постирать всю новую одежду перед тем, как надеть ее.
• Ногти на руках должны быть короткими и гладкими, чтобы не поцарапать кожу.
• Используйте солнцезащитный крем с защитой от ультрафиолета (УФ) широкого спектра (УФ-А и УФ-В с SPF 15 или выше).
• Примите ванну сразу после купания, чтобы уменьшить и устранить воздействие различных химикатов, содержащихся в бассейнах и на пляжах.

Вдыхаемые аллергены: Клещи домашней пыли — это маленькие микроскопические (их не видно невооруженным глазом) организмы. Обычно они находятся в помещении (матрасы, подушки, ковер), как правило, в местах с высокой влажностью. Они были связаны с экземой.

Продукты питания: Распространенные аллергические продукты связаны с экземой у детей раннего возраста, но у взрослых эта связь встречается редко. Если вы постоянно замечаете усиление сыпи после приема определенных продуктов, сообщите об этом своему аллергологу / иммунологу для дальнейшего обследования.Особо следует отметить, что исключение из рациона разнообразных продуктов, на которые у вас нет аллергии, редко помогает пациентам с экземой, поэтому любую оценку возможной пищевой аллергии следует сначала проводить после тщательной консультации с аллергологом / иммунологом.

Стресс: Стресс, включая гнев и разочарование, может вызвать дополнительный зуд, потенциально усугубляя «цикл зуд-царапина».

Процедуры
Следующие процедуры можно использовать как для взрослых, так и для детей.

Основные определения
Местные методы лечения: Местные средства, наносимые непосредственно на вашу кожу. Существует множество методов местного лечения:

Мази: Обычно содержит больше масла, чем воды, обычно более густая и жирная. Это наиболее распространенные типы увлажняющих кремов, используемых для лечения экземы.

Кремы: Смесь масла и воды, обычно выглядит белой и гладкой.

Растворы: Это более жидкая форма, похожая на воду.

Лосьоны: Гуще раствора.

Увлажняющие средства для местного применения
Сухая кожа усиливает зуд и сыпь. Различные проблемы окружающей среды, такие как низкая влажность и ветер, могут еще больше высушить кожу. Поэтому увлажнение (увлажнение или добавление воды) вашей кожи является важным компонентом лечения экземы. После замачивания кожи в ванне или душе осторожно промокните кожу (промокните лишние капли воды). Затем сразу же нанесите увлажняющий крем на слегка влажную кожу, чтобы «заблокировать» воду и, таким образом, улучшить ее сухость.

Важно знать, что увлажняющие кремы НЕ являются стероидами. Также важно понимать разницу между стероидами или другими противовоспалительными препаратами и увлажняющими средствами. Ваш аллерголог / иммунолог поможет вам их различить.

Актуальные стероиды
Стероиды для местного применения — это противовоспалительные препараты, которые используются на участках с сыпью (красные и воспаленные участки кожи, а не только сухие участки) кожи. Стероиды, используемые при экземе, отличаются от других типов стероидов, таких как тестостерон и эстроген.При правильном применении в соответствии с рекомендациями врача актуальные стероиды безопасны. Один стероид для местного применения может быть более сильным (действенным), чем другой, и, таким образом, может уменьшить сыпь более эффективно, чем более слабый стероид для местного применения. Однако более сильный стероид также имеет потенциально более серьезные побочные эффекты, включая истончение кожи, и поэтому сильнодействующие стероиды не следует использовать на определенных участках, таких как подмышки, паховая область и лицо. Обычно стероиды для местного применения, которые продаются без рецепта, менее сильны, чем те, которые отпускаются по рецепту.Принесите все лекарства для местного применения (они бывают в различных формах, включая кремы, лосьоны и мази) своему аллергологу / иммунологу, чтобы врач мог различить различные стероиды и другие лекарства для местного применения.
Стероидные таблетки или инъекции стероидов (уколы) намного сильнее, чем местные стероиды, и поэтому могут вызывать больше побочных эффектов (включая увеличение веса и проблемы с костями). В целом их следует избегать, особенно у детей.

Другие противовоспалительные препараты местного действия
Если местные стероиды неэффективны, можно попробовать другие местные противовоспалительные препараты, называемые иммуномодуляторами для местного применения.Обычно они являются препаратами второго ряда, которые используются, если стероиды неэффективны. Поскольку они не являются стероидами, эти лекарства можно использовать на веках и других участках лица, поскольку они обычно не разжижают кожу. Как и в случае с любыми другими лекарствами, у них есть другие потенциальные побочные эффекты, поэтому перед применением их необходимо обсудить с аллергологом / иммунологом.

Терапия влажным обертыванием
Терапия влажным обертыванием обычно используется для людей с тяжелой и трудноизлечимой экземой. При этой терапии кожу замачивают в теплой воде примерно на 15-20 минут, а затем насухо промокают.Затем на участки кожи с «сыпью» наносят лекарства местного действия (обычно стероиды или другие противовоспалительные препараты, как описано выше). Затем поверх участков сыпи накладывается влажная (не капающая) повязка (марля или одежда). Затем поверх влажной повязки кладут сухой материал, такой как эластичный бинт, пижама или носок. Для комфорта пациента можно также использовать теплое одеяло. Обертывания обычно используются в течение 2-6 часов. Использование влажного обертывания индивидуально и должно проводиться под тщательным руководством вашего аллерголога / иммунолога.

Антигистаминные препараты
Пероральные антигистаминные препараты или таблетки не уменьшают зуд, связанный с экземой, так как он не вызывается гистамином. Седативные антигистаминные препараты иногда используются, чтобы стимулировать столь необходимый ночной сон. Однако есть потенциальные побочные эффекты, в том числе повышенная сонливость или седативный эффект в течение дня, повышенная сухость и затрудненное мочеиспускание. Следует избегать местных антигистаминных препаратов, так как они могут усилить сыпь.

Терапия ассоциированных инфекций
Если ваш аллерголог / иммунолог диагностирует инфекцию, связанную с сыпью, может быть назначен антибиотик.Ваша кожа может быть инфицирована, если на ней появляется сочится, покрывается коркой, ваша одежда начинает прилипать к коже или у вас появляется герпес или волдыри.

Стратегии купания, включая ванны с разбавленным отбеливателем
Ванны с очень разбавленным отбеливателем (обычно от четверти до половины стакана отбеливателя, смешанного с 40 галлонами водяной ванны) один-два раза в неделю могут помочь уменьшить сыпь и снизить потребность в антибиотиках.

Способы снятия стресса
Методы снижения стресса, такие как биологическая обратная связь и другие методы, могут использоваться для улучшения настроения и уменьшения беспокойства, связанного с экземой.

Витамины
В последнее время увеличилось количество исследований, связывающих дефицит витамина D с экземой. Если врач поставил вам диагноз дефицита витамина D (низкий уровень витамина D), вам могут назначить добавки с витамином D.

Биологические лекарства
Биологические препараты — это новейшие противовоспалительные препараты, одобренные для лечения других аллергических заболеваний, таких как астма, а также других кожных заболеваний, таких как псориаз.

Они были изучены на трудно поддающихся лечению пациентах с экземой, и недавно был одобрен один биологический агент для лечения очень тяжелой экземы. Ваш аллерголог / иммунолог может обсудить с вами биологические препараты.

Пробиотики
Несмотря на большое внимание средств массовой информации к пробиотикам, в настоящее время нет убедительных доказательств того, что использование пробиотиков улучшает или предотвращает экзему, и в настоящее время не рекомендуется для повседневного лечения экземы.

Прививки от аллергии (инъекции аллергии)
Уколы от аллергии (введение небольших доз того, на что у вас аллергия, например на пылевых клещей, под кожу рук) в настоящее время одобрены для лечения астмы и аллергического ринита (сенной лихорадки). Некоторым пациентам с экземой могут помочь уколы от аллергии. Уколы от аллергии — это не то же самое, что уколы стероидов или инъекции стероидов. Ваш аллерголог / иммунолог может обсудить, подходят ли уколы от аллергии при вашей экземе.

Таким образом, экзема обычно поддается лечению, независимо от вашего возраста. В настоящее время доступно множество методов лечения, и в ближайшее время появятся новые методы лечения. При тщательном обследовании и последующем наблюдении у аллерголога / иммунолога вы можете иметь очень высокое качество жизни и получать удовольствие от любой деятельности.

Список литературы
Лио П., Ли М., ЛеБовидж Дж., Тиммонс К., Шнайдер Л. Клиническое лечение атопического дерматита: практические основные моменты и обновленные данные о параметре практики атопического дерматита 2012. J Allergy Clin Immunol Pract . 2014; 2: 361-9.

Никол Н., Богуневич М., Стрэнд М., Клиннерт М. Терапия влажным обертыванием у детей с умеренным и тяжелым атопическим дерматитом в многопрофильной программе лечения. J Allergy Clin Immunol Pract . 2014; 2: 400-6.

Богуневич М. и Люнг Д. Азбука ведения пациентов с тяжелым атопическим дерматитом. J Allergy Clin Immunol 2013; 132: 511-512e1-e5.

Понимание атопического дерматита: серия образовательных медицинских услуг от National Jewish .2003: 1-16.

Факты: Атопический дерматит (атопическая экзема): серия учебных материалов по здоровью от National Jewish . 2003.

Факты: Ключевые пункты терапии для пациентов с атопическим дерматитом (атопической экземой): серия учебных материалов по здоровью от National Jewish . 2003.

Экзема: мифы и факты о местных кортикостероидах , Национальная ассоциация экземы, 2013.

Терапевтические принципы в дерматологии . ACP-MKSAP 17; 2016: 4.

Грей С., Андерсон М., Дублин С., Хэнлон Дж., Хаббард Р., Уокер Р., Ю О, Крейн П., Ларсон Э. Совокупное использование сильных антихолинергических средств и случайное слабоумие. JAMA Inter Med . 2014; 175: 401-7.

Узнайте больше о кожной аллергии.

Эта статья была рецензирована Эндрю Мур, MD, FAAAAI

Проверено: 28.09.20

Местное применение смеси натурального меда, пчелиного воска и оливкового масла при атопическом дерматите или псориазе: частично контролируемое слепое исследование

Для изучения воздействия смеси меда, оливкового масла и пчелиного воска на пациентов с атопическим дерматитом (AD) или псориазом vulgaris (PV).Двадцать один пациент с дерматитом и 18 пациентов с псориазом были включены в слепое, частично контролируемое исследование; 11 пациентов с дерматитом использовали местные эфиры бетаметазона и 10 пациентов с псориазом использовали клобетазол пропионат. Медовая смесь содержала мед, пчелиный воск и оливковое масло (1: 1: 1). Смеси A, B и C содержали смесь меда с мазью кортикостероидов в соотношении 1: 1, 2: 1 и 3: 1 соответственно. Пациенты с дерматитом подвергались контролируемому двустороннему сравнению половин тела для оценки эффективности медовой смеси против вазелина или смеси А против смеси эфиров вазелин-бетаметазон (1: 1) у пациентов, получавших местное лечение кортикостероидами.У пациентов с псориазом эффект медовой смеси сравнивали с парафином в отдельном сравнении правого и левого участков, или смесь А против смеси парафин-клобетазол пропионат (1: 1) у пациентов, получавших местную терапию кортикостероидами. При дерматите поражения тела на правой или левой половине тела оценивали на предмет эритемы, шелушения, лихенификации, ссадин, уплотнений, мокнущей жидкости и зуда по шкале 0–4 балла. При псориазе поражения выбранного участка оценивали на покраснение, шелушение, утолщение и зуд по шкале от 0 до 4 баллов.В группе медовой смеси 8/10 пациентов с дерматитом показали значительное улучшение через 2 недели, а 5/11 пациентов, предварительно получавших эфиры бетаметазона, не показали ухудшения после 75% снижения доз кортикостероидов с использованием смеси C. При псориазе 5/8 пациентов. показали значительную реакцию на медовую смесь. У пациентов, получавших клобетазол пропионат, у 5 из 10 пациентов не наблюдалось ухудшения после 75% снижения доз кортикостероидов с использованием смеси C.
Медовая смесь полезна при лечении дерматита и вульгарного псориаза.

Границы | Смесь пробиотиков регулирует баланс Т-клеток и уменьшает симптомы атопического дерматита у мышей

Введение

Атопический дерматит (АД) — хроническое воспалительное заболевание кожи, которое влияет на структурные и барьерные функции кожи. Основные симптомы AD включают чрезмерный зуд и экзему. Хотя точная патофизиология БА еще полностью не изучена, она может быть вызвана сочетанием генетических, экологических, аллергических и микробных факторов (Abramovits, 2005).Как и другие аллергические заболевания, AD вызывается иммунным ответом — в первую очередь гиперчувствительностью Т-хелперов (Th) 2 клеток. Баланс между клетками Th2 и Th3 важен для индукции заболевания и толерантности. У пациентов с БА сверхэкспрессия цитокинов Th3, включая интерлейкин (ИЛ) -4, ИЛ-5 и ИЛ-13, усиливает выработку IgE, что приводит к накоплению эозинофилов в дерме (Woodfolk, 2007; Hong et al., 2017). Хотя стероидные препараты являются эффективными методами лечения, они имеют серьезные побочные эффекты, включая атрофию кожи, угри, катаракту, задержку роста и раздражение кожи.Таким образом, как правило, следует избегать длительного лечения стероидами (Gupta and Chow, 2003; Hengge et al., 2006). Изучаются другие альтернативные терапевтические агенты, включая травы, фитохимические вещества, витамины и пробиотики (Mainardi et al., 2009).

Пробиотики, которые являются неинвазивными, непатогенными, грамположительными бактериями с известными полезными для здоровья эффектами, в основном обнаруживаются в ферментированных продуктах питания и кормах (Mercenier et al., 2003; Rather et al., 2016). Достаточное количество пробиотиков может быть полезным для гомеостаза кишечника хозяина, что достигается за счет модуляции иммунной системы и выработки антимикробных агентов, которые блокируют адгезию патогенов и их токсинов (Reid et al., 2003). Недавние исследования показали, что пробиотики также эффективны для предотвращения аллергических заболеваний у мышей и людей (Isolauri et al., 2000; Isolauri, 2001; Cuello-Garcia et al., 2015). Добавка Lactobacillus plantarum снизила оценочный индекс атопического дерматита (SCORAD) у молодых пациентов с атопией (Isolauri, 2001; Prakoeswa et al., 2017). В другом исследовании добавка Lactobacillus casei предотвращала развитие БА у мышей NC / Ng (Tanaka et al., 2009).Однако механизм действия пробиотиков до сих пор полностью не изучен.

Дендритные клетки (ДК) представляют собой антигенпрезентирующие клетки, которые могут эффективно индуцировать первичный иммунный ответ на патогены, а также поддерживать толерантность к аутоантигенам (Banchereau and Steinman, 1998). ДК играют ключевую роль в преодолении врожденных и адаптивных иммунных ответов (Banchereau and Steinman, 1998; Drakes et al., 2004; Lee and Iwasaki, 2007). В зависимости от стимула, DC могут секретировать цитокины и индуцировать дифференцировку наивных Т-клеток в направлении клонов Th2, Th3, Th27 или Treg.Следовательно, большое внимание было сосредоточено на влиянии праймирования DC пробиотиками на модулирование ответов Т-клеток (Powrie, 2004). Некоторые штаммы пробиотиков, в том числе Lactobacillus и Bifidobacterium , модулируют действие ДК по выработке IL-10 и IL-12 наряду с экспрессией костимулирующих молекул (Christensen et al., 2002; Hart et al., 2004 ). Было показано, что несколько штаммов Lactobacillus ингибируют пролиферацию Т-клеток, индуцируют продукцию IL-10 и TGF-бета и модифицируют продукцию цитокинов Th2 и Th3 в различных моделях аутоиммунных заболеваний (Lavasani et al., 2010). В другом исследовании Bifidobacterium lactis ингибирует продукцию TGF-бета (Lindfors et al., 2008). Эти данные свидетельствуют о том, что пробиотики следует тщательно выбирать, чтобы полученный иммунный ответ соответствовал желаемому клиническому применению.

Duolac ATP — пробиотический препарат, содержащий четыре штамма пробиотиков: L. casei , L. plantarum , Lactobacillus rhamnosus и B. lactis . Дуолак АТФ ранее оценивался на предмет противовоспалительной активности на модели колита, индуцированного тринитробензолсульфоновой кислотой (TNBS) (Cha et al., 2014) и модель AD, индуцированная 1-хлор-2,4-динитробензолом (DNCB) (Kim et al., 2016). Однако эти исследования были сосредоточены на терапевтических эффектах Duolac ATP через фрагментарные показатели.

Целью нашего исследования было оценить эффективность Duolac ATP в системе врожденного иммунитета через дендритные клетки костного мозга (BMDC) и использовать анализ факторов транскрипции и цитокинов у атопических мышей для изучения механизма, с помощью которого Duolac ATP преодолевает AD. .

Материалы и методы

Животные

Были приобретены

самок мышей в возрасте от 7 до 10 недель, Balb / c от Orient (Капхён, Южная Корея) или 4-недельных мышей NC / Nga из Центра лабораторных животных Сидзуока (Токио, Япония).Мышей рандомизировали и помещали в клетки из нержавеющей стали в контролируемой среде с 12-часовым циклом свет-темнота. Все экспериментальные процедуры проводились в соответствии с Протоколом использования и ухода за животными, утвержденным Комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) Сеульского национального университета, Сеул, Корея (номер разрешения SNU-170428-1).

Пробиотики

пробиотических штаммов были получены от Cell Biotech Co., Ltd. (Gimpo, Корея) в виде порошка, содержащего 1 × 10 ¹¹ КОЕ / г.В этом исследовании мы использовали Duolac ATP, который состоит из четырех разных штаммов пробиотиков: L. casei CBT LC5 (KCTC12398BP), L. plantarum CBT LP3 (KCTC10782BP), L. rhamnosus CBT LR5 (KCTC1220). и B. lactis CBT BL3 (KCTC11904BP).

Получение и культура BMDC

in vitro

Клетки костного мозга (BM) были выделены из бедренных костей мышей. Эритроциты истощали с использованием буфера для лизиса эритроцитов (Sigma-Aldrich, Миссури, США), и клетки ВМ культивировали в полной RPMI с 20 нг / мл GM-CSF (Creagene, Южная Корея).Полный RPMI состоял из RPMI-1640 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 20 мМ HEPES, 1 мМ пирувата натрия, 220 нМ 2-меркаптоэтанола, 100 мкг / мл гентамицина (все от Sigma-Aldrich). В день 0 клетки ВМ высевали из расчета 3 × 10 ⁶ клеток / лунку в 6-луночный планшет в 3 мл среды, а на день 3 добавляли 2 мл свежей среды. На 5 день половина супернатанта культуры отбрасывали и добавляли 3 мл свежей среды. На 7 день суспендированные клетки ВМ собирали и сортировали с помощью набора CD11c MicroBeads UltraPure (Miltenyi Biotec Inc., Калифорния, США). Суспендированные CD11c ⁺ ВМ-клетки, то есть BMDC. BMDC высевали из расчета 2 × 10 ⁵ клеток / лунку в 96-луночный планшет и стимулировали Duolac ATP или 100 нг / мл липополисахарида (LPS) в полной RPMI. После инкубации в течение 24 ч супернатант собирали для определения концентрации цитокинов.

In vitro CD4 ⁺ Стимуляция Т-клеток

CD4 ⁺ Т-клеток выделяли из брыжеечного лимфатического узла (mLN) мышей дикого типа с использованием набора для обогащения мышиных CD4 T-лимфоцитов (BD Biosciences, Калифорния, США).CD4 ⁺ Т-клетки метили с помощью набора для пролиферации клеток CellTrace ^TM Violet (CTV) (Thermo Fisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США). CD4 ⁺ Т-клетки (2 × 10 ⁵ клеток / лунка) совместно культивировали с BMDC, обработанными дуолаком (2 × 10 ⁴ клеток / лунку), инкубированными с mAb против CD3 / CD28 (BD Biosciences) — покрытый 96-луночный планшет. После инкубации в течение 72 часов клетки исследовали на пролиферацию Foxp3 ⁺ CD4 ⁺ Т-клеток, и супернатант собирали и исследовали на концентрацию IL-10 и IFN-гамма.

Мышь AD Модель

Спину мышей NC / Nga брили, а кожу спины и уши сенсибилизировали экстрактами клещей домашней пыли (HDM) (Biostir, Япония) или DNCB (Sigma-Aldrich) два раза в неделю в течение 3 недель, чтобы вызвать поражения кожи, похожие на AD. . После последнего лечения мышам вводили PBS (200 мкл / день) или Duolac ATP (2 × 10 ⁹ КОЕ / 200 мкл / день) каждый день или три раза в неделю в течение 28 дней (дополнительный рисунок S1). В конце лечения мышей анестезировали CO ₂ .Образцы крови собирали путем пункции сердца в гепаринизированные пробирки. Затем сыворотки собирали центрифугированием в течение 10 минут при 3000 об / мин и хранили при -80 ° C до дальнейшего использования для ELISA. В конце эксперимента мышей умерщвляли и собирали образцы кожи спины и ушей для гистологического анализа и анализа TUNEL, соответственно. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC), очищенные из крови мышей, обработанных Duolac ATP или без него, очищали центрифугированием в градиенте плотности с использованием Histopaque ^® -1077 (Sigma-Aldrich) и хранили при -80 ° C до дальнейшего использования. для КПЦР и вестерн-блоттинга.Были взяты брыжеечные лимфатические узлы (mLN) и пятна Пейера (PP), и распределение иммунных клеток было измерено с помощью проточно-цитометрического анализа.

Гистология

Кожа на спине была удалена и зафиксирована в 4% параформальдегиде (Sigma-Aldrich, Миссури, США). Срезы кожи, залитые парафином, иммобилизовали при нагревании, депарафинизировали путем погружения в ксилол (Sigma-Aldrich), регидратировали с использованием градиентной серии этанола и промывали дистиллированной водой. Затем образцы кожи спины вырезали и подвергали окрашиванию гематоксилином и эозином (H&E) (Sigma-Aldrich).Затем образцы исследовали под световой микроскопией (Leica Microsystems, Вецлар, Германия) для гистологической оценки. Все клинические и гистологические исследования проводились вслепую.

Анализатор TUNEL

Для визуализации фрагментации ДНК, маркера апоптоза, окрашивание TUNEL проводили с использованием набора для обнаружения смерти клеток in situ (Roche, Mannheim, Germany) в соответствии с протоколом производителя. После этого срезы фиксировали смесью этанол-уксусная кислота (2: 1) и промывали.Затем срезы инкубировали с протеиназой K (100 мг / мл), промывали и инкубировали в 3% H ₂ O ₂ , пропитывали 0,5% Triton X-100, снова промывали и инкубировали в реакционной смеси TUNEL. . Срезы промывали и визуализировали с помощью Converter-POD с 0,03% 3,30-диаминобензидином (DAB). Затем срезы, контрастно окрашенные эозином, исследовали на окрашивание TUNEL с помощью оптического микроскопа (Olympus BX53, Япония).

Выделение РНК и количественная ПЦР

Тотальную РНК выделяли из PBMC с помощью реагента TRIzol ^® (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США).Один микрограмм РНК подвергали обратной транскрипции в 20 мкл реакционной смеси, содержащей случайные праймеры (500 мкг / мл), dNTP (10 мМ), 5-кратный буфер первой цепи, DTT (0,1 M), фермент Superscript III (200 Ед / мкл). и ингибитор РНКазы (10 Ед / мкл) (все от Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США). РНК подвергали обратной транскрипции с помощью реагентов обратной транскрипции HyperScript (GeneAll Biotechnology, Сеул, Корея), а количественную ПЦР (qPCR) проводили с помощью SYBR Green Supermix (iQ SYBR Green Supermix, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, США) на система ПЦР в реальном времени LightCycler 480 (Рош, Индианаполис, Индиана, США).Затем это было использовано для расчета относительных количеств целевой мРНК в тестируемых образцах. Количество всех мишеней в тестовых образцах было нормализовано до соответствующих уровней GAPDH. Праймеры для IL-2 (прямой: 5′-CCT GAG CAG GAT GGA GAA TTA CA-3 ‘, обратный: 5′-TCC AGA ACA TGC CGC AGA G-3′), IL-4 (прямой: 5’-ACA GGA GAA GGG ACG CCA T-3 ‘, обратный: 5′-GAA GCC CTA CAG ACG TCA-3′), IL-5 (прямой: 5’-GGG CTT CCT GCT CCT ATC TA-3 ‘, обратный: 5’ -CAG TCA TGG CAC AGT CTG AT-3 ‘), IL-10 (прямой: 5′-CAA CAT ACT GCT AAC CGA CTC CT-3′, обратный: 5’-TGA GGG TCT TCA GCT TCT CAC-3 ‘) , IL-17 (вперед: 5’-TCT GAT GCT GTT GCT GCT G-3 ‘, обратный: 5′-ACG GTT AGA GGT AGT CTG AGG-3′), IFN-гамма (вперед: 5’-CAG CAA CAA CAT AAG CGT CA-3 ‘, обратный: 5′-CCT CAA ACT TGG CAA TAC TCA-3′), TGF-beta (прямой: 5’- GTG TGG AGC AAC ATG TGG AAC TCT-3 ‘, обратный: 5’ -TTG GTT CAG CCA CTG CCG TA-3 ‘), GAPDH (прямой: 5′-CAT GGC CTT CCG TGT TCC TA-3′, обратный: 5’-CCT GCT TCA CCA CCT TCT TGA T-3 ‘). от Bioneer Inc (Тэджон, Корея).

Вестерн-блот

Общий белок выделяли из PBMC с использованием буфера RIPA (Abcam, Cambridge, United Kingdom). Количество белков определяли количественно с помощью набора для анализа белков BCA (Thermo Fisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США), используя бычий сывороточный альбумин (BSA) в качестве стандарта. Каждый образец белка загружали в 10% SDS-полиакриламидный гель и переносили на нитроцеллюлозную мембрану (Schleicher & Schuell BioScience, Германия) на 90 мин при 4 ° C и блокировали 5% обезжиренным молоком в TBST (1 M Tris – HCl, 5 M NaCl, 10% Твин-20) в течение 1 ч при комнатной температуре.Блоты инкубировали с антителами против GATA3, -T-bet, -C-maf, -STAT1, -P-STAT1, -STAT4, -P-STAT4 или -beta-actin (все от Abcam) в течение ночи при 4 ° C. . Мембраны, связанные с первичными антителами, инкубировали с козьими антителами против кроличьего IgG-HRP (Santa Cruz Biotechnology, США) в течение 1 ч при комнатной температуре. Целевой белок визуализировали с помощью системы усиленной хемилюминесценции (GE Healthcare Life Sciences, США) с последующим анализом с помощью ChemiDoc XRS (Bio-Rad).

Иммуноферментный анализ (ELISA)

Иммунологический ответ мышей после экстракта HDM или АД, индуцированной DNCB, контролировали путем измерения сывороточных уровней мышиного IL-10, IL-12p40, TGF-бета, IFN-гамма (все от R&D Systems, США) и IgE. (BD Biosciences).TGF-бета, IL-10 и IL-12p40 мышей измеряли из супернатантов, взятых после культивирования BMDC с Duolac ATP, с использованием наборов ELISA DuoSet (все от R&D Systems). Мышиный IFN-гамма измеряли из супернатантов, взятых после Т-клеток CD4 ⁺ , обработанных супернатантами BMDC, с использованием набора ELISA DuoSet (R&D Systems). Вкратце, 96-луночный микропланшет (Nunc) предварительно покрывали 100 мкл / лунку захватывающего антитела. После блокирования 1% БСА в течение 1 ч при комнатной температуре добавляли 100 мкл / лунку супернатанта вместе со стандартным раствором, разведенным в буфере для разбавления, и инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре.После трехкратной промывки PBS добавляли 100 мкл / лунку детектирующего антитела и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре с последующим добавлением стрептавидин-HRP в PBS. После инкубации в течение 20 минут при комнатной температуре для проявления цвета добавляли тетраметилбензидин (TMB, Millipore), а затем реакцию останавливали добавлением 50 мкл 2 M H ₂ SO ₄ . Поглощение при длине волны 450 нм измеряли с помощью считывающего устройства для микропланшетов (Molecular Devices).

Фенотипическое и функциональное исследование иммунных клеток с использованием анализа проточной цитометрии

Для изучения статуса активации клеток BMDC обрабатывали Duolac ATP или LPS в течение 24 часов при 37 ° C.Клетки окрашивали антимышиным CD86-FITC, PD-L1-PE, MHC II-PE-cy7, CD11c-APC (все от BD Biosciences) в течение 20 минут при 4 ° C в темноте. Чтобы проверить увеличение Treg, меченные CTV CD4 ⁺ Т-клетки, культивированные с BMDC, обработанными дуолаком, в течение 3 дней окрашивали антимышиным CD4-PE (BD Biosciences). После окрашивания поверхности CD4 ⁺ Т-клетки фиксировали и окрашивали mAb против Foxp3-APC мыши (BioLegend, Дедхэм, Массачусетс, США) с использованием набора буферов FOXP3 Fix / Perm Buffer Set (BioLegend). При исследовании in vivo отдельные клетки из mLN и PP были выделены из мышей AD.Популяционные изменения DC и Treg были исследованы, как упоминалось выше. Для анализа субпопуляции Th-клеток общее количество клеток mLN и PP стимулировали PMA и иономицином (Sigma-Aldrich) в присутствии брефельдина A в течение 4 часов. После стимуляции клетки окрашивали соответствующей комбинацией mAb против CD11c-APC, CD4-bv605, Foxp3-APC, IFN-gamma-PE, IL-4-bv605 и IL-17-APC-cy7 (все из Biolegend). Клетки промывали и экспрессию исследовали с использованием FACSCanto II (BD Biosciences).Все полученные данные проточной цитометрии были проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Ashland, OR, США).

Статистический анализ

Уровни значимости для сравнения между образцами были определены с помощью теста множественного сравнения Тьюки с использованием программного обеспечения GraphPad InStat (версия 5.01, GraphPad). Данные на графиках выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Результаты

Дуолак АТФ эффективно индуцирует регуляторные иммунные ответы BMDC

Сначала мы исследовали вредные эффекты, если таковые имеются, Duolac ATP на BMDC.BMDC обрабатывали различными концентрациями Duolac ATP и их компонентов. Независимо от типа пробиотика выживаемость BMDC была значительно снижена при обработке более 2 × 10 ⁶ КОЕ (дополнительный рисунок S2), что позволяет предположить, что оптимальная концентрация составляет менее 2 × 10 ⁶ КОЕ. Основываясь на этих результатах, мы решили использовать концентрацию АТФ Duolac 2 × 10 ⁵ КОЕ. BMDC, обработанные Duolac ATP, показали сходные поверхностные экспрессии костимулирующих молекул CD86 и MHC II по сравнению с необработанными клетками в пределах той же интенсивности (фигура 1A) и процентного содержания клеток (фигура 1B и дополнительная фигура S3).Однако BMDC, обработанные Duolac АТФ, продемонстрировали значительно более высокую экспрессию PD-L1 по сравнению с необработанными клетками в пределах той же интенсивности (Рисунок 1A) и процентного содержания клеток (Рисунок 1B и дополнительный рисунок S3). Затем иммуномодулирующие цитокины исследовали в супернатанте культуры BMDC, обработанной Duolac ATP. Эти результаты показали, что Duolac ATP индуцировал значительное количество IL-10, противовоспалительного цитокина, со скоростью в 1,5 раза большей, чем клетки, обработанные LPS (рис. 1C).Продукция TGF-бета также увеличивалась, когда BMDC обрабатывались Duolac ATP, тогда как продукция IL-12p40 была немного ниже, чем у тех, кто лечился LPS (рис. 1C). Взятые вместе, эти результаты показывают, что Duolac ATP эффективно индуцировал регуляторный иммунный ответ в BMDC.

РИСУНОК 1. Duolac ATP индуцировал регуляторные молекулы в дендритных клетках костного мозга (BMDC). BMDC обрабатывали LPS и / или 2 × 10 ⁶ КОЕ Duolac ATP в течение 24 часов. (A) Экспрессия поверхностных маркеров и (B) репрезентативная гистограмма CD86, MHC II и PD-L1 на BMDC были измерены с помощью проточной цитометрии. (C) Экспрессию цитокинов в супернатантах измеряли с помощью ELISA. Данные представляют как минимум три эксперимента. ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0,001 с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Тьюки.Столбцы указывают среднее значение ± SEM.

BMDC, обработанные дуолак-АТФ, способствуют пролиферации Treg

in vitro

Мы исследовали, может ли Duolac ATP индуцировать дифференцировку Treg. CD4 ⁺ Т-клетки совместно культивировали с BMDC, обработанными Duolac ATP, на планшете, покрытом mAb против CD3 / CD28, в течение 3 дней. Результаты показали, что BMDC-индуцированная пролиферация CD4 ⁺ Т-клеток была выше, чем в контрольной группе, но она немного снижалась при совместном культивировании с BMDC, обработанными Duolac ATP (рис. 2A).Соотношение Foxp3 ⁺ Treg в пролиферированных CD4 ⁺ Т-клетках также было значительно увеличено в группе BMDC, обработанной Duolac АТФ, по сравнению с группой, обработанной только BMDC или контрольными (рис. 2B). Затем иммуномодулирующие цитокины исследовали в супернатанте культуры CD4 ⁺ Т-клеток, совместно культивируемых с BMDC, обработанными Duolac ATP. IL-10 увеличивался аналогично пролиферации Foxp3 ⁺ Treg. Однако на экспрессию IFN-гамма лечение Duolac ATP не влияло (рис. 2C).Взятые вместе, эти результаты показывают, что BMDC, обработанные Duolac ATP, были способны индуцировать пролиферацию Treg с уникальным профилем индукции цитокинов.

РИСУНОК 2. Дендритная клетка костного мозга, обработанная АТФ Duolac, способствует пролиферации Treg in vitro . BMDC, обработанные Duolac ATP, культивировали совместно с CD4 ⁺ Т-клетками в течение 3 дней на планшете, покрытом анти-CD3 / CD28 mAbs. Процент пролиферировавших (A) Т-лимфоцитов и (B) Т-клеток CD4 ⁺ Foxp3 ⁺ Т-клеток среди CD4 ⁺ Т-клеток анализировали с помощью проточной цитометрии.В то же время собирали супернатанты и исследовали (C) продукцию IL-10 и IFN-гамма в CD4 ⁺ Т-клетках с помощью ELISA. Данные представляют как минимум три эксперимента. ^∗ P <0,05, ^∗∗∗ P <0,001 с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Тьюки. Столбцы указывают среднее значение ± SEM.

Улучшение БА у мышей, получавших дуолак АТФ

Чтобы определить терапевтические свойства Duolac ATP in vivo , мы создали модель на мышах для AD-подобных поражений кожи.Мышей NC / Nga сенсибилизировали экстрактами HDM дважды в неделю в течение 3 недель. Затем мышам вводили физиологический раствор с фосфатным буфером (PBS) (200 мкл / день) или Duolac ATP (2 × 10 ⁹ КОЕ / день) в течение 4 недель, как показано на дополнительном рисунке S1. Не было обнаружено значительных изменений физического образа жизни мышей или веса селезенки во время периода кормления (дополнительный рисунок S4). По сравнению с контрольной группой в группе AD на 4-й неделе наблюдались тяжелые симптомы атопии, такие как зуд, эритема / кровоизлияние, отек, экскориация / эрозия и шелушение / сухость (рис. 3А).Интересно, однако, что симптомы атопии у мышей AD, получавших АТФ Duolac, были менее серьезными. Мы также проводили еженедельные исследования толщины уха после индукции AD. По сравнению с контрольной группой толщина ушей в группе AD увеличивалась в зависимости от времени. Однако в группе AD, получавшей Duolac ATP, наблюдалось ослабленное увеличение толщины уха (рис. 3B). БА — хроническое воспалительное заболевание кожи, которое не только вызывает вышеупомянутые клинические симптомы, но также увеличивает толщину эпидермиса и дермы за счет активации и инфильтрации иммунных клеток (Shin et al., 2016). Чтобы исследовать увеличение толщины дермы, мы окрашивали кожу и измеряли эпидермис и дерму на основе известных показателей болезни. Гипертрофия эпителия и гиперкератоз, совпадающие с инфильтрацией иммунных клеток, наблюдались в группе AD (Рисунок 3C, левая панель). Кроме того, у некоторых мышей наблюдался коллапс эпидермиса с кровотечением и обширным хрящевым изъязвлением. В группе AD, получавшей Duolac ATP, было меньше гистопатологических аномалий (рис. 3C, правая панель). Кроме того, с помощью анализа TUNEL мы смогли изучить степень апоптоза.В группе AD наблюдали несколько апоптотических клеток, тогда как это было менее очевидно в группе AD, обработанной Duolac ATP (рис. 3D). Уровни сывороточного IgE были значительно увеличены в группе AD по сравнению с контрольной группой, тогда как группа AD, обработанная Duolac ATP, показала значительное снижение (рис. 3E). Эти результаты предполагают, что Duolac ATP эффективно облегчает симптомы AD и снижает общий уровень IgE в сыворотке.

РИСУНОК 3. Улучшение симптомов БА у мышей, получавших АТФ дуолак.Мышей NC / Nga повышали чувствительность, подвергая их воздействию экстракта HDM дважды в неделю в течение 3 недель. Затем перорально вводили PBS или Duolac ATP в течение 4 недель. (A) атопических симптомов и (B) толщины уха оценивали каждую неделю в течение последних 4 недель. В конце эксперимента, (C) , были изучены результаты гистологического анализа клеточной инфильтрации путем окрашивания H&E (левая панель, один представитель из 10 образцов) и индекс эпидермиса и дермы (правая панель). (D) Анализ TUNEL на образцах дермы (левая панель, одна репрезентативная из 10 образцов) и процент графика (правая панель). (E) Были взяты образцы крови, и уровни IgE в сыворотке были измерены с помощью ELISA. ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0,001 с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Тьюки. Столбцы указывают среднее значение ± SEM.

Поддержание системного баланса Т-клеток у мышей AD, получавших Duolac ATP

Мы исследовали факторы транскрипции, связанные с дифференцировкой клеток Th2 и Th3 у мышей AD, получавших Duolac ATP.T-bet (Рисунки 4A, B), STAT-1 (Рисунки 4A, C) и STAT-4 (Рисунки 4A, D) являются факторами, которые индуцируют дифференцировку клеток Th2; все они экспрессировались со значительно более высокой скоростью в PBMC от мышей AD, обработанных Duolac ATP, по сравнению с необработанными мышами AD. Далее было отмечено, что факторы дифференцировки Th3 GATA-3 (Фигуры 4A, E) и C-maf (Фигуры 4A, F) были увеличены в PBMC от мышей AD. Эти результаты свидетельствуют о том, что Duolac ATP приводит к балансу между Th2 и Th3 клетками у мышей AD, предпочтительно увеличивая высвобождение факторов дифференцировки Th2.Мы также исследовали экспрессию мРНК цитокинов Th2 и Th3 в PBMC от мышей AD, получавших Duolac ATP. Мы обнаружили более высокие уровни экспрессии IL-4 (фиг. 5A) и IL-5 (фиг. 5B) у мышей AD, как и ожидалось от типичного ответа Th3. Кроме того, уровень IL-17, по-видимому, повышен у мышей с AD (рис. 5C). Однако у мышей AD, получавших Duolac ATP, наблюдалось снижение Th3 и Th27 с одновременным увеличением IL-2 (фиг. 5D) и IFN-гамма (фиг. 5E и дополнительная фигура S6A). Экспрессия мРНК IL-10 также увеличивалась у мышей AD, получавших Duolac ATP, тогда как не было изменений в TGF-бета (Фигуры 5F, G).Эти результаты показывают, что Duolac ATP может индуцировать Th2-, но не Th3- или Th27-ответные реакции.

РИСУНОК 4. Изменения экспрессии транскрипционных факторов, участвующих в поддержании баланса Т-клеток у мышей AD, которым вводили Duolac ATP. Мышей Nc / Nga ( n = 6 на группу) сенсибилизировали путем воздействия на них экстрактов HDM дважды в неделю в течение 3 недель. Затем они были подвергнуты пероральному введению Duolac ATP. PBMC, собранные на 4 неделе, использовали для получения лизатов, которые использовали для исследования экспрессии факторов транскрипции с помощью вестерн-блоттинга. (A) Выражение T-bet, STAT1, p-STAT1, STAT4, p-STAT4. Показаны GATA-3, C-maf и бета-актин в качестве внутреннего контроля. Плотность измеряли с помощью денситометра для полуколичественного анализа для (B) T-bet, (C) STAT1, (D) STAT4, (E) GATA 3 и (F) C- маф. ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0,001 с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Тьюки. Столбцы указывают среднее значение ± SEM.

РИСУНОК 5. Экспрессия мРНК уровней цитокинов из PBMC у HDM-сенсибилизированных мышей Nc / Nga, обработанных Duolac ATP. Мышей Nc / Nga ( n = 6 на группу) сенсибилизировали, подвергая их экстрактам HDM шесть раз в течение 3 недель. Затем они были подвергнуты пероральному введению с Дуолак АТФ. PBMC собирали на 4 неделе, и РНК экстрагировали для синтеза кДНК. кПЦР выполняли для изучения экспрессии мРНК (A) IL-4, (B) IL-5, (C) IL-17, (D) IL-2, (E) IFN-γ, (F), IL-10 и (G), TGF-β.Относительные кратные изменения генов-мишеней сравнивали с таковыми для гена домашнего хозяйства, GAPDH. ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0,001 с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Тьюки. Столбцы указывают среднее значение ± SEM.

Поддержание баланса кишечных Т-клеток у мышей AD, получавших АТФ дуолак

Чтобы определить, влияет ли Duolac ATP на баланс кишечных иммунных клеток, были исследованы mlN и PP у мышей AD, обработанных Duolac ATP.Доля DC в млN и PP была немного увеличена у мышей AD, получавших АТФ Duolac (рис. 6А). Хотя субпопуляция DC существенно не изменилась, количество CD11b ⁺ CD103 ^— DC, которые вызывают атопическое воспаление, немного уменьшилось после лечения Duolac ATP в PP (дополнительная фигура 6B). Более того, количество CD4 ⁺ Т-клеток в млН и PP немного уменьшилось при введении Duolac ATP (фиг. 6B). Хорошо известно, что Tregs увеличиваются в ответ на аллергическую реакцию, вызванную Th3, и что они отвечают за поддержание функциональной толерантности в модели мышей с БА (Kim et al., 2013). Таким образом, мы измерили соотношение Treg в млН и PP у мышей AD с обработкой Duolac ATP и без нее. По сравнению с PP, в mLN была относительно высокая доля Treg, но никаких изменений не было обнаружено ни в одной группе лечения (рис. 6C). В PP, однако, дифференцировка Treg была увеличена у мышей AD, получавших Duolac ATP, по сравнению с контрольной и необработанной группами AD. Затем мы исследовали другие подтипы Т-хелперных клеток, тестируя экспрессию IFN-гамма (Th2), IL-4 (Th3) и IL-17 (Th27) в Т-клетках CD4 ⁺ после стимуляции PMA / иономицином.В млN только небольшое изменение (<1%) наблюдалось в подтипе CD4 ⁺ Т-клеток во всех группах (рис. 6E). Как и в случае с mLN, было небольшое различие между клетками Th2, Th3 и Th27 в PP во всех группах лечения (рис. 6F). Эти результаты предполагают, что Duolac ATP способен облегчить симптомы атопического заболевания за счет увеличения популяции кишечных Treg-клеток.

РИСУНОК 6. Состав иммунных клеток из mLN и PP у сенсибилизированных DNCB мышей Nc / Nga, обработанных Duolac ATP.Мышей Nc / Nga сенсибилизировали, подвергая их воздействию DNCB два раза в неделю в течение 3 недель. Затем они были подвергнуты пероральному введению Duolac ATP. Брыжеечные лимфатические узлы (mLN) и пятна Пейера (PP), собранные на 4 неделе, использовали для получения отдельных клеток, которые использовали для исследования состава иммунных клеток. Процентное содержание (A) DC, (B) CD4 ⁺ Т-клеток и Foxp3 ⁺ CD4 ⁺ Т-клеток из (C) млN и (D) PP были исследованы с использованием проточной цитометрии.Клетки mLN и PP стимулировали PMA / иономицином в присутствии брефельдина A в течение 4 часов. IFN-гамма, IL-4 и IL-17, продуцирующие CD4 ⁺ Т-клетки из (E), млN и (F), PP были исследованы после внутриклеточного окрашивания с использованием проточной цитометрии. Данные представляют как минимум три эксперимента. ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0,001 с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Тьюки.Столбцы указывают среднее значение ± SEM.

Обсуждение

Атопический дерматит — серьезное аллергическое заболевание, которое приводит к повышению уровня IgE и клинически проявляется в виде кожного зуда, кожного гиперкератоза и гиперплазии (Abramovits, 2005; Silverberg, 2016). Недавние исследования показали, что некоторые пробиотики могут играть роль в лечении и профилактике БА (Kim et al., 2012, 2015). Duolac ATP обладает противовоспалительными свойствами на модели мышей с БА, индуцированной DNCB (Kim et al., 2016). Однако точный механизм, с помощью которого АТФ Duolac регулирует иммунную систему, точно не определен. В настоящем исследовании мы продемонстрировали регуляторную роль Duolac ATP в BMDC и подтвердили механизм, с помощью которого факторы транскрипции и цитокины обладают защитным эффектом против AD у мышей.

Как и ожидалось, мыши, получавшие AD, индуцированные HDM или DNCB, показали чрезмерный ответ Th3 в настоящем исследовании. Был предложен ряд различных стратегий для лечения БА, включая преимущественную дифференцировку Т-клеток по направлению к линии Th2 / блокирование действия Th3.Ответ Т-клеток критически регулируется основными факторами транскрипции как для Th2 (T-bet, STAT1, STAT4), так и для Th3 (GATA-3, C-maf) ответов (Rengarajan et al., 2000; Erpenbeck et al., 2006) . IL-12, продуцируемый антигенпрезентирующими клетками, индуцирует фосфорилирование STAT4, что приводит к последующей продукции IL-2 и IFN-гамма клетками Th2 (Frucht et al., 2001; Park et al., 2004). IFN-гамма затем вызывает активацию T-bet и STAT1, которые, в свою очередь, создают петлю положительной обратной связи ответа Th2 (Ramana et al., 2002). Повышенный циркулирующий T-bet одновременно ингибирует связывание и активацию GATA-3 с промотором гена IL-4 вместе с другим промотором гена, родственного Th3 (Kanhere et al., 2012).

В одном исследовании PBMC были взяты у пациентов с аллергией и обработаны различными пробиотиками, включая L. plantarum , L. lactis и L. casei , что привело к снижению секреции IL-4 (Toh et al., 2012). Обработка L. plantarum , одним из компонентов АТФ Duolac, снижает экспрессию T-bet и GATA-3 в собственной пластинке тонкого кишечника мышей (Smelt et al., 2013). Экспрессия T-bet также снижалась в PBMC человека при стимуляции пробиотиком из одного штамма B. lactis (Holvoet et al., 2013). Пробиотическая смесь под названием WIKIM28 снижает уровни IL-4 и IL-5, но не IFN-гамма, в клетках периферических лимфатических узлов (Lim et al., 2017). Введение IRT5, другой смеси пробиотиков, также снижает уровни IL-4, IFN-гамма и TNF-альфа в мезентериальных лимфатических узлах (Kwon et al., 2010). Наши результаты продемонстрировали, что Duolac ATP индуцировал повышенную регуляцию фосфо-STAT1 и T-bet, подавляя при этом GATA-3 в модели мышей с БА.Кроме того, Duolac ATP увеличивал IFN-гамма и уменьшал IL-4 in vivo . Эти результаты предполагают, что использование нескольких пробиотических штаммов может приводить к различным ответам Th2.

Другой стратегией преодоления AD является подавление общего иммунного ответа с помощью регуляторных цитокинов, таких как IL-10 и TGF-бета. Эти цитокины подавляют активацию иммунных ответов и, следовательно, сводят к минимуму количество повреждений тканей, вызванных воспалением при БА (Ng et al., 2009).IL-10 продуцируется рядом иммунных клеток, включая DC, макрофаги, моноциты, T-клетки и B-клетки (de Moreno de Leblanc et al., 2011). Микробные продукты стимулируют рецепторы распознавания образов, увеличивая экспрессию митоген-активируемой протеинкиназы-киназы в DC или макрофагах, тем самым увеличивая продукцию IL-10 (Jang et al., 2004).

Lactobacillus casei и L. rhamnosus индуцируют выработку IL-10 у пациентов с аллергией, регулируя состав кишечной микробной флоры (D’Inca et al., 2011). Продукция IL-10 в клетках Th3 подавлялась IL-4 и GATA3 (Zhu et al., 2004; Mitchell et al., 2017). Учитывая, что Duolac ATP снижал экспрессию IL-4 и GATA3 при одновременном повышении уровня STAT4, маловероятно, что IL-10 секретировался в Th3-клетках. С другой стороны, Duolac ATP индуцировал повышающую регуляцию IL-10 у мышей BMDC и AD, предполагая, что Duolac ATP может управлять продукцией IL-10 из клеток, отличных от клеток Th3, таких как DC.

TGF-бета продуцируется многими иммунными клетками, и сигнал TGF-бета является важным компонентом в поддержании здоровой иммунной толерантности (Li et al., 2006). Было высказано предположение, что TGF-бета может уменьшать аллергическое воспаление путем ингибирования синтеза IgE в B-клетках и пролиферации тучных клеток (Gomez et al., 2005). TGF-бета участвует в ингибирующем действии Lactobacillus acidophilus на воспаление, вызванное Salmonella typhimurium (Huang et al., 2015). Смесь пробиотиков, известная как VSL # 3, индуцировала TGF-бета и уменьшала аллергическое воспаление за счет снижения ответа Th3 на модели мышей (Barletta et al., 2013).Точно так же мы обнаружили, что TGF-бета увеличивался, когда BMDC обрабатывали Duolac ATP. TGF-бета, секретируемый из DC, может регулировать дифференцировку Treg (Park et al., 2018). Мы подтвердили, что экспрессия TGF-бета, которая немного снижена при атопии, восстановилась до нормального уровня у мышей после обработки АТФ дуолаком (дополнительная фигура S5B). Более того, Duolac ATP способствовал дифференцировке Treg в PP (рис. 5F). Вполне вероятно, что АТФ Duolac модулирует иммунные клетки аналогично тому, как толерогенные ДК поддерживают иммунную толерантность.

Иммунный дисбаланс, вызванный атопическими реакциями, вызывает эпидермальное воспаление и гиперплазию (Abramovits, 2005; Jin et al., 2009). Было высказано предположение, что пероральное введение Enterococcus faecalis подавляет выработку цитокинов Th2 и Th3 для ослабления гиперплазии кожи (Choi et al., 2016). В настоящем исследовании Duolac ATP снижал продукцию IgE за счет уменьшения Th3 и увеличения ответа Th2, тем самым предотвращая воспаление и гиперплазию кожи.

Таким образом, наши данные показывают, что Duolac ATP регулирует экспрессию IL-10 и TGF-beta и позволяет DC становиться функционально толерантными и потенциально индуцировать дифференцировку Treg.Кроме того, мы обнаружили, что Duolac ATP регулирует факторы транскрипции и цитокины, чтобы управлять дифференцировкой наивных Т-клеток в направлении клонов Th2. Взятые вместе, эти результаты показывают, что Duolac ATP демонстрирует большой превентивный потенциал в лечении симптомов AD и может служить в будущем иммуномодулирующим средством для пациентов с AD.

Авторские взносы

C-HY и IC разработали и выполнили эксперименты и написали рукопись. EC и KC обеспечивали руководство во время исследования и подготовки рукописи.HK, RH, KY, NK и JH провели эксперименты и проанализировали данные. Все авторы рецензировали рукопись.

Финансирование

Это исследование было выполнено при поддержке Проекта развития основных промышленных технологий (№ 10063302), Министерства торговли, промышленности и энергетики, Национального исследовательского фонда (NRF-2018R1A2B2006793) и гранта Программы совместных исследований в области сельскохозяйственных наук и сельского хозяйства. Технологическое развитие (проект № PJ01336401), Управление сельского развития, Южная Корея.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2018.02414/full#supplementary-material

РИСУНОК S1 | Схематическая диаграмма индуцированной HDM экстрактом и DNCB мышиной модели поражений кожи, подобных атопическому дерматиту (AD), и перорального введения Duolac ATP мышам NC / Nga.Мыши NC / Nga были разделены на три группы: (1) нормальный контроль (контроль), (2) атопический дерматит (AD) и (3) атопический дерматит + Duolac ATP AD + Duolac ATP). Чтобы изучить влияние Duolac ATP на атопический дерматит, кожу спины и уши мышей обрабатывали экстрактами HDM или DNCB шесть раз в течение 3 недель, чтобы вызвать поражения кожи, подобные AD. Дуолак АТФ вводили после последней обработки экстрактами HDM на неделе 0. На 4 неделе мышей умерщвляли и собирали кровь, селезенку, PP и млN для иммунологического анализа и гистологического анализа дорсальной кожи.

РИСУНОК S2 | Апоптоз BMDC, обработанных пробиотиками, содержащими Duolac ATP. BMDC обрабатывали пробиотиками в различных концентрациях [Duolac ATP, Bifidobacterium lactis (BL), Lactobacillus casei (LC), Lactobacillus plantarum (LP) или Lactobacillus rhamnosus для 24 hR]). Измеряли процент апоптотических клеток, показанных как фракция, положительная по аннексину V. Концентрация BMDC составила 2 × 10 ⁵ клеток во всех группах.Данные представляют как минимум три эксперимента.

РИСУНОК S3 | Экспрессия поверхностных молекул на BMDC, обработанных Duolac ATP. BMDC обрабатывали LPS или 2 × 10 ⁶ КОЕ Duolac ATP в течение 24 часов. Соотношения клеток, экспрессирующих CD86, MHC II и PD-L1, в BMDC измеряли с помощью проточной цитометрии. Данные представляют как минимум три эксперимента. ^∗ P <0,05, ^∗∗∗ P <0,001 с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Тьюки.Столбцы указывают среднее значение ± SEM.

РИСУНОК S4 | Изменения веса тела и селезенки в модели мышей AD, обработанной Duolac ATP. Атопический дерматит вызывали воздействием экстрактов HDM на мышей в течение 3 недель; Затем мышам вводили Duolac ATP в течение 4 недель. (A) Вес тела контролировали еженедельно в течение 4 недель. (B) Селезенку выделяли и взвешивали на 4 неделе.

РИСУНОК S5 | Изменения экспрессии цитокинов у мышей AD, обработанных Duolac ATP.Мыши NC / Nga были сенсибилизированы воздействием DNCB два раза в неделю в течение 3 недель. Затем им перорально вводили PBS или Duolac ATP в течение 4 недель. Были взяты образцы крови, и уровни сыворотки (A), IFN-гамма и (B), TGF-бета были измерены с помощью ELISA. Данные представляют как минимум три эксперимента. ^* P <0,05 с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Тьюки. Столбцы указывают среднее значение ± SEM.

РИСУНОК S6 | Субпопуляция DC из mLN и PP у мышей AD, обработанных Duolac ATP.Мышей NC / Nga сенсибилизировали путем воздействия DNCB дважды в неделю в течение 3 недель. Затем мышам перорально вводили PBS или Duolac ATP в течение 4 недель. (A) млN и (B) PP, собранные на 4 неделе, использовали для получения отдельных клеток. Клетки были привязаны к CD11c и подразделены на основе экспрессии CD11b и CD103 с использованием проточной цитометрии. Данные представляют как минимум три эксперимента.

Список литературы

Барлетта, Б., Росси, Г., Скьяви, Э., Буттерони, К., Коринти, С., Boirivant, M., et al. (2013). TGF-бета, индуцированный пробиотиком VSL # 3, уменьшает воспаление при пищевой аллергии на мышиной модели сенсибилизации к арахису за счет индукции регуляторных Т-клеток в слизистой оболочке кишечника. Мол. Nutr. Food Res. 57, 2233–2244. DOI: 10.1002 / mnfr.201300028

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст

Ча, Ю. С., Со, Дж. Г., Чунг, М. Дж., Чо, К. В., и Юн, Х. Дж. (2014). Смешанный состав молочнокислых бактерий подавляет вызванные тринитробензолсульфоновой кислотой воспалительные изменения ткани толстой кишки у мышей. J. Microbiol. Biotechnol. 24, 1438–1444. DOI: 10.4014 / jmb.1403.03064

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чой, Э. Дж., Иваса, М., Хан, К. И., Ким, В. Дж., Танг, Ю., Хван, Ю. Дж. И др. (2016). Убитый нагреванием Enterococcus faecalis EF-2001 уменьшает атопический дерматит на мышиной модели. Питательные вещества 8: 146. DOI: 10.3390 / nu8030146

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кристенсен, Х.Р., Фрокаер, Х., Пестка, Дж. Дж. (2002). Лактобациллы по-разному модулируют экспрессию цитокинов и поверхностных маркеров созревания в дендритных клетках мышей. J. Immunol. 168, 171–178. DOI: 10.4049 / jimmunol.168.1.171

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Куэлло-Гарсия, К. А., Брозек, Дж. Л., Фиокки, А., Паванкар, Р., Йепес-Нуньес, Дж. Дж., Терраччиано, Л. и др. (2015). Пробиотики для профилактики аллергии: систематический обзор и метаанализ рандомизированных контролируемых исследований. J. Allergy Clin. Иммунол. 136, 952–961. DOI: 10.1016 / j.jaci.2015.04.031

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

de Moreno de Leblanc, A., Del Carmen, S., Zurita-Turk, M., Santos Rocha, C., Van De Guchte, M., Azevedo, V., et al. (2011). Важность модуляции IL-10 пробиотическими микроорганизмами при воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта. ISRN Гастроэнтерол. 2011: 892971. DOI: 10.5402 / 2011/892971

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

D’Inca, R., Баролло, М., Скарпа, М., Грилло, А. Р., Брун, П., Ветторато, М. Г. и др. (2011). Ректальное введение Lactobacillus casei DG Изменяет состав флоры и экспрессию толл-подобных рецепторов в слизистой оболочке толстой кишки пациентов с язвенным колитом легкой степени. Dig. Дис. Sci. 56, 1178–1187. DOI: 10.1007 / s10620-010-1384-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эрпенбек, В. Дж., Хагенберг, А., Крентель, Х., Дишер, М., Браун, А., Хольфельд, Дж.М., et al. (2006). Регулирование экспрессии мРНК GATA-3, c-maf и T-bet в клетках бронхоальвеолярного лаважа и биопсиях бронхов после заражения сегментарным аллергеном. Внутр. Arch. Allergy Immunol. 139, 306–316. DOI: 10.1159 / 0000

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фрухт Д. М., Фукао Т., Богдан К., Шиндлер Х., О’Ши Дж. Дж. И Коясу С. (2001). Продукция IFN-гамма антигенпрезентирующими клетками: возникают механизмы. Trends Immunol. 22, 556–560. DOI: 10.1016 / S1471-4906 (01) 02005-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гомес, Г., Рамирес, К. Д., Ривера, Дж., Патель, М., Норозиан, Ф., Райт, Х. В. и др. (2005). TGF-бета 1 подавляет экспрессию Fc epsilon RI тучных клеток. J. Immunol. 174, 5987–5993. DOI: 10.4049 / jimmunol.174.10.5987

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гупта, А. К., и Чоу, М. (2003). Пимекролимус: обзор. J. Eur.Акад. Дерматол. Венереол. 17, 493–503. DOI: 10.1046 / j.1468-3083.2003.00692.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Харт, А. Л., Ламмерс, К., Бриджиди, П., Витали, Б., Риццелло, Ф., Джионкетти, П. и др. (2004). Модуляция фенотипа и функции дендритных клеток человека пробиотическими бактериями. Кишечник 53, 1602–1609. DOI: 10.1136 / gut.2003.037325

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хенгге, У. Р., Ружичка, Т., Шварц, Р.А., и Корк, М. Дж. (2006). Побочные эффекты местных глюкокортикостероидов. J. Am. Акад. Дерматол. 54, 1–15; викторина 16–18. DOI: 10.1016 / j.jaad.2005.01.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Холвоет С., Цуэрчер А. В., Жюльен-Яво Ф., Перро М. и Мерсенье А. (2013). Характеристика потенциальных противоаллергических пробиотических штаммов на модели мононуклеарных клеток периферической крови человека с перекосом Th3. Внутр. Arch. Allergy Immunol. 161, 142–154. DOI: 10.1159 / 000343703

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хуанг И. Ф., Линь И. К., Лю П. Ф., Ченг М. Ф., Лю Ю. К., Се Й. Д. и др. (2015). Lactobacillus acidophilus ослабляет воспаление кишечника, вызванное Salmonella , посредством передачи сигналов TGF-бета. BMC Microbiol. 15: 203. DOI: 10.1186 / s12866-015-0546-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Изолаури, Э., Арвола, Т., Сутас, Ю., Мойланен, Э., и Салминен, С. (2000). Пробиотики в лечении атопической экземы. Clin. Exp. Аллергия 30, 1604–1610. DOI: 10.1046 / j.1365-2222.2000.00943.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джанг, С., Уэмацу, С., Акира, С., и Салгаме, П. (2004). Индукция IL-6 и IL-10 дендритными клетками в ответ на Mycobacterium tuberculosis преимущественно зависит от опосредованного TLR2 распознавания. J. Immunol. 173, 3392–3397.DOI: 10.4049 / jimmunol.173.5.3392

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Канхере А., Хертвек А., Бхатиа У., Гокмен М. Р., Перуча Э., Джексон И. и др. (2012). T-bet и GATA3 управляют дифференцировкой Th2 и Th3 посредством клоноспецифичного нацеливания на дистальные регуляторные элементы. Нац. Commun. 3: 1268. DOI: 10.1038 / ncomms2260

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, Дж. Ю., Парк, Б. К., Парк Х. Дж., Парк Й. Х., Ким Б. О. и Пио С. (2013). Эффект смягчения атопического дерматита нового штамма Lactobacillus . J. Appl. Microbiol. 115, 517–526. DOI: 10.1111 / jam.12229

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, М.С., Ким, Дж. Э., Юн, Ю. С., Ким, Т., Со, Дж. Г., Чунг, М. Дж. И др. (2015). Улучшение кожных поражений, подобных атопическому дерматиту, путем ингибирования IL-4 белка P14, выделенного из Lactobacillus casei у мышей NC / Nga. заявл. Microbiol. Biotechnol. 99, 7089–7099. DOI: 10.1007 / s00253-015-6455-y

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, М.С., Ким, Дж. Э., Юн, Ю. С., Со, Дж. Г., Чунг, М. Дж., И Юм, Д. Ю. (2016). Препарат пробиотика облегчает поражение кожи, подобное атопическому дерматиту, на мышиных моделях. Toxicol. Res. 32, 149–158. DOI: 10.5487 / TR.2016.32.2.149

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, М.С., Ким, В. Г., Чанг, Х. С., Парк, Б. В., Ан, К. С., Ким, Дж. Дж. И др. (2012). Улучшение кожных поражений, подобных атопическому дерматиту, с помощью Platycodon grandiflorum , ферментированного Lactobacillus plantarum , у мышей NC / Nga. Biol. Pharm. Бык. 35, 1222–1229. DOI: 10.1248 / bpb.b110504

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Квон, Х. К., Ли, К. Г., Со, Дж. С., Чае, С. С., Хван, Дж. С., Саху, А. и др. (2010). Генерация регуляторных дендритных клеток и CD4 + Foxp3 + Т-клеток при введении пробиотиков подавляет иммунные нарушения. Proc. Natl. Акад. Sci. США 107, 2159–2164. DOI: 10.1073 / pnas.0

5107

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лавасани С., Джамбазов Б., Нури М., Фак, Ф., Буске С., Молин Г. и др. (2010). Новая смесь пробиотиков оказывает терапевтическое действие на экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, опосредованный регуляторными Т-клетками, продуцирующими IL-10. PLoS One 5: e9009. DOI: 10.1371 / journal.pone.0009009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, М.О., Ван, Ю. Ю., Санджаби, С., Робертсон, А. К. Л., и Флавелл, Р. А. (2006). Трансформирующий фактор роста-бета регуляцию иммунных ответов. Annu. Rev. Immunol. 24, 99–146. DOI: 10.1146 / annurev.immunol.24.021605.0

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лим, С. К., Квон, М. С., Ли, Дж., О, Й. Дж., Янг, Дж. Й., Ли, Дж. Х. и др. (2017). Weissella cibaria WIKIM28 уменьшает поражение кожи, подобное атопическому дерматиту, путем индукции толерогенных дендритных клеток и регуляторных Т-клеток у мышей BALB / c. Sci. Реп. 7: 40040. DOI: 10.1038 / srep40040

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Линдфорс К., Бломквист Т., Джуути-Ууситало К., Стенман С., Веналайнен Дж., Маки М. и др. (2008). Живые пробиотические бактерии Bifidobacterium lactis подавляют токсические эффекты, вызываемые глиадином пшеницы в культуре эпителиальных клеток. Clin. Exp. Иммунол. 152, 552–558. DOI: 10.1111 / j.1365-2249.2008.03635.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Майнарди, Т., Капур, С., и Биелори, Л. (2009). Дополнительная и альтернативная медицина: травы, фитохимические вещества и витамины и их иммунологические эффекты. J. Allergy Clin. Иммунол. 123, 283–294; викторина 295–296. DOI: 10.1016 / j.jaci.2008.12.023

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mercenier, A., Pavan, S., and Pot, B. (2003). Пробиотики как биотерапевтические агенты: современные знания и перспективы на будущее. Curr. Pharm. Des. 9, 175–191. DOI: 10.2174/13816120333

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Митчелл Р. Э., Хассан М., Бертон Б. Р., Бриттон Г., Хилл Э. В., Верхаген Дж. И др. (2017). IL-4 увеличивает продукцию IL-10 в клетках Th2: влияние на регуляцию Th2 и Th3. Sci. Реп. 7: 11315. DOI: 10.1038 / s41598-017-11803-y

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нг, С. К., Харт, А. Л., Камм, М. А., Стэг, А. Дж., И Найт, С.С. (2009). Механизмы действия пробиотиков: последние достижения. Inflamm. Кишечник. 15, 300–310. DOI: 10.1002 / ibd.20602

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пак, В. Р., Накахира, М., Сугимото, Н., Биан, Ю., Яширо-Отани, Ю., Чжоу, X. Y., и др. (2004). Механизм, лежащий в основе STAT4-опосредованной повышающей регуляции индукции IFN-гамма в Т-клетках, запускаемых TCR. Внутр. Иммунол. 16, 295–302. DOI: 10.1093 / intimm / dxh034

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Powrie, F.(2004). Иммунная регуляция в кишечнике: баланс между эффекторными и регуляторными Т-клеточными ответами. Ann. Акад. Sci. 1029, 132–141. DOI: 10.1196 / анналы.1309.030

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Prakoeswa, C. R. S., Herwanto, N., Prameswari, R., Astari, L., Sawitri, S., Hidayati, A. N., et al. (2017). Добавка Lactobacillus plantarum IS-10506 снижает SCORAD у детей с атопическим дерматитом. Бенеф.Микробы 8, 833–840. DOI: 10.3920 / BM2017.0011

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рамана К. В., Гил М. П., Шрайбер Р. Д. и Старк Г. Р. (2002). Stat1-зависимые и -независимые пути в IFN-гамма-зависимой передаче сигналов. Trends Immunol. 23, 96–101. DOI: 10.1016 / S1471-4906 (01) 02118-4

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Скорее, И. А., Баджпай, В. К., Кумар, С., Лим, Дж., Пэк, В. К., и Парк, Ю.Х. (2016). Пробиотики и атопический дерматит: обзор. Фронт. Microbiol. 7: 507. DOI: 10.3389 / fmicb.2016.00507

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рид Г., Сандерс М. Э., Гаскинс Х. Р., Гибсон Г. Р., Мерсенье А., Расталл Р. и др. (2003). Новые научные парадигмы пробиотиков и пребиотиков. J. Clin. Гастроэнтерол. 37, 105–118. DOI: 10.1097 / 00004836-200308000-00004

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ренгараджан, Дж., Сабо, С. Дж., И Глимчер, Л. Х. (2000). Транскрипционная регуляция поляризации Th2 / Th3. Immunol. Сегодня 21, 479–483. DOI: 10.1016 / S0167-5699 (00) 01712-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шин, Дж. Х., Чанг, М. Дж., И Со, Дж. Г. (2016). Состав пробиотика с множеством штаммов ослабляет кожные симптомы атопического дерматита на модели мышей за счет генерации CD4 (+) Foxp3 (+) Т-клеток. Food Nutr. Res. 60: 32550. DOI: 10.3402 / fnr.v60.32550

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сильверберг, Н. Б. (2016). Практический обзор детского атопического дерматита. Cutis 97, 267–271.

Google Scholar

Смелт, М. Дж., Де Хаан, Б. Дж., Брон, П. А., Ван Свам, И., Мейеринк, М., Уэллс, Дж. М. и др. (2013). Пробиотики могут генерировать Т-клеточные ответы foxP3 в тонком кишечнике и одновременно индуцировать активацию CD4 и CD8 Т-клеток в толстом кишечнике. PLoS One 8: e68952.DOI: 10.1371 / journal.pone.0068952

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Танака А., Юнг К., Беньякуб Дж., Приульт Г., Окамото Н., Омори К. и др. (2009). Пероральный прием Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724 предотвращает развитие атопического дерматита у мышей NC / NgaTnd, возможно, за счет модуляции местного производства IFN-гамма. Exp. Дерматол. 18, 1022–1027. DOI: 10.1111 / j.1600-0625.2009.00895.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

То, З.К., Анзела, А., Танг, М. Л. К., и Личчарди, П. В. (2012). Пробиотическая терапия как новый подход к лечению аллергических заболеваний. Фронт. Pharmacol. 3: 171. DOI: 10.3389 / fphar.2012.00171

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhu, J. F., Min, B., Hu-Li, J., Watson, C.J., Grinberg, A., Wang, Q., et al. (2004). Условная делеция Gata3 показывает его важную функцию в ответах T (H) 1-T (H) 2. Нац. Иммунол. 5, 1157–1165. DOI: 10.1038 / ni1128

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Смесь пребиотических олигосахаридов снижает заболеваемость атопическим дерматитом в течение первых шести месяцев жизни

Распространенность атопических заболеваний в развитых странах за последнее десятилетие неуклонно росла. ^{1– 3} Состав кишечной флоры играет ключевую роль в постнатальном развитии иммунной системы. ⁴ В материнском молоке нейтральные олигосахариды являются важным фактором, способствующим развитию кишечной флоры, в которой преобладают бифидобактерии и лактобациллы. ^{5, 6} На основе анализа олигосахаридов грудного молока была разработана пребиотическая смесь, состоящая из 90% короткоцепочечных галактоолигосахаридов (GOS) и 10% длинноцепочечных фруктоолигосахаридов (FOS). ^{7, 8} Исследования на недоношенных ⁹ и доношенных ^{10– 12} младенцах показали, что добавка к корму с GOS / FOS производит кишечную флору, аналогичную той, которая обнаруживается у младенцев, находящихся на грудном вскармливании. Атопический дерматит (АД) обычно является первым проявлением аллергии в раннем младенчестве. Сообщалось, что AD связана с задержкой созревания иммунных ответов Th2 в раннем младенчестве с повышенным общим IgE и специфическим IgE к диетическим антигенам в сыворотке. ¹³ Младенцы с ранним началом аллергической болезни также подвержены риску других проявлений аллергической болезни, явления, которое называют аллергическим маршем. ¹⁴ Кишечная флора является частью сложной экосистемы, и многие из составляющих ее бактерий остаются неидентифицированными. ¹⁵ Однако есть убедительные доказательства того, что кишечная флора влияет на постнатальное развитие иммунной системы. ¹⁶ Стимуляция всей кишечной флоры пребиотиками может быть более эффективным методом изменения иммунного развития, чем добавление одного вида бактерий в экосистему кишечника.Однако положительных результатов с пробиотиками не поступало ¹⁷ . Настоящее исследование было разработано для изучения влияния добавления в корм для младенцев 0,8 г / 100 мл смеси GOS / FOS на частоту возникновения БА в течение первых шести месяцев жизни. Мы предположили, что пребиотическая смесь значительно снизит совокупную заболеваемость БА у младенцев с высоким риском в возрасте 6 месяцев по сравнению с контрольной группой без добавок, получавшей идентичную смесь.

НАСЕЛЕНИЕ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование было двойным слепым рандомизированным плацебо-контролируемым испытанием с использованием параллельного группового дизайна.Письменное информированное согласие родителей было получено от каждой участвовавшей семьи, а протокол исследования был одобрен Этическим комитетом родильного дома Macedonio Melloni, Милан, Италия. Для исследования подходили доношенные дети, родившиеся в период с 1 апреля 2003 г. по 31 марта 2005 г. в родильном доме Macedonio Melloni, Милан, с родительской историей атопической экземы, аллергического ринита или астмы у матери или отца. Во всех случаях родительский диагноз основывался на документально подтвержденной справке врача.

Согласно правилам больницы кормление грудью рекомендовано всем матерям.

Родители были проинформированы об исследовании при выписке из родильного отделения и попросили связаться с больницей, если они начали кормить смесью. Критериями включения были: гестационный возраст от 37 до 42 недель, масса тела при рождении, соответствующая гестационному возрасту, и начало кормления смесью в течение первых двух недель жизни. Когда мать обратилась в больницу, младенцев случайным образом распределили на одно из двух кормлений.Рецепт обеих формул был основан на гипоаллергенной смеси с сильно гидролизованным белком молочной сыворотки коровьего молока и дополнен либо 0,8 г GOS / FOS на 100 мл, либо 0,8 г мальтодекстрина / 100 мл в качестве плацебо. Рандомизация проводилась с помощью таблицы случайных чисел, а ослепление поддерживалось кодированием двух формул испытаний суффиксом «N» или «O» к названию продукта.

Исследуемые смеси давали ad libitum.

Смешанное грудное вскармливание и кормление из бутылочки разрешалось до шестой недели жизни.Когда мать начала кормить смесью в соответствии с критериями включения, но продолжала грудное вскармливание более шести недель, ребенок был исключен из исследования.

Младенцы, включенные в исследование, наблюдались ежемесячно. Родители были опрошены с помощью дневника. Для этого анализа использовались результаты, полученные до начала кормления тестируемой смесью (1-й день обследования) и в возрасте 3 и 6 месяцев (2-й и 3-й дни обследования, соответственно).

При каждом посещении кожа младенца проверялась на наличие AD в соответствии с диагностическими критериями, описанными Harrigan and Rabinowitz ¹⁷ и Muraro et al . ¹⁸ Диагноз БА был подтвержден, если были выявлены следующие признаки: кожный зуд, поражение лица, лицевого черепа и / или разгибательной части конечностей и минимальная продолжительность симптомов — четыре недели.

Тяжесть кожных изменений оценивалась по индексу SCORAD на основе протяженности, интенсивности кожных симптомов, а также субъективных симптомов зуда и потери сна в соответствии с рекомендациями Европейской целевой группы по AD. ^{19, 20} Степень БА определялась с использованием показателя SCORAD для младенцев до 2 лет.Субъективные симптомы и информация о частоте и постоянстве стула были получены во время интервью с родителями на основании их дневниковых записей. Все экзамены и интервью проводились исключительно двумя авторами (GM и SA). Антропометрические измерения и запись характеристик плача, срыгивания, рвоты и стула использовались в качестве вторичных параметров для описания безопасности, а также принятия и толерантности. Для всех младенцев параметры роста измеряли при каждом посещении исследования.Масса тела измерялась с помощью весов с точностью ± 5 г. Длина макушки до пятки измерялась на специальной доске для новорожденных и младенцев с точностью ± 1 мм, а окружность головы — с помощью металлической ленты с точностью ± 1 мм.

Частота плача (1–3 балла: 1 = практически не плачет; 2 = плач в связи с кормлением; 3 = плач независимо от приема пищи), срыгивание (балл 1–3: 1 = 0; 2 = 1–2 ; 3 => 2 срыгивания в день) и рвота (оценка 1-3: 1 = 0; 2 = 1; 3 => 1 эпизод рвоты в день) регистрировались на основании интервью с родителями.

Характеристики стула регистрировались в отношении консистенции (1–5 баллов: 1 = водянистый; 2 = мягкий; 3 = рыхлый; 4 = сформированный; 5 = твердый) и частоты. Консистенция стула оценивалась по внешнему виду свежего образца, использованного для анализа, анкеты и отчета родителей во время интервью. Консистенцию каждого образца стула регистрировали за день до дня исследования; среднее значение полученных баллов использовали для характеристики консистенции стула в тот день.

В подгруппе из 98 младенцев родители согласились собрать образцы стула для микробиологического анализа. Образцы стула брали во время всех трех осмотров. Объем 0,2 г образца свежих фекалий гомогенизировали в криозащитной транспортной среде глицерина (глицерин 10 мл, оксоид 0,1 г, вода до 100 мл) и немедленно замораживали при -80 ° C. Пробы транспортировались на сухом льду. Для идентификации бифидобактерий и лактобацилл использовали коммерчески доступные селективные среды (бифидобактерии: Heipha № 20580e, Гейдельберг, Германия; лактобациллы: модифицированный Rogosaagar Heipha 2068e, Гейдельберг, Германия), как описано ранее. ²¹ Числа представлены в виде колониеобразующих единиц (КОЕ) / г стула.

Статистика

Результаты анализировались для каждого протокола.

Сбалансированная по времени рандомизация была выполнена с помощью программного обеспечения RANCODE (IDV Gauting, Германия; начальные числа рандомизированы по времени реакции) со случайным размером блока, равным четырем. Интервальные данные (например, антропометрические) сравнивались между группами с помощью двустороннего теста t . Количество бактерий в образцах стула сравнивали с помощью U-критерия Манна-Уитни из-за непараметрического распределения данных.

Баллы с порядковыми данными (например, консистенция стула) сравнивали между группами с помощью U-критерия Манна-Уитни.

Баллы с номинальными данными (например, плач, рвота, срыгивание) и другими номинальными данными сравнивали с помощью табличного анализа закодированных исходных данных (χ ^{2 тест} ). В случае таблиц 2 × 2 использовался точный критерий Фишера.

Для анализа первичных исходов были рассчитаны 95% доверительные интервалы с использованием метода оценки Вильсона. ²²

Размер выборки был рассчитан на основе анализа заболеваемости БА в больнице в предыдущие годы и с учетом размера эффекта, аналогичного тому, который был зарегистрирован для пробиотиков ¹⁶ в то время. Основываясь на этом предположении, 108 субъектов в каждой группе, завершившие протокол, были рассчитаны для обеспечения мощности 80%. Исследование было завершено после полного двухлетнего периода регистрации, чтобы исключить сезонные эффекты. Показатель отсева был немного выше, чем предполагалось (20% против 15%).Таким образом, статистический анализ проводился на основе 206 случаев, а не 216 завершенных случаев, как планировалось. Значение p <0,05 считалось статистически значимым.

РЕЗУЛЬТАТЫ

В исследование было включено 259 младенцев (рис. 1). Наиболее важные клинические данные исследуемой популяции сведены в таблицу 1. Пятьдесят три младенца покинули испытание до завершения исследования. Основной причиной выбытия было продолжение или возобновление грудного вскармливания.Характеристики при рождении и причины отсева существенно не различались между двумя группами (таблица 2).

Таблица 1

Наиболее релевантные клинические данные исследуемой популяции

Таблица 2

Выпадающие характеристики

Рисунок 1

Расположение всех субъектов, включенных в исследование.

В течение шестимесячного периода исследования 10 младенцев (9.8%; 95% ДИ 5,4–17,1%) в группе GOS / FOS и у 24 младенцев (23,1%; 95% ДИ 16,0–32,1%) в группе плацебо развилась БА (рис. 2).

Рисунок 2

Кумулятивная частота AD в возрасте 6 месяцев в группе, получавшей смесь с добавлением GOS и FOS или мальтодекстринов в качестве плацебо. Данные выражены в виде среднего значения (95% ДИ).

В группе младенцев с БА показатели SCORAD существенно не различались между группой, получавшей смесь с добавлением GOS / FOS, и группой, получавшей смесь плацебо (медианы (межквартильный размах) в возрасте 3 месяцев: 9.8 (4,8) против 9,8 (7,5), p = 0,86; в возрасте 6 месяцев: 8,9 (12,4) против 12,8 (5,5), p = 0,18).

В подгруппе младенцев с полным набором образцов стула добавление GOS / FOS привело к значительному увеличению количества бифидобактерий по сравнению с группой плацебо. Значимого влияния на количество лактобацилл не наблюдалось (таблица 3).

Таблица 3

Бифидобактерии и лактобациллы, подсчет колониеобразующих единиц (КОЕ) на грамм свежего стула в течение трех последовательных дней обследования

Характеристики стула (частота стула и его консистенция) значительно зависели от диеты (таблица 4).

Таблица 4

Характеристики стула в возрасте 3 и 6 месяцев

Таблица 5

Срыгивание, рвота и плач в возрасте 3 и 6 месяцев

Что касается принятия и толерантности к смесям, то в группе, получавшей смесь с добавкой GOS / FOS, было значительно меньше сообщений о срыгивании и плаче, тогда как не было никакой разницы в зарегистрированной частоте рвоты между двумя группами (таблица 4).

На основании дневниковых записей родителей и результатов ежемесячных осмотров в течение всего исследования не наблюдалось никаких побочных эффектов.

ОБСУЖДЕНИЕ

В настоящем исследовании совокупная частота БА в течение первых шести месяцев жизни была значительно снижена при добавлении гипоаллергенной смеси (протеин молочной сыворотки с интенсивным гидролизом коровьего молока) с 0,8 г GOS / FOS на 100 мл. Насколько нам известно, это первый отчет, показывающий, что пребиотические олигосахариды могут влиять на частоту возникновения БА.

Большинство младенцев, обследованных в этом исследовании, имели в анамнезе материнскую атопию, которая сильно связана с риском БА в 6 месяцев жизни. ²³ Хорошо известно, что частота развития БА достигает пика через 6 месяцев, ²⁴ , но зарегистрированные абсолютные значения заболеваемости существенно различаются между различными исследованиями. Однако частота случаев у младенцев с сопоставимым риском, как в настоящем исследовании, составляет примерно 30%. ^{23, 25}

В настоящем исследовании гидролизованный сывороточный белок был использован в качестве основы для обеих исследуемых смесей в соответствии с недавними рекомендациями по питанию младенцев из группы риска, ²⁶ , что может объяснить тот факт, что встречались только легкие формы AD. ²⁷

Основная гипотеза этого исследования заключалась в том, что диетические пребиотики могут модулировать постнатальное развитие иммунной системы, изменяя кишечную флору. Хотя невозможно было получить образцы стула у всех младенцев, данные из подгруппы, предоставившей образцы стула, показали значительное влияние добавок GOS / FOS на количество бифидобактерий, аналогично исследованию, ранее проведенному в той же больнице ¹⁰ с использованием идентичных микробиологических методы. ²¹ Как и в предыдущих исследованиях, влияние добавок GOS / FOS на количество лактобацилл было менее выраженным. Однако в исследованиях с использованием молекулярных методов идентификации микробов эффект GOS / FOS на количество лактобацилл также был четко продемонстрирован. ²⁸

Накапливается доказательство того, что олигосахариды грудного молока (HMOS) могут влиять на иммунную систему не только через кишечную флору, но и путем прямого взаимодействия с иммунными клетками. Было показано, что HMOS влияет на продукцию цитокинов и активацию Т-клеток пуповинной крови человека in vitro. ²⁹ Кроме того, HMOS может влиять на образование комплексов тромбоциты-нейтрофилы и активацию ассоциированных нейтрофилов в крови здоровых добровольцев. Для образования этих комплексов требуются селектины, и на них может влиять HMOS. ³⁰ Таким образом, HMOS может служить противовоспалительным компонентом грудного молока и способствовать снижению частоты воспалительных заболеваний, таких как некротизирующий энтероколит, у детей, вскармливаемых грудью, по сравнению с младенцами, вскармливаемыми смесью. ³¹

Недавно были исследованы некоторые эффекты пищевых углеводов, таких как фруктаны (инулин и олигофруктоза), на иммунную модуляцию.В исследованиях на животных первые доказательства иммунной модуляции были показаны в первую очередь на активированных иммунных клетках в пятнах Пейера, включая продукцию IL-10 и цитотоксичность естественных клеток-киллеров, концентрацию секреторного IgA в подвздошной и слепой кишке и продукцию цитокинов спленоцитами. Было высказано предположение, что часть наблюдаемых эффектов может быть связана с взаимодействием пребиотиков с углеводными рецепторами на иммунных клетках. ³² В модели аллергии типа I у мышей аллергическая реакция после сенсибилизации овальбумином ослаблялась у животных, получавших пищевые короткоцепочечные галакто- и длинноцепочечные фруктоолигосахариды. ³³

Misikangas et al. ³⁴ описали связь с диетическим инулином и ростом аденомы на мышиной модели с множественной кишечной неоплазией. В отличие от этого единственного наблюдения, Пул-Зобель в обзоре 12 исследований (исследований на животных и людях) пришел к выводу, что фруктаны инулинового типа снижают риск рака толстой кишки. ³⁵ Научный комитет по питанию счел исследованную смесь GOS / FOS безопасной для детского питания до концентрации 0.8 г / 100 мл. ³⁶

Результаты настоящего исследования не позволяют делать выводы о механизме наблюдаемого эффекта на БА. Сложность структур HMOS указывает на то, что грудное вскармливание оказывает дополнительную поддержку помимо стимуляции кишечной флоры. Для сравнения, исследуемая смесь пребиотиков в основном активна благодаря своему влиянию на кишечную флору. Таким образом, настоящие данные показывают значительный эффект диетической смеси GOS / FOS на частоту возникновения БА в возрасте 6 месяцев.Хотя необходимы дальнейшие исследования, чтобы полностью понять механизм иммуномодулирующего действия изученных пребиотиков, данные подтверждают потенциальную роль пребиотиков в качестве диетических манипуляций для первичной профилактики аллергии в младенчестве.

Что уже известно по теме

• Кишечная флора играет важную роль в постнатальном развитии иммунной системы

• Диетические пребиотики (смесь галактоолигосахаридов и длинноцепочечных фруктоолигосахаридов) стимулируют кишечную флору, в которой преобладают бифидобактерии

Благодарности

Авторы благодарят доктора Кока, Laborzentrum Pohlheim, Германия, за микробиологический анализ, доктора Карло Гельметти за дерматологическую поддержку и господина Стэнли Нормана за редакционные советы.

ССЫЛКИ

1. ↵

   Холгейт ST . Эпидемия аллергии и астмы. Nature1999; 402 (6760 доп.): B2–4.

2. Ahberg N , Hesselmar B, Aberg B, et al. Рост заболеваемости астмой, аллергическим ринитом и экземой у шведских школьников в период с 1979 по 1991 год. Clin Exp Allergy1995; 25: 815–19.

3. ↵

   Кемп А , Бьорксен Б.Иммунное отклонение и гигиеническая гипотеза: обзор эпидемиологических данных. Pediatr Allergy Immunol, 2003; 14: 74–80.

4. ↵

   Björkstén B , Sepp E, Julge K, et al. Развитие аллергии и микрофлора кишечника на первом году жизни. J Allergy Clin Immunol, 2001; 108: 516–20.

5. ↵

   Кунц С , Рудлофф С. Байер В, и др. .Олигосахариды в материнском молоке: структурные, функциональные и метаболические аспекты, Ann Rev Nutr 2000; 20: 699–722.

6. ↵

   Boehm G , Шталь Б. Олигосахариды. В: Mattila-Sandholm T, ed. Функциональные молочные продукты. Кембридж: Вудхед, 2003: 203–43.

7. ↵

   Boehm G , Fanaro S, Jelinek J, et al. Концепция пребиотиков для детского питания. Acta Paediatr 2003; 92 (приложение 441): 64–7.

8. ↵

   Boehm G , Jelinek J, Stahl B, et al. Пребиотики в детских смесях. Дж. Клин Гастроэнтерол, 2004; 38: S76–9.

9. ↵

   Boehm G , Lidestri M, Casetta P, et al. Добавление смеси олигосахаридов к смеси коровьего молока увеличивает количество фекальных бифидобактерий у недоношенных детей. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed2002; 86: F178–81.

10. ↵

    Moro G , Minoli I, Mosca M, et al. Связанные с дозировкой бифидогенные эффекты галакто- и фруктоолигосахаридов у доношенных детей, вскармливаемых смесью. J Pediatr Gastroenterol Nutr, 2002; 34: 291–5.

11. Schmelze H , Wirth S, Skopnik H, et al. Рандомизированное двойное слепое исследование пищевой эффективности и бифидогенности новой детской смеси, содержащей частично гидролизованный белок, высокий уровень бета-пальмитиновой кислоты и неперевариваемые олигосахариды.J Pediatr Gastroenterol Nutr, 2003; 36: 343–51.

12. ↵

    Knol J , Scholtens B, Kafka C, et al. Микрофлора толстой кишки в смесях для младенцев с галакто- и фруктоолигосахаридами: больше похожа на младенцев, вскармливаемых грудью. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2005; 40: 36–42.

13. ↵

    Prescott SL . Развитие аллерген-специфической Т-клеточной памяти у атопических и нормальных детей.Lancet1999; 353: 186–200.

14. ↵

    Illi S , von Mutius E, Lau S, et al. Естественное течение атопического дерматита от рождения до 7 лет и связь с астмой. J Allergy Clin Immunol 2004; 113: 925–31.

15. ↵

    Köhler H , McCormick BA, Walker WA. Взаимодействие бактерий и энтероцитов: клеточные механизмы в здоровье и болезни. J Pediatr Gastroenterol Nutr, 2003; 36: 175–85.

16. ↵

    Kalliomäki M , Salminen S, Arvilommi H, et al. Пробиотики в первичной профилактике атопических заболеваний: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Lancet2001; 357: 1076–9.

17. ↵

    Харриган E , Rabinowitz LG. Атопический дерматит. Pediatr Allergy Immunol1999; 19: 383–9.

18. ↵

    Muraro A , Dreborg S, Halken S, et al. Диетическая профилактика аллергических заболеваний у детей грудного и раннего возраста. Часть II: Оценка методов исследований по профилактике аллергии и маркеры сенсибилизации. Определения и критерии диагностики аллергических заболеваний. Pediatr Allergy Immunol 2004; 14: 196–205.

19. ↵

    Kunz B , Oranje AP, Labreze L, et al. Клиническая проверка и рекомендации для индекса SCORAD: Консенсусный отчет Европейской целевой группы по атопическому дерматиту.Дерматология 1997; 195: 10–19.

20. ↵

    Аноним . Оценка степени тяжести атопического дерматита: индекс SCORAD. Консенсусный отчет Европейской целевой группы по атопическому дерматиту. Дерматология, 1993; 186: 23–31.

21. ↵

    Fanaro S , Vigi V, Chierici R, et al. Измерения фекальной флоры грудных детей с использованием интегрированной системы транспортировки и культивирования. Acta Paediatr, 2003; 92: 634–5.

22. ↵

    Ньюкомб RG . Двусторонние доверительные интервалы для одной пропорции: сравнение семи методов. Stat Med1998; 17: 857–72.

23. ↵

    Moore MM , Rifas-Shiman SL, Rich-Edwards JW, et al. Перинатальные предикторы атопического дерматита, возникающего в первые шесть месяцев жизни. Педиатрия, 2004; 113: 468–74.

24. ↵

    Bruno G , Milita O, Ferrara M, et al. Профилактика атопических заболеваний у младенцев из группы высокого риска (долгосрочное наблюдение). Allergy Proc, 1993; 14: 181–6.

25. ↵

    Laitinen K , Kalliomäki M, Poussa T, et al. Оценка диеты и роста у детей с атопической экземой и без: последующее исследование от рождения до 4 лет. Br J Nutr, 2005; 94: 565–74.

26. ↵

    Host A , Koletzko B, Dreborg S, et al. Диетические продукты, применяемые у младенцев для лечения и профилактики пищевой аллергии. Совместное заявление Комитета по гипоаллергенным смесям Европейского общества детской аллергологии и клинической иммунологии (ESPACI) и Комитета по питанию Европейского общества детской гастроэнтерологии, гепатологии и питания (ESPGHAN). Arch Dis Child, 1999; 81: 80–4.

27. ↵

    Berg von A , Koletzko S, Grübl A, et al. Влияние гидролизованной смеси коровьего молока на профилактику аллергии на первом году жизни: Немецкое исследование питания детей грудного возраста, рандомизированное двойное слепое исследование.Дж. Аллери Клин Иммунол, 2003; 111: 533–40.

28. ↵

    Bakker-Zierikzee AM , Alles M, Knol J, et al. Влияние детской смеси, содержащей смесь галакто- и фруктоолигосахаридов, на жизнеспособные Bifidobacterium animalis на микрофлору кишечника в течение первых 4 месяцев жизни. Br J Nutr, 2005; 94: 783–90.

29. ↵

    Eiwegger T , Stahl B, Schmitt J, et al. Олигосахариды человеческого молока и олигосахариды растительного происхождения стимулируют выработку цитокинов Т-клетками пуповинной крови in vitro. Педиатр Res2004; 56: 536–40.

30. ↵

    Bode L , Rudloff S, Kunz C, et al. Олигосахариды грудного молока снижают образование комплекса тромбоциты-нейтрофилы, что приводит к снижению экспрессии интегрина бета 2 нейтрофилов. Журнал J Leukoc Biol, 2004; 76: 820.

31. ↵

    van den Berg A , van Elburg RM, Teerlink T, et al. Рандомизированное контролируемое исследование энтерального приема глютамина у младенцев с очень низкой массой тела при рождении: концентрации аминокислот в плазме. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2005; 41: 66–71.

32. ↵

    Watzl B , Girrbach S, Roller M. Инулин, олигофруктоза и иммуномодуляция. Br J Nutr2005; 93 (приложение 1): S49–55.

33. ↵

    Garssen J , Vos P, M’Rabet L, et al. Пероральное воздействие смеси галактоолигосахаридов и длинноцепочечных фруктоолигосахаридов как новая концепция профилактики аллергии. Allergy Clin Immunol Int2005; (приложение 1): 572.

34. ↵

    Misikangas M , Pajari AM, Päivärinta E, et al. Стимулирование роста аденомы с помощью диетического инулина связано с увеличением циклина D1 и снижением адгезионных белков в слизистой оболочке мышей Min / +. J Nutr Biochem, 2005; 16: 402–9.

35. ↵

    Pool-Zobel B . Фруктаны типа инулина и снижение риска рака толстой кишки: обзор экспериментальных и человеческих данных. B J Nutr2005; 93 (приложение 1): S73–90.

36. ↵

    Научный комитет по пищевым продуктам . Дополнительное заявление об использовании устойчивых короткоцепочечных углеводов (олигофруктозил-сахароза и олигогалактозил-лактоза) в детских смесях и последующих смесях. SCF / CS / NUT / IF / 47 Final . 14 декабря 2001г.

Аллергия на запахи | DermNet NZ

Автор: Элейн Лютер, студентка медицинского факультета медицинского университета Росс, Барбадос, Вест-Индия. Медицинский редактор: д-р Хелен Гордон, Окленд, Новая Зеландия. Главный редактор DermNet NZ, адъюнкт A / профессор Аманда Окли, дерматолог, Гамильтон, Новая Зеландия. Копия отредактирована Гасом Митчеллом. Июль 2020.

Что такое аллергия на ароматизаторы?

Аллергия на ароматизирующие вещества — это аллергический контактный дерматит на ароматическое химическое вещество.

Ароматы и духи могут быть изготовлены из натурального экстракта или синтезированы. Они создают приятный запах или маскируют неприятный запах продукта.

Аллергия требует предварительной сенсибилизации к ароматизирующему химическому веществу. Последующий контакт кожи с химическим веществом вызывает реакцию гиперчувствительности замедленного типа (тип IV) в течение нескольких часов или дней после воздействия.

У кого аллергия на ароматизаторы?

Аллергия на запахи — распространенное явление, которым, как полагают, страдает около 1% взрослых [1].Показатели у детей и подростков составляют около 1,8%. Аллергия на запахи уступает только аллергии на никель как причина аллергического контактного дерматита. Однако частота соответствующих положительных реакций в отделениях дерматологии снижается из-за сокращения использования абсолю дубового мха в качестве ароматизатора.

Аллергический контактный дерматит столь же часто встречается у людей с атопическим дерматитом в анамнезе и без него.

Ароматы не ограничиваются парфюмерией и косметикой. Их также можно найти в:

• Продукты личной гигиены, такие как гель для душа, лосьоны, шампуни, кондиционеры, дезодоранты, детские салфетки и гигиенические прокладки
• Товары для дома, такие как стиральные порошки, кондиционер для белья, освежитель воздуха, чистящие средства, свечи, пот-пурри и туалетная бумага
• Ароматизаторы, добавляемые в еду и напитки, губные помады, бальзамы для губ и зубную пасту.
• К химическим веществам на рабочем месте могут также добавляться ароматизаторы для устранения неприятных запахов, например охлаждающие масла, гистологические растворители, промышленные растворители.
• Профессиональный дерматит, вызванный аллергией на ароматические вещества, встречается у парикмахеров, у поваров и пекарей из-за ароматизаторов и цитрусовых, а также у ароматерапевтов и массажистов из-за использования душистых натуральных масел.
• Лекарства и бальзамы для местного применения.
• Электронные сигареты.

Любой, кто использует или сталкивается с ароматными продуктами, со временем может стать к ним чувствительным.Аллергия на консорт хорошо известна.

Что вызывает аллергию на ароматизаторы?

В обзоре ароматов, проведенном Европейским научным комитетом по безопасности потребителей в 2011 году, было перечислено 82 вещества, которые были признаны контактными аллергенами, включая 54 синтетических химиката и 28 натуральных экстрактов. Двенадцать химических веществ и 8 натуральных экстрактов были перечислены как имеющие высокий риск сенсибилизации.

Среди наиболее распространенных — 15 ароматов, которые можно идентифицировать с помощью патч-тестов с бальзамом Перу, Смесью ароматов I (FM I) и Смесью ароматов II (FM II).Изоэвгенол является наиболее распространенным положительным аллергеном в смеси ароматов I, а гидроксиизогексил-3 ‑ циклогексенкарбоксальдегид (лираль) — в смеси ароматов II.

Патч-тестирование

Каковы клинические признаки аллергии на ароматизаторы?

Аллергия на ароматизирующие вещества проявляется в виде дерматита, который часто имеет полосатый рисунок при непосредственном контакте с аллергеном ароматизатора.

• У женщин чаще всего поражаются руки, лицо и шея.
• У мужчин чаще всего поражаются руки, лицо и голени.
• Ароматизатор может попасть в неожиданное место, например, через руки на лицо.
• Поражение подмышек характерно для обоих полов.
• Другие пораженные участки включают кожу перианальной области, если используются влажные салфетки из ароматизированной туалетной бумаги или препараты от геморроя.

Обычно аллергия на отдушки проявляется в виде чешуйчатых эритематозных бляшек.

• Могут быть отеки, пузырьки и пузыри.
• Продолжительное воздействие аллергена может привести к хроническому дерматиту с лихенификацией и раздражением.
• Дерматит вызывает зуд, а также может вызывать ожоги и покалывания.
• Дерматит может быть осложнен вторичной бактериальной инфекцией.

Аллергия на запахи может поражать ротовую полость (аллергический контактный стоматит), вызывая хейлит, гингивит, волдыри и эрозии или красный плоский лишай.

Фотоаллергия на парфюмерию стала менее распространенной в тех странах, где уменьшилось использование мускуса амбретты.

Области, подверженные аллергии на запахи

Как диагностируется аллергия на запахи?

Диагноз аллергии на ароматизаторы обычно требует подробного анамнеза пациента и подтверждается патч-тестом.

• Около 10% тех, кто проходит тестирование на пластырь, страдают аллергией на ароматизаторы.
• Актуальность положительного теста на пластырь должна определяться распределением сыпи и используемыми продуктами.
• Слабо положительный пластырь-тест может быть вызван раздражением ароматизирующим химическим веществом, а не истинной контактной аллергией.

Патч-тест диагностирует

Какие аллергены проверяют на аллергию на ароматизаторы?

Тестирование пластыря на аллергию на запахи обычно начинается с определения базовой серии аллергенов. Они должны включать бальзам Перу, Смесь ароматов I и Смесь ароматов II.

Перуанский бальзам добывается из дерева Myroxylon pereirae . Он перекрестно реагирует с другими ароматизаторами, и положительная реакция возникает примерно у 50% пациентов с аллергией на ароматизаторы.

Смесь ароматов Я могу идентифицировать 75% людей с аллергией на ароматизаторы при сочетании с бальзамом Перу. Это смесь восьми ароматов:

• Абсолют дубового мха
• Изоэвгенол
• Эвгенол
• Спирт циннамиловый
• Коричный альдегид
• Гидроксицитронеллол
• Гераниол
• Амилциннамальдегид.

Fragrance Mix II повышает чувствительность тестирования, поскольку представляет собой смесь еще шести ароматов:

• Lyral
• Цитраль
• Фарнезол
• Кумарин
• Цитронеллаль
• Альфа-гексилциннамальдегид.

Реакция смеси ароматов II

Серия ароматов

Пациента с аллергией на ароматизаторы можно протестировать с помощью 26 отдельных ароматов, требующих маркировки в Европейском Союзе. Пациент с положительным результатом теста на пластырь одного из членов серии ароматов может избежать этого аромата, прочитав этикетки. См. Приложение в конце.

Каковы пределы тестирования исправлений?

Даже если определенное ароматическое химическое вещество определено как вызывающее аллергию, может быть трудно избежать каждого продукта, который его содержит.

• Производители не могут перечислять какие-либо или все свои ингредиенты.
• Состав может быть изменен без уведомления потребителей.
• Аллерген может присутствовать в низкой концентрации, и ингредиенты должны указываться в регулируемом продукте только в том случае, если они превышают указанную пороговую концентрацию.

Может оказаться бесполезным тестировать ароматизаторы, которые никогда не маркируются, поскольку пациент не сможет определить, какие продукты содержат аромат, на который он отреагировал.

Какие еще тесты можно сделать?

Любой несмываемый продукт, который, как подозревает пациент, вызывает аллергию, может быть применен в качестве индивидуального пластыря для тестирования. Патч-тестирование не подходит для неразбавленных смываемых продуктов, поскольку они часто вызывают раздражение, если остаются на коже.

«Повторное тестирование открытого приложения» часто более практично и рентабельно, чем тестирование исправлений. Перед использованием нового ароматного несмываемого продукта пациент наносит каплю продукта на одну и ту же область предплечья или внутренней части плеча два раза в день в течение двух недель.При появлении сыпи продукт использовать нельзя.

Что такое дифференциальный диагноз аллергии на ароматизаторы?

Дифференциальная диагностика аллергии на запахи может включать:

Как лечится аллергия на ароматизаторы?

Лечение аллергии на ароматизаторы требует идентификации аллергена и, если возможно, его избегания. Лечение аллергического контактного дерматита, вызванного воздействием аллергена на ароматизирующие вещества, может включать:

Каковы исходы аллергии на ароматизаторы?

Ароматы распространены повсеместно, и их избегание может стать проблемой.

• У чувствительного человека может быть аллергия на несколько ароматов.
• Идентифицировать каждый продукт, который содержит аромат, практически невозможно — ингредиенты могут не указываться в списке и часто имеют несколько названий; Например, по данным Института контактного дерматита, у бальзама Перу 13 наименований.

Пациенту с аллергией на ароматизаторы лучше избегать продуктов без маркировки или продуктов, содержащих какой-либо ароматизатор.

Выберите продукты с пометкой «без запаха» (так называемые «продукты без запаха»), но они все равно могут включать маскирующие ароматизаторы.Продукты могут содержать неидентифицированный аромат, например, если в них указаны «ботанические», «травяные» или «натуральные» ингредиенты.

Пациент с аллергией на ароматизаторы может использовать тест открытого приложения для проверки любых новых продуктов.

ПРИЛОЖЕНИЕ: 26 ароматов, требующих маркировки в Европейском Союзе

26 ароматов в серии ароматов:

• Amyl cinnamal
• Циннамал
• Спирт циннамиловый
• Эвгенол
• Гераниол
• Гидроксицитронеллол
• Изоэвгенол
• Цитраль
• Цитронеллаль
• Кумарин
• Фарнезол
• Альфа-гексил внутренний
• Гидроксиизогексил-3-циклогексенкарбоксальдегид (Лираль)
• Альфа-амициннамиловый спирт
• Анисовый спирт
• Бензиловый спирт
• Бензилбензоат
• Бензилциннамат
• Бензилсалицилат
• Лимонен
• Бутилфенилметилпропионал
• Линалоол
• Метил 2-октиноат
• Альфа-изометилионон
• Evernia furfuracea (экстракт древесного мха) и Evernia prunastri (экстракт дубового мха)
• Сорбитана сесквиолеат.